牛抵抗素对牛肺泡巨噬细胞TLR4/MyD88非依赖信号通路基因表达的影响

旨在探究牛抵抗素通过TLR4/MyD88非依赖信号通路诱发牛肺泡巨噬细胞的相关炎症反应机理。使用100 ng·mL^(-1)终浓度牛抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞,分别在0、1.5、3.0、6.0、12.0、24.0 h时采用qRT-PCR检测TLR4/MyD88非依赖信号通路相关基因(TLR4、TRAM、NF-κB)mRNA水平表达量,通过ELISA法检测下游IL-6、1L-1β、TNF-α等促炎细胞因子表达水平。结果显示,100 ng·mL^(-1)牛抵抗素处理牛肺泡巨噬细胞后,TLR4、TRAM、NF-κB基因表达量于6.0 h时极显著上调(P<0.01),诱导12.0 h时,相关基因表达量达到最高;IL-6、1L-1β、TNF-α等促炎细胞因子于1.5 h表达量极显著上调(P<0.01),且均存在时间依赖效应。抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞后,可激活TLR4/MyD88非依赖信号通路,通过信号传递,释放大量促炎细胞因子,引起肺部炎症。

雷公藤多苷对溃疡性结肠炎大鼠TLR4/MyD88非依赖信号通路的作用研究

为了研究雷公藤多苷(TWP)对三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溃疡性结肠炎(UC)大鼠TLR4/My D88非依赖信号通路的调控作用,采用了TNBS/乙醇联合灌肠的方法建立TNBS/乙醇UC大鼠模型。模型建立成功后,将90只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,TWP低、中、高剂量组(3,6,12 mg·kg^(-1)),硫唑嘌呤(AZA)组(6 g·kg^(-1)),每组15只。各组分别给予相应药物连续灌胃14 d。每隔3 d评估UC大鼠疾病活动指数(DAI)。14 d后解剖所有大鼠,留取相应结肠组织观察各组大鼠结肠组织大体及镜下病理表现,并对其进行评分。采用Western blot法和RT-PCR法检测UC大鼠结肠组织中TLR4/My D88非依赖信号通路相关分子(TLR4,TRAM,TRIF,NF-κB,IFN-γ)在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果提示,DAI评分、大体及镜下表现和评分均提示TNBS/乙醇UC大鼠模型造模成功,TWP对UC大鼠临床症状的改善及黏膜愈合具有一定作用,该作用与AZA相比相当或强于AZA。RT-PCR及Western blot实验均提示,与正常对照组相比,模型对照组中TLR4/My D88非依赖信号通路相关的分子无论在mRNA还是蛋白水平表达均显著升高(P<0.01)。与模型对照组相比,TWP呈剂量依赖性地抑制该信号通路上各节点分子mRNA及蛋白水平的表达,其中TWP高剂量组中各节点分子mRNA及蛋白表达水平显著低于模型对照组(P<0.05)。与AZA组相比,TWP高剂量组对该信号通路上游因子(TLR4,TRAM,TRIF,NF-κB)mRNA及蛋白表达水平的抑制作用略好于AZA组,而对该信号通路的末端炎症因子IFN-γmRNA及蛋白水平的抑制作用却略逊于AZA组,但上述2种差异均无统计学意义。因此,在TNBS/乙醇UC大鼠模型中,My D88非依赖信号通路参与了炎症活动的调控,TWP可以通过抑制TLR4/My D88非依赖信号通路抑制IFN-γ的释放,发挥抗炎作用,其作用强度与剂量呈正相关。

不同剂量天麻素对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路的影响

目的探讨不同剂量的天麻素(Gastrodin,Gas)对甲基苯丙胺(Methamphetamine,Meth)依赖条件性位置偏爱(Conditioned place preference,CPP)大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB通路的作用。方法建立Meth(10 mg/kg,ip,14 d)依赖大鼠CPP模型,采用低中高剂量的天麻素(10、30、100 mg/kg)干预14 d后,采用Western blotting和RT-qPCR方法检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中关键因子的蛋白和mRNA在海马中的表达水平。结果天麻素干预后TLR4、MyD88、NF-κB p65、TRAF6的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性降低(P<0.001、P<0.01或P<0.05)、p-NF-κB p65的蛋白表达呈剂量依赖性降低(P<0.01或P<0.05)、IκB-α的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性升高(P<0.01或P<0.05),天麻素干预后p-IκB-α的蛋白表达降低(P<0.01)。结论天麻素干预对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的神经炎症具有保护作用,且与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路密切相关。

TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的影响

目的 研究TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)依赖的条件性位置偏好(conditioned place preference,CPP)大鼠海马的影响,同时采用特异性抑制剂TAK-242抑制Toll样4受体(Toll-like receptor 4,TLR4),减轻MA依赖诱导的海马神经炎症。方法 建立MA(10 mg/kg,ip,14 d)依赖大鼠CPP模型,分别为生理盐水组、MA组、TAK-242组、MA+TAK-242组。TAK-242组和MA+TAK-242组先分别腹腔注射抑制剂TAK-242(3 mg/kg),1h后MA+TAK-242组再腹腔注射MA(10 mg/kg)。采用Western Blot实验和采用荧光定量PCR实验检测MA依赖CPP大鼠海马中TLR4、MyD88、TRAF6、IκB-α、p-IκB-α、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白的表达和mRNA表达。结果 与生理盐水组相比,MA组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均升高(P <0.001或P <0.01),IκB-α的蛋白和mRNA表达下降(P <0.01),p-IκB-α、p-NF-κBp65的表达升高(P <0.01或P <0.05);与MA组相比,MA+TAK-242组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均下降(P <0.001、P<0.01或P <0.05),IκB-α的蛋白和mRNA表达升高(P <0.01),p-IκB-α、p-NF-κBp65表达下降(P <0.01或P <0.05)。结论 MA依赖可通过激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,诱导CPP大鼠海马神经炎症的发生,采用特异性TLR4抑制剂可以减轻MA诱导的神经炎症。

基于TLR_(4)/MyD88/NF-κB通路探讨茯砖茶改善ApoE^(-/-)小鼠非酒精性脂肪肝的作用

目的研究茯砖茶对载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠肝组织TLR_(4)/MyD88/NF-κB通路的影响,探讨其抑制非酒精性脂肪肝(NAFLD)形成的作用机理。方法将50只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组和茯砖茶高、中、低剂量组(216、144、072 g/kg),每组10只,高脂饲料连续喂养17周并同时予以相应药物灌胃干预;另取8周龄C57BL/6J野生小鼠作为空白组,普通饲料喂养17周并予以生理盐水灌胃干预。给药结束后,取肝脏行HE染色观察组织病理变化,采用RT-qPCR法检测小鼠肝组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子Kappa B(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-β)、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达。结果模型组小鼠肉眼可见肝脏体积增大,边缘变钝,呈黄色油腻感,镜下可见大小不等的脂肪空泡形成,证实模型制备成功;茯砖茶高、中剂量组小鼠脂肪变性程度轻于模型组,茯砖茶各剂量组小鼠肝组织TLR4、MyD88、NF-κB、IL-β、FAS mRNA表达低于模型组(P<005)。结论茯砖茶可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路来达到预防NAFLD形成的作用。

p53非依赖性信号通路在DNA损伤致细胞凋亡中的研究进展

p53在DNA损伤诱导细胞凋亡中发挥关键作用,但p53基因在大多数肿瘤细胞中易发生突变,突变率可超过50%。目前研究发现,p73、p63、Caspase 2、NF-κB等蛋白介导的信号通路能够在p53非依赖的DNA损伤诱导细胞凋亡中发挥作用。因此,有必要对p53非依赖信号通路近年来的研究进展作一综述,为癌症治疗提供新的思路。

CpG-c41分子对TLR7-MyD88依赖型信号通路的交叉干扰作用

目的探讨TLR9强力拮抗剂CpG-c41分子对TLR7-MyD88依赖型信号通路的交叉干扰作用。方法体外实验采用ELISA法检测CpG-c41对TLR7激动剂ssRNA83刺激RAW264.7细胞24 h诱发的炎症介质TNF-α和IL-6表达的影响,Western blot检测CpG-c41对TLR7-MyD88依赖型信号通路中IκBα蛋白表达的影响;体内实验采用ELISA法检测CpG-c41对ssRNA83攻击BALB/c小鼠2 h诱发血清中TNF-α和IL-6表达的影响作用。结果体内、体外实验均表明,CpG-c41分子能够显著抑制经ssRNA83刺激诱发TLR7-MyD88依赖型信号通路介导的炎症介质TNF-α和IL-6的释放(P<0.01),体外实验表明抑制作用具有量效关系;而Western blot检测显示在CpG-c41作用下,TLR7-MyD88依赖型信号通路中IκBα的降解受干扰。结论 TLR9强力拮抗剂CpG-c41分子通过干扰TLR7-MyD88依赖型信号通路中IκBα的磷酸化降解,抑制炎症介质的释放,发挥对ssRNA攻击小鼠的免疫保护作用。

食源性晚期糖基化终末产物上调TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对小鼠非酒精性脂肪肝炎症反应的影响

目的观察食源性晚期糖基化终末产物(AGEs)对Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子(NF)-κB信号通路及肝脏炎症的影响,探讨其致非酒精性脂肪肝(NAFL)的作用机制。方法选取60只小鼠随机分为空白对照组、外源性晚期糖基化终末产物(AGEs)组、食源性AGEs组和阳性对照组,每组15只。空白对照组喂养普通饲料,外源性AGEs组喂养外源性AGEs饲料,食源性AGEs组喂养食源性AGEs饲料,阳性对照组喂养高脂饲料,连续喂养12 w。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测4组饲料AGEs含量,用全自动生化分析仪检测小鼠血脂及肝功能指标表达水平,用苏木素-伊红(HE)染色和油红染色观察各组肝脏病理形态,ELISA检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-2、IL-6含量,Western印迹检测肝脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝脏组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平。结果与空白对照组和阳性对照组比较,外源性AGEs组和食源性AGEs组饲料AGEs含量均升高,且外源性AGEs组高于食源性AGEs组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。HE染色显示,空白对照组肝小叶结构完整,肝细胞排列整齐,未见脂肪变性,食源性AGEs组可见少量细小的脂肪滴空泡,外源性AGEs组和阳性对照组可见脂肪滴空泡,阳性对照组更为明显。油红染色显示,与空白对照组比较,外源性AGEs组、食源性AGEs组和阳性对照组脂滴显著增加,阳性对照组更明显。血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷草转氨酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)表达水平在空白对照组、食源性AGEs组、外源性AGEs组和阳性对照组中均依次升高,差异具有统计学意义(均P<0.05)。与空白对照组比较,食源性AGEs组、外源性AGEs组和阳性对照组血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)表达水平降低,外源性AGEs组和阳性对照组低于食源性AGEs组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。与空白对照组比较,外源性AGES组、食源性AGES组和阳性对照组血清TNF-α、IL-2及IL-6表达水平均升高,外源性AGEs组和阳性对照组高于食源性AGEs组,阳性对照组高于外源性AGEs组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。Western印迹检测肝组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平显示,食源性AGEs组、外源性AGEs组和阳性对照组较空白对照组显著,且阳性对照组高于食源性AGEs组和外源性AGEs组,差异有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR检测肝组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平显示,食源性AGEs组、外源性AGEs组和阳性对照组较空白对照组升高,差异具有统计学意义(均P<0.05),阳性对照组MyD88 mRNA表达水平高于食源性AGEs组和外源性AGEs组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论食源性AGEs促进小鼠炎症反应,加重小鼠肝脏脂肪变性,其可能作用机制与上调TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达相关。

季节变化对仿刺参Toll样受体信号通路基因表达的影响

为探明季节变化对仿刺参先天性免疫系统中的重要免疫通路——Toll样受体(TLR)信号通路相关基因表达的影响,2018年1—12月,每月中旬从辽宁省海洋水产科学研究院引育种中心的仿刺参单养池塘采集仿刺参样品9只,通过实时荧光定量PCR技术测定仿刺参TLR信号通路主要因子的转录表达水平,同时测定池塘的主要水环境参数,通过皮尔逊相关性分析方法分析仿刺参TLR信号通路主要因子的转录表达与环境因子季节性变化的相关性。试验结果显示,6月Toll、IRAK4、P105、TAK、IκKβ、Rel、TLR3、TBK及IRF8基因的表达水平较低,表明仿刺参体内TLR信号通路的应答能力在夏初较低。通过相关性分析发现,MyD88和TRAF6基因转录表达的季节性变化与溶解氧水平的季节性变化呈显著正相关、TAK基因和TBK基因转录表达的季节性变化与水环境的氧化还原电位呈显著正相关、IRF8基因转录表达与水温呈显著负相关、SARM基因转录表达与水温呈显著正相关,表明池塘环境因子的季节变化影响仿刺参TLR信号通路相关因子的表达。氧化还原电位影响MyD88依赖途径,且是关键环境因子,溶解氧是影响MyD88依赖途径的关键环境因子,而水温是影响MyD88非依赖途径的关键环境因子。

四君子汤激活TLR-2/MyD88信号通路促进小肠黏膜上皮细胞损伤修复

目的:探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用及机制。方法:采用血清药理学方法制备四君子汤含药血清;tips划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察四君子汤含药血清对ICE-6细胞迁移的影响;实时细胞分析仪(RTCA)检测四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖的影响;荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测TLR-2和My D88 mRNA表达;Western blot法检测TLR-2与My D88蛋白表达。结果:中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞迁移(P<0.01);细胞损伤后12 h,中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞增殖(P<0.01);细胞损伤后24 h和36 h,低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清均可促进IEC-6细胞增殖(P<0.05,P<0.01);中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清可上调TLR-2及My D88 mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论:四君子汤可加速胃肠黏膜损伤修复过程,其机制可能与激活TLR-2/My D88信号通路,促进黏膜上皮细胞迁移和增殖有关。

电针对食源性肥胖小鼠肠黏膜TLR4/MyD88信号通路的影响

目的:探究电针对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肠黏膜TLR4/My D88信号通路的调控效应。方法:选取150只C57BL/6小鼠,适应性喂养1周后,随机选择15只作为正常组,余下135只饲养高脂饮食。8周后筛选出体重大于正常组均值20%的肥胖鼠50只,随机均分成模型组、电针7天组(EA-7组)、电针14天组(EA-14组)、电针21天组(EA-21组)、电针28天组(EA-28组)。电针组选择针刺天枢、关元、足三里及三阴交等四穴,得气后,接通电针仪治疗10min。观察各组小鼠体重、Lee's指数、生殖器周围脂肪重量的差异,及肠中段黏膜组织中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量变化。应用实时荧光定量(QPCR)法检测TLR4及其下游信号通路关键因子My D88基因表达情况,并通过免疫组织化学(IHC)观察肠黏膜TLR4蛋白分布变化。结果:治疗后电针组的体重、Lee's指数、生殖器周围脂肪重量显著低于模型组,肠组织IL-6、IL-10及TNF-α显著低于模型组;QPCR结果相对于正常组的TLR4(1.258±0.127)及My D88(1.497±0.241)基因表达情况,肥胖组肠黏膜组织中TLR4(1.479±0.256)基因表达明显增加而My D88基因(1.261±0.192)表达明显下降,电针干预后下调其过度表达;模型组IHC显示TLR4的光密度检测(0.1949±0.0040)显著高于正常组(0.1624±0.0180),电针后能够显著下调其蛋白密度。结论:电针通过调控TLR4/My D88信号通路,降低TLR4的基因表达及蛋白分布,降低低水平的炎症反应相关过程,达到治疗肥胖的目的。

OXSR1活性对p53依赖和非依赖途径介导的犬肾细胞凋亡的影响

【目的】研究氧化应激反应激酶1(oxidative stress-responsive 1,OXSR1)在犬肾细胞(Madin-Darby canine kidney cell,MDCK)凋亡中的作用,为深入理解MDCK凋亡通路及研究以OXSR1基因为靶向的MDCK凋亡的干预疗法提供参考。【方法】利用CRISPR/Cas9技术在MDCK-Cas9细胞上构建OXSR1基因敲除细胞系,在OXSR1基因敲除细胞中转入OXSR1基因回补与失活质粒以构建OXSR1基因回补与失活细胞系。以刺激剂MMC、JNJ-26854165、Rotenone分别刺激野生型细胞与OXSR1基因敲除、回补、失活细胞,通过流式细胞术检测激活的p53依赖和非依赖途径、ROS信号通路介导的细胞凋亡,并通过实时荧光定量PCR检测相关凋亡基因的表达情况。【结果】靶序列出现明显的Indel特征,证实OXSR1基因敲除细胞系构建成功。Western blotting检测显示,OXSR1基因回补与失活细胞系构建成功。流式细胞术发现,刺激剂MMC、JNJ-26854165、Rotenone均能诱导细胞发生不同程度的凋亡,其中在MMC和Rotenone刺激下,OXSR1基因敲除细胞凋亡率极显著或显著低于野生型细胞和OXSR1基因回补细胞(P<0.01;P<0.05),与OXSR1基因失活细胞无显著差别(P>0.05);在JNJ-26854165刺激下,OXSR1基因敲除细胞凋亡率极显著或显著低于野生型细胞、OXSR1基因回补和失活细胞(P<0.01;P<0.05)。实时荧光定量PCR检测发现,当MMC和Rotenone刺激细胞时,OXSR1基因敲除细胞的BCL-XL基因表达量极显著或显著高于野生型细胞和OXSR1基因回补细胞(P<0.01;P<0.05),与OXSR1基因失活细胞无明显差别(P>0.05);当JNJ-26854165刺激细胞时,OXSR1基因敲除细胞的BCL-XL基因表达量极显著高于野生型细胞、OXSR1基因回补与失活细胞(P<0.01),NOXA基因表达量极显著低于野生型细胞、OXSR1基因回补与失活细胞(P<0.01)。【结论】OXSR1基因及其激酶活性可调节MMC、JNJ-26854165、Rotenone刺激MDCK时BCL-XL基因转录,影响p53依赖和非依赖途径以及ROS途径介导的细胞凋亡。

右归丸对肾阳虚证患者TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达的影响

目的探讨右归丸治疗肾阳虚证的免疫调控机制。方法筛选9例肾阳虚证患者,均给予右归丸口服,连服1个月。分别于治疗前后采集患者外周静脉血,制备外周血单个核细胞(PBMC),提取RNA,按照实时定量PCR(q PCR)实验流程,检测TLR4、My D88及NF-κBmRNA表达情况,并进行比较分析。结果治疗后,患者TLR4mRNA表达水平明显下调(P<0.05),My D88、NF-κB mRNA表达水平均明显上调(P均<0.05)。结论右归丸可以调节TLR4/My D88/NF-κB信号通路的表达,这可能是右归丸良性调节肾阳虚证免疫功能的分子机制之一。

盐酸法舒地尔对慢性心力衰竭大鼠心肌组织Toll样受体/MyD88信号通路的影响

目的探讨盐酸法舒地尔对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌组织Toll样受体(TLR)/My D88信号通路的调节作用。方法采用冠状动脉前降支结扎法建立CHF大鼠模型,分为健康对照组、模型组、治疗(盐酸法舒地尔)组和地高辛组,给予相应药物干预4 w后,观察大鼠心脏功能指标,采用实时聚合酶链反应(PCR)和Western印迹法分别检测各组心肌组织TLR2、TLR4和My D88 mRNA和蛋白表达水平。结果模型组心肌组织TLR2、TLR4和My D88 mRNA及蛋白表达水平较对照组明显增高(P<0.01)。同时,模型组心功能指标左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)和左心室重量指数(LVMI)与对照组相比明显增高(P<0.01),而左心室内压最大上升、下降速率(+dp/dtmax和-dp/dtmax)则显著降低(P<0.01)。治疗组干预后,无论是在mRNA还是在蛋白表达水平,心肌组织TLR2、TLR4和My D88表达水平均显著下调(P<0.01),同时可明显改善心脏功能指标(P<0.01)。结论盐酸法舒地尔可能通过下调CHF大鼠心肌组织TLR2、TLR4和My D88表达水平,抑制TLR/My D88信号通路来改善CHF症状。

安子合剂对抗磷脂抗体阳性流产小鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:研究安子合剂对抗磷脂抗体(APA)阳性流产小鼠Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(My D88)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗APA阳性流产作用机制。方法:将BALB/c小鼠(♀)随机分为空白对照组、模型组、阿司匹林组(阳性对照,0.019 5 g/kg)和安子合剂低、中、高剂量组(37.7、75.4、150.8 g/kg,以生药计),每组10只。除空白对照组外,其余各组小鼠均以人β2-糖蛋白Ⅰ为诱导剂建立APA阳性流产模型。从妊娠第1天起,各给药组小鼠ig相应药物,空白对照组和模型组小鼠ig等体积生理盐水,每天1次,连续9 d。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应法和免疫组化法测定胎盘组织TLR4、髓样分化蛋白2(MD2)、My D88、NF-κB m RNA及其蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠胎盘组织TLR4、MD2、My D88、NF-κB m RNA及其蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,阿司匹林组和安子合剂低、中剂量组小鼠胎盘组织TLR4、MD2、My D88 m RNA及其蛋白表达水平,安子合剂高剂量组小鼠胎盘组织TLR4蛋白表达水平,以及各给药组小鼠胎盘组织NF-κB蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);安子合剂低剂量组小鼠胎盘组织TLR4、MD2 m RNA表达水平和MD2、My D88蛋白表达水平较阿司匹林组更低(P<0.05或P<0.01)。结论:安子合剂可抑制APA阳性流产小鼠TLR4/My D88/NF-κB信号通路转导,这可能是其抗APA阳性流产的作用机制之一。

抗炎合剂对脓毒症急性肺损伤TLR4/MyD88信号通路的干预研究

目的观察抗炎合剂对脓毒症急性肺损伤大鼠TLR4/MyD88/NF-кB信号通路的影响。方法清洁级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、抗炎合剂组、清开灵组。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症急性肺损伤模型,分别于造模后24 h处死动物,并进行肺组织HE染色,测定大鼠肺组织TRL4、MyD88、NF-κB表达及血清IL-1、IL-6、TNF-α含量。结果模型组大鼠肺组织损伤程度、肺组织TRL4、MyD88、NF-κB表达及IL-1、IL-6、TNF-α含量较假手术组明显增高,而抗炎合剂组、清开灵组上述指标较模型组有不同程度的降低,且抗炎合剂组优于清开灵组。结论抗炎合剂能减少炎症因子释放,减轻大鼠肺损伤程度,机制可能为通过抑制TLR4/MyD88信号通路减少炎症因子释放。

脑缺血损伤中Notch信号通路活性的非配体依赖性改变及其作用

目的观察脑缺血损伤Notch信号转导通路的非配体依赖性活性变化及其对缺血损伤的影响。方法建立神经元样PC12细胞氧糖剥夺(OGD)模型模拟脑缺血损伤。OGD 12 h行Notch1-siRNA,实时PCR技术检测Notch1 mRNA表达,Western印迹技术检测Notch1、Notch1胞内段NICD蛋白表达,流式细胞仪检测Notch1-siRNA对缺血损伤细胞凋亡率。结果 OGD组Notch1 mRNA表达较正常对照组显著升高,OGD+Notch1-siRNA组较OGD组显著降低(P<0.05);OGD组Notch1及NICD蛋白表达较正常对照组均显著升高,OGD+Notch1-siRNA组较OGD组显著降低(P<0.05);OGD+Notch1-siRNA组细胞凋亡率较OGD组显著升高(P<0.05)。结论缺血性脑损伤可诱导非配体依赖性的Notch1信号转导通路活化,其可能在脑缺血特定时程发挥抗凋亡脑保护作用。

复方蜥蜴散不同微粒组合剂干预大鼠溃疡性结肠炎模型TLRs/MyD88信号通路及下游炎症因子的实验研究

目的探讨复方蜥蜴散不同微粒组合剂干预大鼠溃疡性结肠炎(UC)模型TLRs/My D88信号通路中肠组织髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白表达、下游炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及其对UC的作用机制。方法雄性SD大鼠84只,随机分为6组,即正常对照组、模型组、柳氮磺吡啶片治疗组、蜥蜴散80目、100目、80+100目等量混合治疗组,分别编号A^F组。A组予0.9%Na Cl溶液灌肠处理,B^F组均采用三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠诱导制备UC模型。造模成功后,治疗组(C^F组)分别给予对应药物灌胃治疗,A组及B组给予0.9%Na Cl溶液灌胃治疗,连续14 d,频次相同。14 d后麻醉全部大鼠,行腹主动脉取血,离心低温保存,取血后取结肠组织病变处包埋。采用HE染色观察大鼠结肠黏膜病理改变,采用免疫组化法检测My D88、TRAF6蛋白的原位表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA试验)检测血清TNF-α水平。结果与正常对照组比较,其他组My D88、TRAF6蛋白表达量及TNF-α水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);各治疗组与模型组比较,各项指标水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05);复方蜥蜴散各治疗组与柳氮磺吡啶片治疗组比较,复方蜥蜴散80+100目组治疗效果最佳,差异有统计学意义(P<0.05),蜥蜴散80目、100目组与柳氮磺吡啶片治疗组比较,差异无统计学意义(P>0.05);复方蜥蜴散各治疗组间比较,80+100目等量混合组各项指标水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论复方蜥蜴散不同微粒组合剂能抑制TLRs/My D88信号通路下游信号传递分子My D88、TRAF6蛋白表达及降低下游炎症因子TNF-α水平,提示其治疗溃疡性结肠炎的主要作用机制在于阻断溃疡性结肠炎的炎症反应,调节免疫,恢复肠道屏障,维持肠道稳态,促进肠黏膜修复。

丝裂原活化蛋白激酶信号通路与激素非依赖性前列腺癌的关系及治疗进展

雄激素非依赖性前列腺癌(AI Pca)的发病机制至今不明。近年发现Ras/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在前列腺癌病程演变中起重要作用,组成这个信号通路的许多重要蛋白质被认为是AI Pca潜在的药物治疗靶点。作者就Ras/MAPK信号通路在前列腺癌进展中的作用及目前针对该信号通路的抗前列腺癌药物治疗的应用前景做一综述。

雄激素非依赖性前列腺癌的发生相关的细胞信号通路研究

大多数早期的前列腺癌对去势和抗雄治疗敏感,治疗效果较好。但随后前列腺癌细胞逐渐对激素不敏感,此时再用抗雄治疗效果较差,而病人常常死于此转变。为了阐明前列腺癌非雄激素依赖性的转变机制,许多研究工作者对此不断研究并提出多条与之相关的细胞内信号通路的转变。本文主要对几条公认的、对雄激素非依赖性前列腺癌形成起关键作用的信号通路作一个简单的综述,便于了解信号通路如何改变和对肿瘤的形成所起的作用。