D2蛋白酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立

目的：建立一种定量测定D2蛋白酶的双抗体夹心ELISA方法。方法：用棋盘滴定法确定捕获抗体、检测抗体的最佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围、检测限和定量限;检测该方法的准确性（回收率）、精密性和特异性,并与Bradford法检测结果进行比较。结果：包被抗体和捕获抗体的最佳包被效价分别为1∶4 000和1∶5 000;检测的线性范围为（28~1 180）μg/L,检测限为4.6μg/L。经方法学考核,批内、批间变异系数分别为5.64%和7.17%,回收率为92.44%~105.26%,与碱性蛋白酶、蛋白酶K等其他蛋白无交叉反应,与Bradford法检测结果具有良好的相关性。结论：该方法灵敏度高,重复性好,为后期D2蛋白酶规模发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法。

基于JAK/STAT通路EFhD2蛋白对肺癌大鼠T淋巴细胞免疫功能的调节作用研究

目的:探讨螺旋-环-螺旋拓扑结构域蛋白D2(EFhD2)基于Janus激酶/信号转导与转录激活子(JAK/STAT通路对肺癌大鼠T淋巴细胞免疫功能的调节作用。方法:气管内灌注致癌碘油液法建立肺癌大鼠模型,分为模型组(生理盐水)、sh-EFhD2组(shRNA-EFhD2重组腺病毒载体^(+)生理盐水)、EFhD2组(mimic-EFhD2重组腺病毒载体+生理盐水)、EFhD2-AG490组(mimic-EFhD2重组腺病毒载体^(+)JAK2抑制剂AG490),同法灌注碘油为对照组(生理盐水),均尾静脉注射,1次/周,共8周。检测各组外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)占比及CD4^(+)/CD8^(+),计算肺指数、脾脏指数,观察肺组织病理形态,检测肺组织中EFhD2、JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3、p-STAT3蛋白表达量。结果:病理组织学显示,模型组、sh-EFhD2组、EFhD2组、EFhD2-AG490组分别有13、10、15、11只诱发肺癌。与对照组相比,模型组、sh-EFhD2组、EFhD2组及EFhD2-AG490组外周血CD3^(+)、CD4^(+)占比、CD4^(+)/CD8^(+)及脾脏指数均降低,其中CD3^(+)、CD4^(+)占比:EFhD2组模型组和EFhD2-AG490组>sh-EFhD2组(P<0.05)。与对照组相比,模型组、sh-EFhD2组、EFhD2组及EFhD2-AG490组EFhD2、p-JAK2、p-STAT3蛋白相对表达量均升高,且EFhD2组>EFhD2-AG490组>模型组>sh-EFhD2组(P<0.05)。结论:抑制EFhd2蛋白表达可增强肺癌大鼠T淋巴细胞免疫功能,可能通过抑制JAK2、STAT3蛋白磷酸化发挥调控作用。

结直肠癌细胞中RAD18与FANCD2蛋白相互作用的实验研究

背景:范可尼贫血(FA)通路作为DNA交联损伤修复的主要通路在维持染色体稳定性方面起重要作用。近年来,有关FA通路在DNA损伤以及肿瘤发病机制等方面的研究越来越多。目的:研究人结直肠癌细胞株SW480中RAD18蛋白与FANCD2蛋白是否存在相互作用。方法:应用免疫共沉淀法沉淀抗原抗体复合物;应用蛋白质印迹法检测复合物中兔抗人FANCD2和RAD18蛋白的表达。将GST-RAD18和GST质粒分别转化到BL21细菌中诱导目的蛋白表达,提取细菌总蛋白,以GST琼脂糖珠结合GST-RAD18蛋白,与SW480细胞裂解液孵育后,加入兔抗人FANCD2抗体,进行蛋白质印迹检测。结果:在利用FANCD2抗体沉淀下来的复合物中可检测到RAD18蛋白,且在利用RAD18抗体沉淀下来的复合物中可检测到FANCD2蛋白;GST-RAD18蛋白作诱饵蛋白时可以捕获SW480细胞中的FANCD2蛋白。结论:RAD18蛋白与FANCD2蛋白在SW480细胞内存在相互作用;GST-RAD18蛋白与FANCD2蛋白也存在相互作用。

EFHD2蛋白的缺失对小鼠Sertoli细胞紧密连接蛋白的影响

目的研究EF-手域蛋白D2(EFHD2)在小鼠睾丸内的定位及表达,及EFHD2蛋白在Sertoli细胞中的缺失对紧密连接蛋白组分Occludin的影响。方法取成年小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑及睾丸组织提取总RNA和蛋白质,运用qRT-PCR和Western blot检测EFHD2在各器官组织中mRNA和蛋白质水平的差异性;运用免疫荧光和免疫组化技术,检测EFHD2在睾丸组织中的定位和表达。运用siRNA干扰技术降低Sertoli细胞中EFHD2来检测Occludin蛋白的表达。结果qRT-PCR显示EFHD2在睾丸中表达量最高;Western blot结果显示在睾丸组织中表达水平较高;间接免疫荧光和免疫组化结果显示该蛋白主要分布在Sertoli细胞内,与细胞骨架波形蛋白具有共定位,即明确该蛋白表达在Sertoli细胞。EFHD2蛋白表达降低后,Occludin蛋白表达也减少。结论EFHD2蛋白在睾丸组织中表达量相对较高,主要分布于睾丸Sertoli细胞中,与波形蛋白共定位,且能影响紧密连接蛋白Occludin的正常表达。提示EFHD2能促进和维持Sertoli细胞的细胞连接结构,为精子发生提供一个稳定的微环境。

circFAT1调节miR-211-5p/CCND2轴对糖尿病心肌病大鼠心肌损伤的影响

目的探讨circFAT1对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌损伤的影响及对miR-211-5p/细胞周期蛋白D2(CCND2)轴的调节机制。方法利用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素建立DCM大鼠模型,并随机分为DCM组、circ-NC组、circFAT1组、circFAT1+激动剂-NC组和circFAT1+miR-211-5p激动剂组,以喂食普通饲料的大鼠作为对照组,每组20只。实时PCR检测心肌组织中circFAT1、miR-211-5p、CCND2水平;Western blotting检测心肌组织CCND2蛋白表达;生化分析仪检测大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平;心脏超声检测大鼠心功能;HE和Masson染色观察心肌组织病理形态;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证circFAT1、miR-211-5p、CCND2之间的靶向关系。结果与对照组相比,DCM组circFAT1、CCND2 mRNA及蛋白表达,左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)水平降低(P<0.05),FBG、TC、TG、左心室舒张末期直径(LVEDd)、左心室收缩末期直径(LVEDs)、胶原容积分数(CVF)、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均升高(P<0.05);与DCM组相比,circFAT1组circFAT1、CCND2 mRNA及蛋白表达,LVEF、LVFS水平升高(P<0.05),FBG、TC、TG、LVEDd、LVEDs、CVF、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05);miR-211-5p激动剂逆转了circFAT1对DCM心肌损伤的缓解作用,且CCND2 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。结论circFAT1通过调控miR-211-5p/CCND2轴减轻DCM大鼠心肌组织损伤。

老年结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达变化和意义

目的探讨染色体凝缩蛋白复合物I(NCAP)D2、Krüppel样因子(KLF)5蛋白及跨膜受体蛋白Notch1 mRNA对老年结肠癌患者预后的预测价值。方法选取老年结肠癌患者85例,术中采集肿瘤组织和正常组织(距离肿瘤组织5 cm以上),Western印迹检测组织标本中NCAPD2、KLF5蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织标本中Notch1 mRNA表达。收集老年结肠癌患者的人口学特征和临床病理资料;以患者出院时日期为随访起点,进行3年随访,记录患者生存情况,分为预后良好组(生存),不良组(死亡)。结果老年结肠癌患者结肠癌组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于正常组织(P<0.01)。NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平在不同病理分期、分化程度、淋巴结转移情况、远端转移情况的结肠癌患者差异均有统计学意义(P<0.01);其中,浸润程度T3~T4、有淋巴结转移、有远端转移的结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于浸润程度T1~T2、无淋巴结转移、无远端转移的结肠癌患者(P<0.01);随着分化程度的降低,结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01)。不良组NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于预后良好组(P<0.01)。构建受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平对老年结肠癌患者预后均具有较高的预测价值(P<0.01);各指标联合检测对老年结肠癌患者预后的预测价值最高。结论老年结肠癌患者肿瘤组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA高表达,且与浸润程度、分化程度及转移情况密切相关,联合检测可用于患者预后评估。

miR-647、miR-122、KMT2D表达与前列腺癌临床病理特征及预后的相关性分析

目的探讨前列腺癌组织中微小RNA-647(miR-647)、微小RNA-122(miR-122)、组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)与其临床病理特征及预后的相关性。方法选取100例前列腺癌患者作为研究对象,均于术中采集肿瘤组织及癌旁正常组织标本送检,统计肿瘤组织及癌旁正常组织内miR-647、miR-122、KMT2D表达水平差异;分析miR-647、miR-122、KMT2D表达与肿瘤分期、肿瘤直径、淋巴结转移、微血管侵犯等的关系;并随访2年,比较复发转移与未复发转移患者miR-647、miR-122、KMT2D表达间差异。结果肿瘤组织内miR-647表达水平为(0.62±0.13),低于癌旁正常组织的(1.02±0.19),miR-122、KMT2D表达水平为(6.45±1.24)、(1.45±0.23),低于对照组的(1.23±0.22)、(0.89±0.12)(P<0.05);肿瘤分期Ⅲ期、肿瘤直径≥3 cm、有淋巴结转移及有微血管侵犯患者miR-647表达水平低于肿瘤分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径<3 cm、无淋巴结转移及无微血管侵犯患者,miR-122、KMT2D表达水平高于肿瘤分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径<3 cm、无淋巴结转移及无微血管侵犯患者(P<0.05);100例患者术后随访2年,共出现24例复发转移,复发转移率为24.00%(24/100);复发转移患者miR-647表达水平为(0.51±0.11),低于未复发转移患者的(0.73±0.15),miR-122、KMT2D表达水平为(8.42±1.39)、(1.89±0.32),高于未复发转移患者的(4.68±1.02)、(1.12±0.15)(P<0.05)。结论前列腺癌组织内miR-647、miR-122、KMT2D存在不同程度表达,均与肿瘤分期、肿瘤直径及淋巴结转移等关系密切,且可明显影响患者预后,还需临床高度重视。

FTO介导m6A修饰的PRKD2调节SIRT1/HIF-1α通路抑制糖尿病肾病足细胞损伤的机制研究

目的探究脂肪含量和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)和丝氨酸-苏氨酸激酶蛋白激酶D2(serine-threonine kinase protein kinase D2,PRKD2)在糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)进展中的调控作用和调节机制。方法采用35 mmol/L葡萄糖对足细胞(MPC5细胞)进行高糖刺激24h构建DKD体外模型。采用FTO过表达载体(pcDNA-FTO)和PRKD2过表达载体(pcDNA-PRKD2),或空载体(vector)转染高糖诱导的MPC5细胞。通过RT-qPCR检测FTO和PRKD2过表达效率;MeRIP检测PRKD2 mRNA的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰水平;ELISA检测Caspase-3活性、IL-6,TNF-α和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)分泌量;流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot评估FTO和PRKD2蛋白水平,以及SIRT1/HIF-1α通路关键蛋白表达水平;Pearson分析FTO和PRKD2水平的相关性。结果与无高糖诱导对照组比较,高糖诱导的足细胞中FTO蛋白(0.51±0.04 vs 1.00±0.03)和PRKD2蛋白(0.45±0.03 vs 1.01±0.04)水平显著下调,差异具有统计学意义(t=13.17,16.76,均P<0.001)。高糖诱导的足细胞中FTO蛋白水平和PRKD2蛋白水平呈正相关(r2=0.7051,P<0.001)。与vector组相比,pcDNA-FTO组PRKD2 mRNA的m6A水平(0.56±0.09 vs1.01±0.13)降低,PRKD2 mRNA水平(3.16±0.14 vs 1.03±0.02)显著升高,差异具有统计学意义(t=51.37,11.82,均P<0.001)。与control组(IL-6:512.76±61.85 pg/ml,TNF-α:28.17±2.83 pg/ml,MCP-1:157.31±17.69 pg/ml)和vector组(IL-6:498.41±87.51 pg/ml,TNF-α:26.35±5.47 pg/ml,MCP-1:165.52±16.87 pg/ml)比较,pcDNA-PRKD2组IL-6(301.86±21.85 pg/ml),TNF-α(11.06±4.12 pg/ml),MCP-1分泌量(81.45±9.03pg/ml)显著减少,差异具有统计学意义(F=7.51,10.47,61.97,均P<0.01)。与control组(Caspase-3:689.65±79.5U/L,细胞凋亡率:22.31%±2.69%)和vector组(Caspase-3:715.91±113.58 U/L,细胞凋亡率:21.07%±3.28%)比较,pcDNA-PRKD2组Caspase-3活性(437.64±104.76 U/L)和细胞凋亡率(8.41%±3.15%)下降,差异具有统计学意义(F=2.35,79.13,均P<0.01)。与control组(SIRT1:1.01±0.05,HIF-1α:1.03±0.07)和vector组(SIRT1:0.97±0.05,HIF-1α:1.02±0.03)相比,pcDNA-PRKD2组SIRT1蛋白(3.51±0.15)水平升高,HIF-1α蛋白(0.37±0.07)水平降低,差异具有统计学意义(F=31.54,8.31,均P<0.01)。结论FTO介导m6A修饰的PRKD2通过SIRT1/HIF-1α通路抑制高糖诱导的足细胞炎症反应和细胞凋亡。

磁共振联合血清KMT2D检测在膀胱癌诊断中的临床意义

目的分析磁共振联合血清组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)检测对膀胱癌的诊断价值。方法以本院154例膀胱癌患者作为膀胱癌组(BC组),根据临床金标准分为肌层浸润性膀胱癌94例(MIBC组)和非肌层浸润性膀胱癌60例(NMIBC组)。对照组为同期100例健康体检者。比较各组血清KMT2D表达水平差异,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清KMT2D对MIBC膀胱癌诊断价值。磁共振、血清KMT2D及二者联合诊断与临床“金标准”的一致性采用Kappa检验。结果BC组血清KMT2D表达水平低于对照组,MIBC组KMT2D表达水平低于NMIBC组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清KMT2D诊断MIBC膀胱癌的截断值为0.68,曲线下面积为0.855。磁共振检查诊断MIBC膀胱癌与临床“金标准”检查一致性较好(Kappa=0.744,P<0.05)。磁共振检查联合血清KMT2D诊断MIBC膀胱癌与临床“金标准”结果相比的Kappa值为0.932(P<0.05)。磁共振检查联合血清KMT2D诊断MIBC膀胱癌的灵敏度、准确率及特异度优于单独诊断。结论磁共振联合血清KMT2D检测对MIBC膀胱癌诊断价值较高,有助于术前明确膀胱癌浸润程度。

细胞周期蛋白D2同源模建及其与CDKs抑制剂对接研究

细胞周期蛋白D2(CyclinD2,CCND2)在细胞中的异常表达会诱发肿瘤等疾病,设计高选择性CCND2药物对抑制肿瘤具有重要意义。本文选用PDB数据库中与CCND2一级序列同源性最高的3G33为模板蛋白建模,通过Loop环区能量优化最终得到具有较高合理性和可信度的三维蛋白结构模型,最优模型VerifyScore为100.920,预测获得10个可能的活性位点。构建药物小分子的最低能量结构,将小分子对接至蛋白活性位点,根据对接模型确定不同药物小分子与蛋白活性位点的相互作用方式,筛选细胞周期依赖性激酶(CDKs)类似物作为药物小分子配体,实验结果对进一步研究CyclinD2的结构、功能具有理论指导意义,也为相关疾病的临床治疗奠定了理论基础。

基于生物信息学分析CCND2在甲状腺乳头状癌中的表达及其对免疫浸润的影响

目的探讨凋亡相关基因细胞周期蛋白D2(CCND2)在甲状腺乳头状癌中的表达及其与临床病理的联系。方法通过公共数据库TCGA、TIMER 2.0和UALCAN获取CCND2的表达情况;采用ROC曲线对甲状腺乳头状癌(PTC)组织和癌旁组织进行鉴别;使用基因本体功能注释(GO)对CCND2相关差异基因(DEGs)进行富集分析;使用TIMER数据库和CIBERSORT数据源分析甲状腺癌中CCND2的肿瘤免疫浸润情况;采用RT-qPCR和Western blot检测人甲状腺正常细胞系Nthy-ori-3-1和人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1、BCPAP中CCND2表达量;采用免疫组织化学SABC法检测PTC及癌旁组织中CCND2表达,并探讨其与临床病理的联系。结果TCGA、TIMER2.0、UALCAN分析显示,与癌旁组织相比,CCND2 mRNA在甲状腺癌中高表达(P<0.001),并且与Stage分期、性别、年龄、病理亚型及区域淋巴结受累情况有关(P<0.05);ROC结果显示,截断值为4.983时,CCND2的灵敏度、特异度和准确度分别为83.6%、94.9%和78.5%;GO分析表明CCND2的差异表达与免疫功能有关;TIMER数据库显示,CCND2表达与B细胞、CD4^(+)T细胞、巨噬细胞呈正相关(partial.cor>0,P<0.001),而与CD8^(+)T细胞呈负相关(partial.cor<0,P<0.01)。CIBERSORT数据库显示,CCND2表达与B细胞记忆渗透水平、CD4^(+)T细胞记忆激活状态、M2巨噬细胞表达水平、肥大细胞静息状态和肥大细胞激活状态显著相关(P<0.05)。RT-qPCR及Western blot结果显示,CCND2在细胞系TPC-1、BCPAP中的表达量高于Nthy-ori-3-1(P<0.01)。免疫组织化学结果显示,CCND2在PTC中的阳性表达高于癌旁组织(P<0.05)且与肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05)。结论PTC中CCND2表达上调可能与肿瘤进展及免疫细胞浸润密切相关。

FANCD2、PALB2表达水平与非小细胞肺癌临床特征及预后的关系

目的探讨范科尼贫血D2蛋白(FANCD2)、乳腺癌易感基因2定位协作蛋白(PALB2)表达水平与非小细胞肺癌(NSCLC)临床特征及预后的关系。方法选取2017年11月—2019年10月成都市第二人民医院收治的194例NSCLC患者作为研究对象。将手术过程中取得癌组织标本作为NSCLC组,将对应的癌旁组织标本作为癌旁组,每组194例。采用免疫组织化学法检测FANCD2、PALB2在NSCLC患者癌组织及癌旁组织中的表达情况;分析FANCD2、PALB2表达与NSCLC患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用Cox比例风险模型分析探讨NSCLC患者预后的影响因素。结果NSCLC组FANCD2、PALB2阳性率高于癌旁组(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,NSCLC患者癌组织中FANCD2蛋白与PALB2蛋白呈正相关(rs=0.486,P<0.05)。不同年龄、性别、吸烟、组织学分型、肿瘤直径患者FANCD2、PALB2阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期,低分化,有淋巴结转移患者高于TNM分期为I、Ⅱ期,中/高分化,无淋巴结转移患者(P<0.05)。多因素逐步Cox回归分析结果显示:TNM分期Ⅲ、Ⅳ期[H^R=4.125,(95%CI:2.187,10.035)]、低分化[H^R=3.146,(95%CI:3.115,9.264)]、淋巴结转移[H^R=4.124,(95%CI:3.005,13.145)]、FANCD2阳性[H^R=5.146,(95%CI:3.784,12.689)]、PALB2阳性[H^R=4.563,(95%CI:2.845,7.398)]是NSCLC患者复发的影响因素(P<0.05)。多因素逐步Cox回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ/Ⅳ期[H^R=3.689,(95%CI:2.963,11.254)]、低分化[H^R=2.167,(95%CI:1.998,5.996)]、淋巴结转移[H^R=5.648,(95%CI:3.552,12.953)]、FANCD2阳性[H^R=3.886,(95%CI:2.958,12.775)]、PALB2阳性[H^R=4.633,(95%CI:1.968,11.547)]是NSCLC患者预后的影响因素(P<0.05)。FANCD2阳性患者与阴性患者生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05);PALB2阳性患者与阴性患者的生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FANCD2、PALB2在NSCLC患者癌组织中呈高表达,与TNM分期、分化程度、淋巴结转移密切相关,可作为辅助评估患者预后和复发的潜在标志物。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D在前列腺癌中的研究进展

代谢重编程和表观遗传在前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)的发生发展中十分重要。组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)是一种重要的表观遗传因子,它可以通过甲基化组蛋白H3赖氨酸4(H3K4)促进全基因组的可及性和转录。外显子组测序表明,KMT2D是许多类型癌症中最常见的突变基因之一。KMT2D在不同类型癌症中的作用不同,既可作为抑癌基因也可作为癌基因,KMT2D在中国PCa患者中高突变和过表达。对KMT2D在PCa中作用的相关研究进行回顾,可以熟悉KMT2D在PCa中的调控过程,对PCa的精准靶向治疗和获得更好的疾病预后具有重要意义。

杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D2基因的克隆及序列分析

根据莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、Oryza sativa、Chlorella vulgaris以及Me-sostigma viride等真核生物的psbD基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用TRIzol试剂提取杜氏盐藻(Dunaliella salina)细胞的总RNA,通过RT-PCR,得到杜氏盐藻cDNA片段的长度大约为1 000bp.该序列的PCR产物经T-A克隆并测序分析以及测序结果推导成氨基酸序列,Blast同源性分析表明所克隆的基因为杜氏盐藻psbD基因,编码杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心D2蛋白,该序列已递交GenBank(GenBank登录号为:DQ074450).编码的氨基酸序列,同源性依次为:Chlamydomonas reinhardtii92%,Nephroselmis olivacea88%,Pinus thunbergii88%,Am-borella trichopoda88%,Chlorella vulgaris88%.通过密码子偏爱性分析表明,psbD基因存在明显的密码子偏爱性,其(A+T)含量明显高于(G+C)含量.

沙蚕消化道D2菌株胞外蛋白酶对EMT6细胞增殖的影响

目的研究沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶对鼠乳腺癌细胞EMT6增殖的影响。方法选用鼠乳腺癌细胞EMT6作为靶细胞，用0．0043-43μmol／L浓度的沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶（D2蛋白酶），通过体外细胞培养法进行细胞增殖抑制检测，测其吸光度（OD）值，计算细胞增殖抑制率，与阳性对照组（紫杉醇组）比较。结果实验组OD值低于空白对照组，且存在时间和剂量依赖关系。结论沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶对鼠乳腺癌细胞EMT6的增殖存在抑制作用，显示出一定的抗肿瘤活性。

沙蚕消化道D2菌株胞外蛋白酶对EMT6细胞增殖的影响

目的研究沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶对鼠乳腺癌细胞EMT6增殖的影响。方法选用鼠乳腺癌细胞EMT6作为靶细胞，用0．0043～43μmol／L浓度的沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶（D2蛋白酶），通过体外细胞培养法进行细胞增殖抑制检测，测其吸光度（OD）值，计算细胞增殖抑制率，与阳性对照组（紫杉醇组）比较。结果实验组OD值低于空白对照组，且存在时间和剂量依赖关系。结论沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶对鼠乳腺癌细胞EMT6的增殖存在抑制作用，显示出一定的抗肿瘤活性。

共培养体系中IL-15通过激活NK细胞ULBP1/NKG2D信号抑制食管癌细胞的迁移和侵袭

目的:探讨IL-15对食管癌细胞和自然杀伤(NK)细胞共培养体系中NK细胞活性以及对食管癌细胞迁移和侵袭的影响和机制。方法:qRT-PCR和Western blot检测人正常食管上皮细胞(HEEC)和食管癌细胞系TE-1中IL-15水平。TE-1与NK细胞共培养,共培养体系分为对照组(无处理)、IL-15组(0.2、0.4、0.8μg/ml的IL-15)、IL-15+anti-NKG2D组[UL16结合蛋白/自然杀伤组蛋白2D(ULBP1/NKG2D)的阻断剂anti-NKG2D联合IL-15(0.8μg/ml)]、anti-NKG2D组、IL-15+anti-ASIALO-GM1组[NK细胞抑制剂anti-ASIALO-GM1联合IL-15(0.8μg/ml)]及anti-ASIALO-GM1组。细胞划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测TE-1细胞的迁移和侵袭能力,CCK-8法检测NK细胞增殖率,Western blot检测各组NK细胞表面ULBP1/NKG2D表达,免疫共沉淀技术检测NKG2D与ULBP1的相互作用。结果:TE-1细胞中IL-15水平低于HEEC细胞(P<0.05)。0.2、0.4、0.8μg/ml IL-15处理共培养体系提高NK细胞增殖率,但降低TE-1细胞的迁移率和侵袭率(均P<0.05)。在TE-1与NK细胞的共培养体系中,IL-15组(0.8μg/ml)NK细胞膜蛋白ULBP1和NKG2D水平较对照组上调(均P<0.05);anti-NKG2D抑制了NKG2D表达,并抑制了NKG2D与ULBP1的相互作用,与IL-15(0.8μg/ml)组相比,IL-15+anti-NKG2D组NKG2D表达水平和NK细胞增殖率均降低(均P<0.05),但TE-1细胞的迁移率和侵袭率升高(均P<0.05),且NK细胞抑制剂anti-ASIALO-GM1与anti-NKG2D的作用效果一致。结论:IL-15通过激活细胞表面ULBP1/NKG2D信号促进NK细胞活性,从而抑制食管癌细胞的迁移和侵袭。

哈尔滨地区铜绿假单胞菌外膜蛋白D2与亚胺培南耐药关系研究

目的研究哈尔滨地区铜绿假单胞菌外膜蛋白D2(OprD2)含量改变与亚胺培南(IMP)耐药之间关系。方法采用超声破碎方法提取42株对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌OprD2,进行SDS-PAGE电泳,利用水杨酸盐抑制试验确定OprD2的位置,通过凝胶分析软件分析OprD2的相对含量,并与敏感株进行对比分析。结果42株对IMP耐药的铜绿假单胞菌中,OprD2完全缺失的有11株,减少的有17株,与敏感株相比,OprD2的相对含量明显降低。结论哈尔滨地区铜绿假单胞菌OprD2含量的减少或缺失是其对IMP耐药的主要原因之一。

cyclin D2、Bcl-2在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达意义

目的研究细胞周期蛋白D2(cyclin D2)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达意义。方法采用回顾性分析,观察对象为2017年3月至2022年3月入东莞市人民医院就诊的80例DLBCL患者与20例淋巴组织反应性增生(RLH)患者,分别设定为研究组与对照组,两组患者均经术后病理检查确诊,术前未行任何治疗。选取免疫组织化学法测定两组cyclin D2、Bcl-2蛋白表达情况,对cyclin D2、Bcl-2表达之间的相互关系及与DLBCL患者病理特征相关性进行分析。结果研究组cyclin D2蛋白阳性率、Bcl-2蛋白阳性率分别为33.75%(27/80)、62.50%(50/80),对照组cyclin D2蛋白阳性率、Bcl-2蛋白阳性率分别为5.00%(1/20)、10.00%(2/20);研究组cyclin D2蛋白阳性率、Bcl-2蛋白阳性率较对照组更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。cyclin D2蛋白表达、Bcl-2蛋白表达与DLBCL患者的免疫分型、Ann Arbor分期有明显相关性(P<0.05),与组织类型、肿瘤部位、性别及年龄无明显相关性(P>0.05)。DLBCL中cyclin D2与Bcl-2的表达呈正相关(r=1.000,P<0.05)。结论cyclin D2、Bcl-2在DLBCL中呈高表达,可能参与了DLBCL的发生及发展,两者具有协同作用,可辅助评价生物恶性程度。