根癌农杆菌介导D32基因转化烟草的条件研究

以烟草品种中烟99的无菌苗叶片为转化受体材料,通过根癌农杆菌C58C1介导对大豆中克隆的抗逆性基因D32进行转化,获得了抗卡那霉素的再生植株,并对转化植株进行了PCR检测.结果表明,烟草叶片分化和再生的卡那霉素选择压力为150mg/L;外植体预培养对转化率有影响;优化的烟草转化方法是:经预培养2d的外植体用OD600值为0.7的菌液侵染5min,共培养2d后用无菌水冲洗5～6次,羧苄青霉素(Cb)和头孢霉素(Cef)浓度为400mg/L的脱菌液浸泡120min,超净工作台上吹风60min,于筛选分化培养基生长50d,可获得26.7%卡那抗性苗.对抗性植株经PCR检测证明,外源D32基因已初步整合到烟草基因组中.