超级稻DAD1基因的cDNA克隆及其正反义表达载体的构建

采用RT-PCR方法从超级稻幼苗中扩增DAD1基因的cDNA,并克隆测序,核酸序列表明该基因编码区为342bp,编码114个氨基酸残基.与GenBank发表的序列(XM_472334)相比,有3处碱基不同,分别为105bp处的C(GenBank的为T),148bp处的A(G),149bp处的C(T).将该基因分别正向和反向插入CaMV35S启动子后,构建了基因在植物中的正义、反义表达载体.

超级稻DAD1基因正反义植物表达载体的构建及转化菊花的研究

将水稻DAD1基因插入Ti质粒,构建成该基因的正反义植物表达载体pWM-DAD1,pWM-antisense DAD1,转入根癌农杆菌LBA4404后,利用农杆菌介导的叶盘法转化菊花,经Hyg抗性筛选,并诱导愈伤组织和分化成苗,得到转基因菊花植株,通过PCR检测,从部分转基因植株中检测出预期的目的基因的存在.

新疆雪莲DAD1基因提高烟草的抗旱性与抗盐性

利用已构建好的pCMB IA 2301-35S-DAD1植物表达载体,利用叶盘法转化烟草获得转基因烟草植株。在PEG6000模拟干旱、盐(NaC l)胁迫条件下,对转基因烟草的相对含水量、脯氨酸、丙二醛的含量进行测定分析。结果表明:转基因烟草对干旱、高盐的耐受性都有一定程度的提高。说明DAD1衰老调节因子基因可以减缓烟草在逆境条件下的衰老,提高了烟草的抗逆性。

利用瞬时表达技术分析小麦抗白粉病相关基因CAF1、BI-1和DAD1的功能

利用小麦离体叶片瞬时表达技术分析了3个小麦抗白粉病相关基因CAF1、BI-1和DAD1的功能。根据小麦响应白粉菌侵染的差异表达基因芯片检测结果,筛选出表达差异的抗病相关基因CAF1和BI-1,并挑选与植物程序性死亡相关的基因DAD1,将克隆到的这3个小麦基因全长ORF序列构建入超表达载体pAHC25中,利用瞬时表达技术检测目标基因和GUS基因共转化的阳性小麦叶片表皮细胞中白粉菌成功侵入并形成吸器的细胞比例(侵入频率),研究目标基因的超表达后对白粉菌入侵及吸器形成产生的影响。结果表明,小麦CAF1基因在感病小麦品种叶片中的瞬时表达,对白粉病侵入和吸器形成具有一定的抑制作用(侵入频率为(37.37±3.2)%,对照为(54.75±0.6)%),在一定程度上增强了表达细胞对白粉菌的抗性;表达DAD1基因则可能在一定程度上有利于白粉菌吸器的形成(侵入频率为(57.34±1.1)%,对照为(50.93±1.3)%);而在感病叶片中表达基因BI-1对白粉菌吸器形成没有明显影响(侵入频率为(54.31±1.7)%,对照为(52.37±1.8)%)。

Sj Dad1反义核酸抗日本血吸虫感染的实验研究

目的 进一步鉴定已获得的日本血吸虫新基因 Ｓｊ Ｄａｄ１的功能。方法 构建Ｓｊ Ｄａｄ１反义（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ）核酸载体ＰＥＧＦＰ－Ｎ３－Ｓｊ Ｄａｄ１和正义（ｓｅｎｓｅ）核酸载体 ｐＥＧＦＰ－Ｎ３－Ｓｊ Ｄｅｄ１．ＢＡＬＢ／ｃ小鼠感染日本血吸虫尾蚴后第 ３天，通过小鼠尾静脉分别注射ＰＥＧＦＰ－Ｎ３－Ｓｊ Ｄａｄ１（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ）、ｐＥＧＦＰ－Ｎ３－Ｓｊ Ｄａｄｌ（ｓｅｎｓｅ）、空载体和生理盐水。４５ｄ后解剖实验小鼠进行保护性效果评价。结果 在ＰＥＧＦＰ－Ｎ３－Ｓｊ Ｄａｄ１（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ）组、ｐＥＧＦＰ－Ｎ３－Ｓｊ Ｄａｄｌ（ｓｅｎｓｅ）组以及ｐＥＧＦＰ－Ｎ３组小鼠肺部冰冻切片检查发现在童虫周围有绿色荧光出现，而在生理盐水组则无此现象。但各实验组保护性效果无统计学差异（Ｐ＞ ０．０５）。结论Ｓｊ Ｄａｄ１反义核酸无明显的抗日本血吸虫感染的效果，尚需寻找其它方法对 Ｓｊ Ｄａｄ１的疫苗候选基因价值作进一步的鉴定。

陆地棉抗凋亡基因DAD1同源拷贝的非对称性驯化改变

抗凋亡基因DAD1是细胞程序性死亡的抑制基因,在植物生长发育中发挥重要作用。为探讨该基因在具有AADD基因组的异源四倍体陆地棉驯化过程中的遗传改变,本研究选取了陆地棉的野生和栽培样品作为研究对象,结合分子克隆、测序以及棉纤维不同发育阶段的转录组数据分析等方法,对二者在DAD1基因序列和表达水平的差异进行了深入比较,结果显示:陆地棉中,DAD1基因同时具有A和D基因组的2个同源拷贝;驯化对这2个拷贝的影响是不均衡的,其中A基因组的拷贝在基因序列上保持一致,但在表达上出现分化;D基因组拷贝在基因序列上出现了5个核苷酸的变异,包括1个发生在外显子区的同义突变,但在表达上却未出现明显变化。我们目前的研究结果展示了驯化对多倍体植物重要功能基因同源组分的影响是独立的,非对称性的。