加味芪黄饮调节TLR4/MyD88/NF-kB通路保护DKD模型大鼠肾功能的研究

目的:1以动物实验研究加味芪黄饮对糖尿病肾病大鼠蛋白尿、肾脏损害的作用。2探讨并阐明加味芪黄饮对大鼠肾组织Toll样受体4/MYD88/NF-κB信号通路的影响作用。方法:将85只大鼠予普通饲料适应性喂养1周后,按随机数字表法分为6组:正常组、DKD模型对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、西药治疗组、分别给每只大鼠造模,成功后第2天起开始药物干预,中药高中低剂量组分别给予不同剂量芪黄饮;西药治疗组:每日灌胃氯沙坦钾30mg/kg;正常组、DKD模型对照组,每日各予等量的生理盐水灌胃。实验结束后,切除右肾光镜下观察各组肾组织结构病理变化。结果:与模型组相比,各治疗组均降低DKD模型大鼠尿蛋白、BUN、Cr的水平,不同程度的改善DKD模型大鼠肾组织病理变化,显著降低TLR4、My D88、MCP-1 NF-k B的表达,其中以中药高剂量组最为明显。结论:加味芪黄饮对糖尿病肾病具有一定的治疗作用,其机制可能与抑制肾组织TLR4、My D88、MCP-1 NF-k B的表达有关。

基于TLR4/MyD88/NF-KB通路探讨中医超声药透电疗改善脑缺血大鼠炎症反应的实验研究

目的探讨中医超声药透电疗仪对脑缺血大鼠炎症反应的影响。方法建立大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、中药片组、空白片+电疗组、中药片+电疗组、丁苯酞组,造模24 h后连续给予相应治疗1周。治疗后,评估大鼠的神经功能评分,TTC计算脑梗死体积百分比;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素—1β(Interleukin-1β,IL-1β)水平;免疫组化和Western blotting法检测大鼠梗死侧皮质TLR4、MyD88、NF-KBp65的表达。结果与模型组比较,中医超声药透电疗可改善MCAO大鼠神经功能缺损症状,减轻脑梗死体积百分比,差异有统计学意义(P<0.05),降低皮质区TLR4、MyD88、NF-KBp65的表达及血清炎症因子TNF-α、IL-1β的释放,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中医超声药透电疗能够改善脑缺血大鼠的炎症反应,其机制可能与TLR4/MyD88/NF-KB通路有关。

健脾养血祛风方对树突状细胞TLRs/MyD88/NF-kB信号通路的干预机制

目的探究健脾养血祛风方对树突状细胞(DCs)Toll样受体(TLRs)经典MyD 88-NF-κB信号通路的影响。方法从小鼠骨髓分离单核细胞并诱导培养为树突状细胞。采用流式细胞术检测小鼠DCs表面分子CD80和CD86的表达情况;CCK8检测健脾养血祛风方对DCs细胞活力的影响;RT-q PCR检测TLR2、TLR3、TLR4和TLR9表达水平,同时检测下游信号相关蛋白IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB表达;ELISA检测IL-4、IL-10、INF-γ、IL-12水平。结果在不影响细胞活力的前提下,50μg/mL健脾养血祛风方能明显增加TLR2、TLR3、TLR4和TLR9的表达(P<0.01),同时能促进DCs中IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB水平(P<0.01)。此外,50μg/mL、75μg/mL健脾养血祛风方还可增加INF-γ、IL-12的释放(P<0.01),抑制IL-4、IL-10的生成(P<0.01)。结论健脾养血祛风方可促进DCs的TLRs/MyD 88/NF-κB信号通路激活,从而调控炎症因子表达,使Th1/Th2细胞因子网络平衡体系向Th1方向倾斜,缓解特应性皮炎(AD)。

四君子汤激活TLR-2/MyD88信号通路促进小肠黏膜上皮细胞损伤修复

目的:探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用及机制。方法:采用血清药理学方法制备四君子汤含药血清;tips划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察四君子汤含药血清对ICE-6细胞迁移的影响;实时细胞分析仪(RTCA)检测四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖的影响;荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测TLR-2和My D88 mRNA表达;Western blot法检测TLR-2与My D88蛋白表达。结果:中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞迁移(P<0.01);细胞损伤后12 h,中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞增殖(P<0.01);细胞损伤后24 h和36 h,低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清均可促进IEC-6细胞增殖(P<0.05,P<0.01);中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清可上调TLR-2及My D88 mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论:四君子汤可加速胃肠黏膜损伤修复过程,其机制可能与激活TLR-2/My D88信号通路,促进黏膜上皮细胞迁移和增殖有关。

电针对食源性肥胖小鼠肠黏膜TLR4/MyD88信号通路的影响

目的:探究电针对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肠黏膜TLR4/My D88信号通路的调控效应。方法:选取150只C57BL/6小鼠,适应性喂养1周后,随机选择15只作为正常组,余下135只饲养高脂饮食。8周后筛选出体重大于正常组均值20%的肥胖鼠50只,随机均分成模型组、电针7天组(EA-7组)、电针14天组(EA-14组)、电针21天组(EA-21组)、电针28天组(EA-28组)。电针组选择针刺天枢、关元、足三里及三阴交等四穴,得气后,接通电针仪治疗10min。观察各组小鼠体重、Lee's指数、生殖器周围脂肪重量的差异,及肠中段黏膜组织中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量变化。应用实时荧光定量(QPCR)法检测TLR4及其下游信号通路关键因子My D88基因表达情况,并通过免疫组织化学(IHC)观察肠黏膜TLR4蛋白分布变化。结果:治疗后电针组的体重、Lee's指数、生殖器周围脂肪重量显著低于模型组,肠组织IL-6、IL-10及TNF-α显著低于模型组;QPCR结果相对于正常组的TLR4(1.258±0.127)及My D88(1.497±0.241)基因表达情况,肥胖组肠黏膜组织中TLR4(1.479±0.256)基因表达明显增加而My D88基因(1.261±0.192)表达明显下降,电针干预后下调其过度表达;模型组IHC显示TLR4的光密度检测(0.1949±0.0040)显著高于正常组(0.1624±0.0180),电针后能够显著下调其蛋白密度。结论:电针通过调控TLR4/My D88信号通路,降低TLR4的基因表达及蛋白分布,降低低水平的炎症反应相关过程,达到治疗肥胖的目的。

右归丸对肾阳虚证患者TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达的影响

目的探讨右归丸治疗肾阳虚证的免疫调控机制。方法筛选9例肾阳虚证患者,均给予右归丸口服,连服1个月。分别于治疗前后采集患者外周静脉血,制备外周血单个核细胞(PBMC),提取RNA,按照实时定量PCR(q PCR)实验流程,检测TLR4、My D88及NF-κBmRNA表达情况,并进行比较分析。结果治疗后,患者TLR4mRNA表达水平明显下调(P<0.05),My D88、NF-κB mRNA表达水平均明显上调(P均<0.05)。结论右归丸可以调节TLR4/My D88/NF-κB信号通路的表达,这可能是右归丸良性调节肾阳虚证免疫功能的分子机制之一。

盐酸法舒地尔对慢性心力衰竭大鼠心肌组织Toll样受体/MyD88信号通路的影响

目的探讨盐酸法舒地尔对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌组织Toll样受体(TLR)/My D88信号通路的调节作用。方法采用冠状动脉前降支结扎法建立CHF大鼠模型,分为健康对照组、模型组、治疗(盐酸法舒地尔)组和地高辛组,给予相应药物干预4 w后,观察大鼠心脏功能指标,采用实时聚合酶链反应(PCR)和Western印迹法分别检测各组心肌组织TLR2、TLR4和My D88 mRNA和蛋白表达水平。结果模型组心肌组织TLR2、TLR4和My D88 mRNA及蛋白表达水平较对照组明显增高(P<0.01)。同时,模型组心功能指标左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)和左心室重量指数(LVMI)与对照组相比明显增高(P<0.01),而左心室内压最大上升、下降速率(+dp/dtmax和-dp/dtmax)则显著降低(P<0.01)。治疗组干预后,无论是在mRNA还是在蛋白表达水平,心肌组织TLR2、TLR4和My D88表达水平均显著下调(P<0.01),同时可明显改善心脏功能指标(P<0.01)。结论盐酸法舒地尔可能通过下调CHF大鼠心肌组织TLR2、TLR4和My D88表达水平,抑制TLR/My D88信号通路来改善CHF症状。

虎杖—桂枝药对配伍对急性痛风性关节炎大鼠TLR4/MyD88信号转导通路的影响

【目的】观察虎杖—桂枝药对(虎桂药对)配伍对尿酸钠诱导的急性痛风性关节炎大鼠Toll样受体4/骨髓样分化因子88(TLR4/My D88)通路的影响,进一步探讨虎桂药对治疗急性痛风的作用机制。【方法】将SD雄性大鼠48只分为正常组、模型组、阴性质粒组、阳性质粒组、虎桂药对(剂量为7 g/kg)+si RNA组、虎桂药对组(剂量为7 g/kg),每组各8只。虎桂药对配伍组给予相应药物灌胃,其他各组给予生理盐水灌胃,每日1次,连续10 d。于灌胃第7天模型组和各实验组大鼠均采用踝关节腔内注射尿酸钠复制大鼠急性痛风性关节炎模型,正常组给予同体积的生理盐水;阳性质粒组、虎桂药对﹢si RNA组通过构建好的靶向TLR4基因si RNA(TLR4-si RNA)质粒抑制大鼠体内TLR4基因的表达。观察各组大鼠关节滑膜组织病理形态学变化,采用双抗体夹心法检测外周血炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,采用荧光定量PCR和Western blot法检测各组大鼠外周血单核细胞中TLR4、My D88、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)m RNA和蛋白表达,免疫组织化学法检测滑膜核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的表达。【结果】与正常组比较,模型组滑膜细胞明显增生,内膜下层炎细胞弥漫浸润,以淋巴、单核细胞为主,滑膜表面见大量纤维素粘附。与模型组比较,阳性质粒组,虎桂药对+si RNA组、虎桂药对组均能明显缓解炎性细胞对滑膜的浸润,改善滑膜细胞增生反应。与正常组比较,模型组血清TNF-α、IL-1β含量显著升高(P<0.01),外周血单核细胞TLR4、My D88、TRAF-6 m RNA和蛋白表达,滑膜NF-κB p65表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,阳性质粒组,虎桂药对+si RNA组、虎桂药对组血清中的TNF-α、IL-1β含量显著降低(P<0.01),外周血单核细胞TLR4、My D88、TRAF-6 m RNA和蛋白表达以及滑膜NF-κB p65表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。【结论】虎桂药对配伍具有调节细胞因子的作用,其机制可能与其抑制TLR4-My D88-NF-κB信号通路的异常激活有关。

抗炎合剂对脓毒症急性肺损伤TLR4/MyD88信号通路的干预研究

目的观察抗炎合剂对脓毒症急性肺损伤大鼠TLR4/MyD88/NF-кB信号通路的影响。方法清洁级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、抗炎合剂组、清开灵组。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症急性肺损伤模型,分别于造模后24 h处死动物,并进行肺组织HE染色,测定大鼠肺组织TRL4、MyD88、NF-κB表达及血清IL-1、IL-6、TNF-α含量。结果模型组大鼠肺组织损伤程度、肺组织TRL4、MyD88、NF-κB表达及IL-1、IL-6、TNF-α含量较假手术组明显增高,而抗炎合剂组、清开灵组上述指标较模型组有不同程度的降低,且抗炎合剂组优于清开灵组。结论抗炎合剂能减少炎症因子释放,减轻大鼠肺损伤程度,机制可能为通过抑制TLR4/MyD88信号通路减少炎症因子释放。

安子合剂对抗磷脂抗体阳性流产小鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:研究安子合剂对抗磷脂抗体(APA)阳性流产小鼠Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(My D88)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗APA阳性流产作用机制。方法:将BALB/c小鼠(♀)随机分为空白对照组、模型组、阿司匹林组(阳性对照,0.019 5 g/kg)和安子合剂低、中、高剂量组(37.7、75.4、150.8 g/kg,以生药计),每组10只。除空白对照组外,其余各组小鼠均以人β2-糖蛋白Ⅰ为诱导剂建立APA阳性流产模型。从妊娠第1天起,各给药组小鼠ig相应药物,空白对照组和模型组小鼠ig等体积生理盐水,每天1次,连续9 d。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应法和免疫组化法测定胎盘组织TLR4、髓样分化蛋白2(MD2)、My D88、NF-κB m RNA及其蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠胎盘组织TLR4、MD2、My D88、NF-κB m RNA及其蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,阿司匹林组和安子合剂低、中剂量组小鼠胎盘组织TLR4、MD2、My D88 m RNA及其蛋白表达水平,安子合剂高剂量组小鼠胎盘组织TLR4蛋白表达水平,以及各给药组小鼠胎盘组织NF-κB蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);安子合剂低剂量组小鼠胎盘组织TLR4、MD2 m RNA表达水平和MD2、My D88蛋白表达水平较阿司匹林组更低(P<0.05或P<0.01)。结论:安子合剂可抑制APA阳性流产小鼠TLR4/My D88/NF-κB信号通路转导,这可能是其抗APA阳性流产的作用机制之一。

复方蜥蜴散不同微粒组合剂干预大鼠溃疡性结肠炎模型TLRs/MyD88信号通路及下游炎症因子的实验研究

目的探讨复方蜥蜴散不同微粒组合剂干预大鼠溃疡性结肠炎(UC)模型TLRs/My D88信号通路中肠组织髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白表达、下游炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及其对UC的作用机制。方法雄性SD大鼠84只,随机分为6组,即正常对照组、模型组、柳氮磺吡啶片治疗组、蜥蜴散80目、100目、80+100目等量混合治疗组,分别编号A^F组。A组予0.9%Na Cl溶液灌肠处理,B^F组均采用三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠诱导制备UC模型。造模成功后,治疗组(C^F组)分别给予对应药物灌胃治疗,A组及B组给予0.9%Na Cl溶液灌胃治疗,连续14 d,频次相同。14 d后麻醉全部大鼠,行腹主动脉取血,离心低温保存,取血后取结肠组织病变处包埋。采用HE染色观察大鼠结肠黏膜病理改变,采用免疫组化法检测My D88、TRAF6蛋白的原位表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA试验)检测血清TNF-α水平。结果与正常对照组比较,其他组My D88、TRAF6蛋白表达量及TNF-α水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);各治疗组与模型组比较,各项指标水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05);复方蜥蜴散各治疗组与柳氮磺吡啶片治疗组比较,复方蜥蜴散80+100目组治疗效果最佳,差异有统计学意义(P<0.05),蜥蜴散80目、100目组与柳氮磺吡啶片治疗组比较,差异无统计学意义(P>0.05);复方蜥蜴散各治疗组间比较,80+100目等量混合组各项指标水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论复方蜥蜴散不同微粒组合剂能抑制TLRs/My D88信号通路下游信号传递分子My D88、TRAF6蛋白表达及降低下游炎症因子TNF-α水平,提示其治疗溃疡性结肠炎的主要作用机制在于阻断溃疡性结肠炎的炎症反应,调节免疫,恢复肠道屏障,维持肠道稳态,促进肠黏膜修复。

清热祛瘀固肾方对anti-β2GPI诱导下的滋养层细胞TLR4/MyD88信号通路的影响

[目的]以Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子(myeloid differentiation factor88,My D88)通路为切入点,探讨清热祛瘀固肾方(简称清固方)对抗β2糖蛋白I抗体(anti-beta 2 glycoprotein I antibody,anti-β2GPI)诱导的人胎盘滋养层细胞HTR8损害的作用及机理。[方法]将40只雌性Wistar大鼠,随机分为清固方高、中、低剂量组和正常组。分组用药10d后心脏取血,分别制备含不同浓度清固方血清和正常血清。构建My D88和TLR4真核表达质粒,分别转染HTR8细胞。两组HTR8细胞各分成清固方高、中、低剂量组、肝素组、阴性对照组和空白对照组。阴性对照组及空白对照组给予正常血清,其它组则给予相应的含药血清干预。除空白对照组外,其它各组与小鼠单克隆anti-β2 GPI共孵育后采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养上清液中单核细胞趋化因子-1(monocyte hemotactic protein-1,MCP-1)、白细胞介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)浓度。[结果]经anti-β2GPI诱导的转染TLR4真核表达质粒的HTR8细胞经各组含药血清处理后,清固方高、中、低剂量组IL-1β浓度低于肝素组和阴性对照组,清固方高剂量组及空白对照组MCP-1浓度低于肝素组,差异有统计学意义(P<0.05);转染My D88真核表达质粒的HTR8细胞经各组含药血清处理后,清固方高、中、低剂量组及空白组对照IL-1β、MCP-1浓度低于肝素组,阴性对照组IL-1β、MCP-1浓度高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05)。清固方高、中、低剂量组、肝素组总凋亡率均低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01),空白对照组总凋亡率低于其他各组,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]清固方通过干预TLR4/My D88信号转导通路,抑制HTR8细胞表面β2-GPI/anti-β2GPI活化引起的IL-1β、MCP-1分泌和细胞凋亡。

右美托咪定通过调控TLR4/My D88/NF-κB信号通路预防重型颅脑损伤患者PSH的疗效观察

目的探讨右美托咪定调控Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD)88/核转录因子(NF)-κB信号通路(TLR4/My D88/NF-κB)预防重型颅脑损伤患者阵发性交感神经过度兴奋(paroxysmal sympathetic hyperactivity,PSH)的临床疗效。方法选取本院2016年9月~2019年5月收治的100例重型颅脑损伤患者为研究对象,随机数字表法分为研究组和对照组各50例,研究组在麻醉诱导前给予1.0μg/kg负荷量的右美托咪定,后续以0.4μg·kg-1·h-1输注,对照组注射等量生理盐水。比较两组PSH发生率、临床症状、影像学表现、机械通气时间、气管插管/切开时长、ICU住院时间、总住院时长以及出院后3个月的GCS评分;同时检测两组治疗后外周血CD14+单核细胞中MyD88的荧光强度、TLR4、NF-κB表达水平,以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果研究组7 d和3个月时PSH发生率显著低于对照组(P<0.05),且研究组总住院时长、ICU住院时长、术中气管切开比例以及机械通气时间均显著低于对照组,GCS评分高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。另外影像学结果显示两组患者的影像学病灶位置存在一定差异,对照组中患者病灶位于脑室系统及周围的比例高于研究组(P<0.05)。两组T1~T3时CD14+PBMC MyD88荧光强度、TLR4和NK-κB阳性表达率相比T0均显著增高(P<0.05),但研究组患者在T1~T3时MyD88荧光强度、TLR4和NK-κB阳性表达率相比对照组明显降低(P<0.05)。两组T1~T3时血清TNF-α表达水平相比T0均显著增高(P<0.05),但研究组T1~T3时血清TNF-α表达水平相比对照组明显降低(P<0.05)。结论右美托咪定可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路减少重型颅脑损伤患者机体氧化应激反应,从而有效降低PSH发生风险,改善患者预后。

高龄慢性阻塞性肺疾病患者高浓度氢气吸入对TLR4/My D88通路及下游炎性因子的影响及临床意义

目的探讨高浓度氢气吸入对高龄慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者Toll样受体(TLR4)/始动髓样分化因子(My)D88通路及下游炎性因子的影响及临床意义。方法高龄COPD患者296例,随机分为对照组(行常规治疗)和研究组(常规治疗结合高浓度氢气吸入)各148例。均治疗2 w后,获取两组肺功能指标[用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%)、最高呼气流速(PEF)]、外周血指标[TLR4、My D88、白细胞介素(IL)-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α、高敏C反应蛋白(hs-CRP)]、相关评分[呼吸困难咳嗽咳痰(BCSS)评分、COPD评估测试(CAT)评分]。结果治疗后两组FVC、FEV1%、PEF明显高于治疗前(P<0.05),但组间FVC、FEV1%、PEF差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后两组TLR4、My D88、IL-8、TNF-α、hs-CRP明显低于治疗前,且研究组明显低于对照组(均P<0.05)。研究组治疗后TLR4、My D88与其下游炎性因子IL-8、TNF-α、hs-CRP均呈正相关关系(P<0.05)。治疗后两组BCSS、CAT评分明显低于治疗前,且研究组明显低于对照组(均P<0.05);TLR4、My D88、IL-8、TNF-α、hs-CRP与BCSS、CAT评分均正相关(P<0.05)。结论高浓度氢气吸入治疗COPD患者TLR4、My D88及下游炎性因子显著降低,总体疗效高,临床可通过检测TLR4/My D88通路及下游炎性因子的变化准确判断临床效果。

HMGB1通过TLR2-Myd88途径调控糖尿病中vWF水平

目的探究高迁移率族蛋白(1 HMGB1)-TLR2-MyD88通路在调节糖尿病中血管性血友病因子(vWF)水平的作用。方法使用四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型,使用TLR2抑制剂和激动剂以及HMGB1抑制剂观察糖尿病小鼠中HMGB1-TLR2-MyD88通路中蛋白水平的变化以及小鼠骨巨噬细胞和血浆中vWF含量。结果糖尿病小鼠中骨巨噬细胞vWF含量比正常小鼠高(P<0.05),使用TLR2激动剂后正常小鼠中TLR2、MyD88和vWF水平升高(P<0.05),使用TLR2沉默RNA刺激糖尿病小鼠,可降调TLR2、MyD88和vWF水平(P<0.05)。糖尿病小鼠组中HMGB1水平高于正常小鼠组(P<0.05),且使用HMGB1抑制剂后TLR2/MyD88通路以及vWF水平下调(P<0.05)。结论本研究表明糖尿病小鼠中表达升高的HMGB1可作为TLR2的一种内源性配体激活TLR2-MyD88通路调节血浆中vWF水平。

维生素D及其受体调控NF-k B信号通路对糖尿病肾病保护机制的研究进展

糖尿病肾病(DN)主要特征是细胞外基质(ECM)过度沉积[1],毛细血管基底膜增厚和系膜基质增生,进而导致肾小球硬化和肾小管间质纤维化[2]。尽管积极的控制,但仍有27%~31%发展为肾衰竭[3],在西方国家,糖尿病已成为导致终末期肾病的首位原因,44%的患者需要接受血液透析[4]。

桔梗皂苷D减轻大鼠肾缺血/再灌注损伤

目的探究桔梗皂苷D(PD)对大鼠肾缺血/再灌注损伤的保护作用。方法将大鼠分为假手术组、模型组,PD低、中和高剂量组(n=10)。模型组、低、中和高剂量组大鼠通过夹闭大鼠双侧肾蒂来建立缺血/再灌注损伤模型,假手术组大鼠进行相同的建模手术操作,但不夹闭肾蒂。建模前5 min对低、中和高剂量组大鼠分别腹腔注射12.5、25和50 mg/kg的PD。建模24 h后,检测大鼠的血清肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN)水平,以及肾组织抗氧化标志物[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)]水平。苏木精-伊红(HE)染色评价肾组织病变。免疫组织化学染色检测肾组织caspase-3的表达,通过caspase-3阳性的细胞数量来评估肾小管上皮细胞的凋亡指数。RT-qPCR检测肾组织炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-10的mRNA表达。Western blot检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、p65、p-p65、核因子κB(NF-κB)抑制因子(IκB)和p-IκB的表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠的肾脏病变程度、血清Cr和BUN水平、肾小管上皮细胞的凋亡指数均升高(P<0.05)。与模型组大鼠相比,低、中和高剂量组大鼠的肾脏病变程度、血清Cr和BUN水平、肾小管上皮细胞的凋亡指数均降低(P<0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠的肾组织中MDA水平、IL-1β和IL-6的mRNA水平和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路蛋白表达水平均升高,SOD和GSH-Px水平以及IL-10的mRNA水平均降低(P<0.05)。与模型组大鼠相比,低、中和高剂量组大鼠的肾组织中MDA水平、IL-1β和IL-6的mRNA水平和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路蛋白表达水平均降低,SOD和GSH-Px水平以及IL-10的mRNA水平均升高(P<0.05)。结论桔梗皂苷D对大鼠肾缺血/再灌注损伤有保护作用,其机制可能与提高抗氧化能力和抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

纳-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂调控TLRs/MyD88通路对高糖诱导HAECs自噬及凋亡的影响

目的:探讨纳-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(SGLT-2i)调控TLRs/My D88通路对高糖诱导的人主动脉内皮细胞(HAECs)自噬及凋亡的影响。方法:选用HAECs,将细胞分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(30 mmol/L葡萄糖)和SGLT-2i+HG组(30mmol/L葡萄糖+50μmol/L的SGLT-2抑制剂)。检测出各细胞生长活力、细胞凋亡水平、细胞TLRs、My D88 m RNA表达水平,细胞TLRs、My D88、Bax、Bcl-2、Beclin 1、LC3II蛋白表达以及自噬水平。结果:与NG组相比,HG组细胞增值率显著降低(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞增值率显著上升(P<0.05)。12 h时24 h时时间点,与NG组相比,HG组细胞凋亡率均显著升高(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞凋亡率均显著下降(P<0.05)。与NG组相比,HG组凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞Bax、Bcl-2表达水平下降(P<0.05)。与NG组相比,HG组自噬相关蛋白Beclin 1、LC3II水平升高(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞Beclin 1、LC3II水平下降(P<0.05)。与NG组相比,HG组TLRs、My D88蛋白表达水平升高(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞TLRs、My D88表达水平下降(P<0.05)。结论:SGLT-2通过调控TLRs My D88通路抑制高糖诱导的人主动脉内皮细胞自噬及凋亡。

雷公藤多苷对溃疡性结肠炎大鼠TLR4/MyD88非依赖信号通路的作用研究

为了研究雷公藤多苷(TWP)对三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溃疡性结肠炎(UC)大鼠TLR4/My D88非依赖信号通路的调控作用,采用了TNBS/乙醇联合灌肠的方法建立TNBS/乙醇UC大鼠模型。模型建立成功后,将90只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,TWP低、中、高剂量组(3,6,12 mg·kg^(-1)),硫唑嘌呤(AZA)组(6 g·kg^(-1)),每组15只。各组分别给予相应药物连续灌胃14 d。每隔3 d评估UC大鼠疾病活动指数(DAI)。14 d后解剖所有大鼠,留取相应结肠组织观察各组大鼠结肠组织大体及镜下病理表现,并对其进行评分。采用Western blot法和RT-PCR法检测UC大鼠结肠组织中TLR4/My D88非依赖信号通路相关分子(TLR4,TRAM,TRIF,NF-κB,IFN-γ)在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果提示,DAI评分、大体及镜下表现和评分均提示TNBS/乙醇UC大鼠模型造模成功,TWP对UC大鼠临床症状的改善及黏膜愈合具有一定作用,该作用与AZA相比相当或强于AZA。RT-PCR及Western blot实验均提示,与正常对照组相比,模型对照组中TLR4/My D88非依赖信号通路相关的分子无论在mRNA还是蛋白水平表达均显著升高(P<0.01)。与模型对照组相比,TWP呈剂量依赖性地抑制该信号通路上各节点分子mRNA及蛋白水平的表达,其中TWP高剂量组中各节点分子mRNA及蛋白表达水平显著低于模型对照组(P<0.05)。与AZA组相比,TWP高剂量组对该信号通路上游因子(TLR4,TRAM,TRIF,NF-κB)mRNA及蛋白表达水平的抑制作用略好于AZA组,而对该信号通路的末端炎症因子IFN-γmRNA及蛋白水平的抑制作用却略逊于AZA组,但上述2种差异均无统计学意义。因此,在TNBS/乙醇UC大鼠模型中,My D88非依赖信号通路参与了炎症活动的调控,TWP可以通过抑制TLR4/My D88非依赖信号通路抑制IFN-γ的释放,发挥抗炎作用,其作用强度与剂量呈正相关。

乌梅丸及其拆方对溃疡性结肠炎大鼠炎性因子及TLR9/MyD88/NF-κBp65信号通路的影响

目的:探讨乌梅丸及其拆方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠炎性因子及TLR9/My D88/NF-κBp65信号通路的影响,并分析其作用机制。方法:大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组、乌梅丸组、乌梅丸辛开苦降组、乌梅丸辛开组、乌梅丸苦降组、乌梅丸补益组。三硝基苯磺酸/乙醇法造模2d后给药4周,观察大鼠疾病活动指数(DAI)及结肠黏膜损伤程度,ELISA法检测结肠黏膜白介素-4(IL-4)、干扰素-γ(INF-γ)水平,免疫组化法观察Toll样受体9(TLR9)、髓样分化因子88(My D88)、细胞核因子κBp65(NF-κBp65)的表达。结果:乌梅丸组、乌梅丸辛开苦降组均能显著升高IL-4,降低INF-γ水平,显著减少结肠黏膜TLR9、My D88、NF-κBp65的蛋白表达(P<0.01),且效果优于其它乌梅丸拆方组。结论:乌梅丸组、乌梅丸辛开苦降组对UC大鼠结肠黏膜炎症有较好的缓解作用,其作用机制可能与调节炎性因子平衡,抑制TLR9/My D88/NF-κBp65信号通路的异常活化有关;辛开苦降、寒温并施的配伍方式可能是乌梅丸治疗UC的内在机制之一。