β-tubulin在肾脏D5R与CCKBR相互调节中的重要作用

目的探讨β-tubulin在胆囊收缩素B受体(cholecystokinin B receptor,CCKBR)和多巴胺D5受体(dopamine D5 receptor,D5R)相互作用的调节机制。方法选用正常人和高血压患者肾脏近曲小管细胞(renal proximal tubular cells,RPTC),各分为3组:CCKBR激动剂(gastrin)处理组;D5R激动剂(fenoldopam)处理组;gastrin+微管抑制剂(nocodazole)组。免疫荧光法测定β-tubulin、CCKBR和D5R的定位,免疫印迹方法检测CCKBR、D5R和Na+,K+-ATP酶的表达。结果 Gastrin处理正常RPTC后D5R表达显著增加(P<0.05),Na+,K+-ATP酶的表达降低(P<0.05),fenoldopam同样能够刺激CCKBR表达增加(P<0.05),但nocodazole预处理后再加入gastrin并不能够增加D5R的表达,也不能降低Na+,K+-ATP酶的表达。高血压患者RPTC中CCKBR和D5R的相互作用以及Na+,K+-ATP酶的表达变化并不明显。免疫荧光结果显示,正常RPTC中CCKBR和D5R蛋白能够被诱导转移到细胞膜上,微管抑制剂能够显著阻断转移过程,但高血压患者RPTC中β-tubulin杂乱无章,CCKBR和D5R蛋白也没能有效转移到细胞膜上。结论 tubulin通过促进CCKBR和D5R从细胞质向细胞膜转运,从而发挥生物学功能,可能在二者相互作用和钠水代谢中起到重要作用。

mtr-miR156a在奶牛乳腺上皮细胞的靶基因筛选鉴定及其调控奶牛乳蛋白生物合成的研究

本试验旨在探究苜蓿miR156a(mtr-miR156a)在奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)的靶基因及其对乳蛋白合成的调控作用,为进一步研究外源性植物微小RNA(miRNA)调控奶牛乳蛋白合成提供研究基础。首先通过联川生物云平台、TargetScan和RNAhybrid在线网站预测和筛选出mtr-miR156a调控蛋白合成的候选靶基因,然后构建候选靶基因丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A 56 kDa调节亚基delta亚型(PPP2R5D)和磷酸肌醇3激酶调控亚单位2(PIK3R2)的重组质粒,并通过双荧光素酶验证鉴定出靶向基因,最后运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测过表达mtr-miR156a对BMECs乳蛋白合成相关基因表达以及酪蛋白编码基因mRNA和蛋白表达的影响。结果表明:1)双荧光素酶报告基因和qRT-PCR鉴定了mtr-miR156a可以靶向结合PPP2R5D和PIK3R2并极显著降低其表达水平(P<0.01)。2)与mimic NC相比,过表达mtr-miR156a极显著降低丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)、核糖体蛋白S6激酶beta-1(S6K1)、真核翻译起始因子4B(eIF4B)、核糖体蛋白S6(RPS6)、结节性硬化症复合物亚基2(TSC2)、脑富集Ras同源物(RHEB)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和真核翻译起始因子4E(eIF4E)相对表达量(P<0.01),极显著提高蛋白激酶B1(Akt1)和真核翻译起始因子4E结合蛋白1(EIF4EBP1)相对表达量(P<0.01)。3)与mimic NC处理相比,过表达mtr-miR156a极显著提高酪蛋白alpha S1(CSN1S1)、酪蛋白alpha S2(CSN1S2)、酪蛋白beta(CSN2)和酪蛋白kappa(CSN3)相对表达量(P<0.01)。4)ELISA结果表明,与mimic NC处理相比,过表达mtr-miR156a显著提高BMECs培养液上清液中α酪蛋白和β酪蛋白含量(P<0.05),极显著提高上清液中κ酪蛋白含量(P<0.01)。综上所述,mtr-miR156a通过靶向结合位于磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/mTOR信号通路的PPP2R5D和PIK3R2,调控PI3K/Akt/mTOR信号通路PDK1、S6K1、eIF4B、RPS6、Akt1、TSC2、RHEB、mTOR、eIF4E和EIF4EBP1等基因表达,上调BMECs中编码酪蛋白基因mRNA和蛋白表达水平,参与BMECs中酪蛋白的调控。

1961-2007年三峡库区极端降水指数R5d的变化规律及其未来情景预估

利用1961-2007年三峡库区17个气象站的日降水资料,研究了近47a来三峡库区极端降水指数——最大连续5d降水(R5d)的变化规律,通过评估用于政府间气候变化委员会第四次评估报告的9个新一代气候系统模式产品对三峡库区最大连续5d降水的模拟能力,筛选出5个模拟较好的模式(GFDL-CM2.1、INM-CM3.0、IPSL-CM4、MIROC3-H和NCAR-PCM1)进行组合,并考虑模式的偏差,预估3种排放情景(高排放SRESA2、中等排放SRESA1B和低排放SRESB1)下21世纪三峡库区最大连续5d降水的可能变化。结果表明,近47a来,三峡库区最大连续5d降水量的线性变化趋势不显著,但有显著的2a和5a左右的年际变化周期;从逐年代变化来看,20世纪60年代和2001-2007年偏少,70年代、80年代和90年代偏多。与目前气候(1980-1999年)相比,21世纪3种不同排放情景下三峡库区最大连续5d降水量均可能增加,尤其是21世纪后期比前、中期增加更显著;21世纪前期,3种情景下将增加0.5～5.4mm,中期将增加9.3～14.8mm,后期将增加12.7～26.4mm,整个21世纪将增加9.5～14.7mm。

多巴胺D5受体通过抑制氧化应激对扩张型心肌病的调节作用

目的探讨多巴胺D5受体是否会通过抑制氧化应激来影响扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy)的发生发展。方法建立心脏特异表达人多巴胺D5受体突变基因F173L(α-MHC-h D5F173L)和正常基因(α-MHC-h D5WT)转基因小鼠。用3月龄小鼠,首先检测比较转基因小鼠心脏内ROS的产量和NOX2的表达量。然后对α-MHC-h D5F173L小鼠通过皮下给NADPH氧化酶的抑制剂罗布麻宁(Apocynin)4周,同时给PBS作为对照组,然后检测各项心肌病相关指标。同时构建人多巴胺D5受体突变基因(h D5F173L)和正常多巴胺D5受体基因(h D5WT)的大鼠心肌细胞(H9C2),检测两者在基础条件下ROS产量的变化。结果α-MHC-h D5F173L转基因小鼠的NADPH氧化酶的活性和NOX2蛋白的表达量均明显高于野生型α-MHC-h D5WT小鼠,罗布麻宁能显著改善α-MHC-h D5F173L转基因小鼠的心脏功能。H9C2-h D5F173L大鼠细胞系NOX2的表达量及ROS产量高于H9C2-h D5WT对照细胞。结论多巴胺D5受体可能通过抑制氧化应激而防止扩张型心肌病的发生发展。

PPP2R5D基因突变相关性癫痫一例

1病例介绍患儿,男,9月6 d,间断抽搐2个月。发作形式以局灶性发作为主,表现为突发双眼发呆、左眼眼眶发红,流眼泪,流涎,伴(或不伴)左上肢抖动,伴(或不伴)意识丧失,严重时进展为全面性发作、丛集性发作(1天多至20余次,多数为每次数十秒)、2次癫痫持续状态发作(最长可达2 h),呕吐、腹泻或发热诱因时抽搐增多。既往史:出生后4个月抬头不稳,诊断“发育迟缓”,多次外院行康复锻炼。出生史:患儿系第4胎第2产,孕38周顺产,出生体重3400 g,Apgar评分不详,否认窒息抢救史。

PW11O39Mn（Ⅱ）（H2O）5-/D301R异相体系的可见光催化性能研究

为了解决均相keggin型锰取代杂多阴离子PW11O39Mn(Ⅱ)(H2O)5-[PW11Mn]光催化剂在水溶液中难以回收利用的问题,选用D301R弱碱性阴离子交换树脂对其进行吸附,制备了PW11Mn/D301R光催化材料。通过有机染料亚甲基蓝(MB)的可见光降解反应考察了PW11Mn/D301R材料的光催化性能。实验表明,PW11Mn/D301R在可见光照射下对MB有较高的光催化降解活性。此外,还系统考察了溶液中有其他阴离子存在时对光催化降解效果的影响,并提出了作用机制。本研究为高效利用太阳能去除水体有机染料污染物提供了一条新颖途径。

PPP2R5D基因变异所致常染色体显性遗传性智力障碍35型1例并文献复习

目的通过分析常染色体显性遗传性智力障碍35型患儿的临床及遗传学特点以提高对该病的认识。方法报道北京儿童医院2018年7月收治的1例常染色体显性遗传性智力障碍35型患者的临床资料、遗传学特点, 并进行文献复习。结果先证者男性, 1岁3个月龄, 表现为发育落后, 低热, 患儿面容特殊(额部突出、鼻梁塌平), 张口呼吸, 肌张力减低。头颅磁共振成像示侧脑室增宽、透明隔间腔及Vergae腔形成、中间帆腔囊肿。基因检测结果示PPP2R5D基因位点新生突变(NM_006245:c.1258G>A, p.E420K)。检索到既往共10篇国外文献报道31例常染色体显性遗传性智力障碍35型患者, 包括本例共32例。32例中临床表现为智力发育迟缓(32例;100.0%)、运动发育迟缓(26例;81.3%)、巨头畸形(26例;81.3%)、癫痫(8例;25.0%), 此外有特殊面容、震颤、眼科异常、骨骼发育异常、心脏畸形等表现。PPP2R5D基因突变均为新生错义突变, 常染色体显性遗传。结论常染色体显性遗传性智力障碍35型主要临床表现为发育迟缓/智力障碍、严重的语言发育落后、巨头畸形、肌张力减低、特殊面容。PPP2R5D基因新生错义突变为本病的遗传学病因。

一例由PPP2R5D基因变异引起的神经发育迟缓

目的使用全外显子组测序技术对一例发育迟缓的婴儿进行基因检测,查明该患儿致病原因。方法应用全外显子组测序技术对其进行致病基因筛查,结合临床表型资料,锁定候选基因致病位点,利用Sanger测序技术对先证者及其家系成员完成致病变异验证。结果发现先证者存在PPP2R5D基因c.592G>A(p.E198K)杂合变异,该变异为已知致病变异,根据相关文献报道及患儿临床症状,诊断该患儿的致病原因为PPP2R5D基因c.592G>A变异引起的。结论Jordan综合征是一种罕见的遗传疾病,应用全外显子组测序技术能够快速发现PPP2R5D基因变异,有助于该疾病的临床诊断和辅助治疗及该家系的遗传咨询及产前诊断。