Changes of integrin expression in rat hepatocarcinogenesis induced by 3′-Me-DAB

AIM To investigate the expression of integrinsin rats liver during 3’-Me-DAB inducedhepatocarcinogenesis and to find out therelationship between integrins and liver cancermetastasis.METHODS The expressions of integrins α1,α2,α3 and α5 and epidermal keratin（EK）wereobserved by immunohistochemical PAP method.RESULTS In the normal liver tissues,hepatocytes express integrins α1 and α5 and inthe bile duct epithlium,EK.In liver cirrhosis,hepatocytes highly express integrins α1,α2,α3and α5 and in hyperplastic bile duct epithelium,integrins α1,α5 and EK.Expression of integrinsα1,α2,α3 and α5 were obviously decreased in thepreneoplastic nodules and primary carcinomabut expressions of integrins α1 and α5 inmetastasis in the lung and diaphragma werehigher than those in primary carcinoma.CONCLUSION Integrins α1 and α5 may play amajor role in chemically inducedhepatocarcinogenesis and metastasis in rats.

小轴海绵小球细胞的3,3′-二氨基联苯胺染色标记法研究

中国南海小轴海绵(Axinella sp.)体内含有2种活性生物碱:debromohymenialdisine(DBH)和hymenialdisine(HD),这2种生物碱位于小轴海绵中的特定类型细胞——小球细胞中。针对该类细胞建立1种特异性的染色标记,可以为细胞分化提供指示,并应用于细胞体外培养的代谢调控研究中。3,3′–二氨基联苯胺(DAB)染色是一种常用的过氧化物酶染色法,本研究通过对小轴海绵实施细胞分离并对不同类别的细胞进行DAB染色,证明了小球细胞具有颗粒状着染的特征;对各类细胞和海绵组织的蛋白提取物进行了非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE),考察各组分中与DAB作用的过氧化物酶条带;通过电镜观察揭示了小球细胞的2种内含体,发现其中的大内含体与光镜下的染色颗粒在形态和数量上存在对应关系;另外,在细胞体外培养体系(细胞团培养)中应用了DAB染色,在20 d的培养期间内,颗粒状着染细胞与小球细胞的比例同步变化,小球细胞的特征着染率保持在93%以上。综合上述结果,可认为小轴海绵组织和细胞体外培养过程中的小球细胞均具有DAB颗粒状着染的显著特征,该染色法对于该类细胞而言是一种可靠的细胞化学染色标记方法。

3'-甲基-4-二甲氨基偶氯苯对大鼠肝脏磷脂代谢的影响

探讨3'—甲基—4—二甲氨基偶氮苯（3'－Me－DAB）诱发大鼠肝癌过程中肝脏磷脂代谢的变化。用3'－Me－DAB诱发Wistar大鼠肝癌，同时辅以低胆碱饮食，TLC分离磷脂组分，Rouser法测定第6、9、12、16、20周肝脏中总磷脂及各磷脂组分含量。结果：发现诱癌组总磷脂和磷脂酸胆碱（PC）的含量不断下降，且两者变化一致；鞘磷脂（SM）在3'—Me—DAB加普通饮食组（A组）诱癌早期即迅速增高，超过对照组约1倍，并一直维持至肝癌形成，而在3'—Me—DAB加低胆碱饮食组（B组）虽然早期也升高，但当第20周肿瘤发生转移时降至对照组以下；溶血磷脂酰胆碱（LPC）仅在B组晚期出现下降。不含胆碱基因的磷脂组分：磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰丝氨酸（PS）和磷脂酰肌醇（PI）在3'—Me—DAB诱癌晚期均降低，B组尤为明显。缩醛磷脂的含量在整个诱癌过程中未见明显变化。结论：3'－Me－DAB诱发大鼠肝癌过程中主要影响PC和SM的代谢，表现为PC降低，SM增高。低胆碱饮食能缯强3'—Me—DAB对大鼠肝脏磷脂代谢的影响。

有机物中微量元素硒的测定

以3,3′-二氨基联苯胺为显色剂,研究了分光光度法测定有机物中的微量元素硒。对掩蔽剂EDTA的加入量、显色反应时间、络合酸度以及萃取酸度进行了研究。最后以络合物的稳定性,回收率等指标论证了该方法的可行性。该分析方法非常适合日常分析。

低胆碱食物对实验性肝癌发生发展的影响及机理初步探讨

１５０只Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠分组实验。Ａ组，普通混合饲料加３＇－甲基－４－二甲基－氨基偶氮苯（３＇－ＭｅＤＡＢ）；Ｂ组，低胆碱饲料玉米粉加３＇－Ｍｅ－ＤＡＢ；Ｃ组，单纯玉米粉；Ｄ组，单纯普通混合饲料饲养。测定诱癌过程中各组动物肝组织中总磷和磷脂酰胆碱含量。结果Ａ、Ｂ组在第２０周时均诱发出肝癌，诱癌率Ｂ组为８１．８％，Ａ组为２０％，Ｐ＜０．０５．Ｂ组诱癌动物多发生广泛转移：网膜、腹腔淋巴结、膈肌、脾门、肺脏，部分动物出现血性腹水，而Ａ组未出现转移和腹水。Ａ、Ｂ组动物肝组织中总磷和磷脂酰胆碱含量在诱癌过程中持续降低，Ｂ组更为明显。表明低胆碱可促进实验性肝癌发生发展，其机理可能是低胆碱影响磷脂酰胆碱合成以及ＤＮＡ甲基化。

大鼠实验性肝癌发生过程中整联蛋白表达的变化

目的研究３′ＭｅＤＡＢ诱发大鼠肝癌过程中整联蛋白的表达变化。方法利用免疫组织化学ＰＡＰ方法检测整联蛋白α１、α２、α３、α５的表达。结果正常大鼠肝细胞表达α１、α５；肝硬化时，肝细胞α１，α５表达增强外，还表达α２、α３，增生胆管细胞表达α１、α５；在癌前期增生结节及癌时，整联蛋白α１、α２、α３、α５都明显表达减弱；肺脏、膈肌等转移灶整联蛋白表达与原发灶相比，α１、α５表达增强。结论整联蛋白α１、α５的表达变化与肿瘤发生及浸润转移有密切关系。

FXR在胆管癌大鼠胆管组织中的表达状况

目的:本研究通过建立胆管癌大鼠模型,以法尼基衍生物X受体(farnesyl X receptor,FXR)为研究对象,初步探讨FXR在胆管癌大鼠胆管肿瘤组织中的表达状况,以期为治疗胆管癌找到新的方法.方法:取Wistar大鼠(■、体质量160g±8g)70只,随机分为2组,每组35只:普通饮食对照组(简称对照组)予以普通饮食、3'-甲基-4-二甲基氨偶氮苯(3'-Me-DAB)饮食实验组(简称实验组)予以含3'-Me-DAB饮食.经过20wk,建立胆管癌大鼠模型,取对照组胆管组织和实验组胆管肿瘤组织:(1)实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测胆管组织和胆管肿瘤组织的FXR基因表达的强度;(2)石蜡切片后用免疫组织化学SP法检测胆管组织和胆管肿瘤组织的FXR蛋白表达的强度.结果:(1)qRT-PCR结果显示:FXR/GAPDH比率在对照组胆管组织中为32,在实验组胆管肿瘤组织中为9,两组间的表达有统计学差异;(2)免疫组织化学SP法结果显示,对照组胆管组织FXR表达阳性率为72.6%,实验组胆管肿瘤组织FXR表达阳性率为21.3%,存在统计学意义(P<0.05).结论:实验组大鼠胆管肿瘤组织的FXR基因的表达较对照组胆管组织减少,提示我们在胆管癌的治疗中,FXR基因有成为新治疗靶点的可能.

云南普洱茶中硒的测定条件及含量研究

以3,3′-二氨基联苯胺(DAB)为显色剂,研究了分光光度法测定云南普洱茶中微量元素硒的条件。实验结果表明,以EDTA-2Na为掩蔽剂,显色pH2.5,显色剂用量为6 mL,萃取pH6,络合物在10～120 min能稳定存在,在416 nm下可直接测定吸光度。在优化获得的测定条件下,实验测得标准曲线为:y=0.00491x+0.00105,相关系数r=0.99575,线性范围为0～10.10μg/10mL。回收率为85.1%～105.0%,RSD为1.71%。该方法操作简便,成本低廉,非常适合日常分析。结果表明云南普洱茶中含有较丰富的硒。