温运清利法对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织DAG-PKCε信号通路的作用研究

目的探讨温运清利法对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠肝组织甘油二酯(diacylglycerol,DAG)/蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)信号通路的影响。方法高脂饮食饲养SD大鼠8周制备NASH模型,造模成功后,将大鼠随机分为模型组、苓桂术甘汤组、茵陈蒿汤组、合方组(苓桂术等与茵陈蒿汤)、罗格列酮组,共5组,每组10只;另有空白组10只。药物治疗4周后,运用自动生化分析仪检测血清生化指标,HE染色、油红O染色观察肝组织病理,ELISA法检测肝组织DAG,RT-PCR检测PKCεmRNA、TNF-αmRNA,Western blot检测PKCε和TNF-α蛋白的表达。结果 (1)各给药组大鼠一般状况、肝组织脂肪变性和炎症反应程度、血清生化指标等均较模型组有一定的减轻;(2)苓桂术甘汤、合方组、罗格列酮组大鼠肝组织DAG较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01);(3)各治疗组大鼠肝组织PKCεmRNA和蛋白含量均显著降低(P<0.05,P<0.01),茵陈蒿汤组、合方组及罗格列酮组大鼠肝组织TNF-αmRNA和蛋白含量显著降低(P<0.05)。结论温运清利法可能是通过下调肝组织DAG,抑制PKCε表达,降低TNF-α水平,从而对肝内脂质代谢、胰岛素抵抗、炎症损伤起到了调节作用,DAG/PKCε通路有可能成为治疗NASH的新靶点。

CCK-8抗炎作用中DAG-PKC信号通路对cAMP-PKA信号通路的影响

目的探讨CCK-8抗炎作用中DAG-PKC信号通路对cAMP-PKA信号通路的影响。方法分离纯化大鼠PIMs,分别用LPS、CCK、LPS+CCK、PMA、SC-3088、LPS+PMA、LPS+SC-3088、CCK+PMA、CCK+SC-3088、LPS+CCK+PMA、LPS+CCK+SC-3088孵育一定时间,采用125I-cAMP放射免疫分析法测定细胞内cAMP含量,用放射激酶法测定PKA活性。结果单独应用PMA和SC-3088孵育大鼠PIMs,细胞内cAMP含量和PKA活性与正常对照组相比无明显变化(P>0.05)。PMA可升高LPS作用下的细胞内cAMP含量和PKA活性(P<0.01),SC-3088则可使LPS作用下的细胞内cAMP含量和PKA活性降低(P<0.01)。分别应用PMA、SC-3088与CCK共同孵育,则CCK+PMA组细胞内cAMP含量和PKA活性高于单独应用CCK组(P<0.01),CCK+SC-3088组则降低(P<0.01)。与LPS+CCK组相比,PMA+LPS+CCK组细胞内cAMP含量和PKA活性升高(P<0.01),而SC-3088+LPS+CCK组细胞内cAMP含量和PKA活性降低(P<0.01)。结论在LPS诱导的大鼠PIMs,CCK-8可通过激活cAMP-PKA信号通路发挥抗炎作用;DAG-PKC信号通路的活化对cAMP-PKA信号通路有正性调节作用。

复心汤对心衰大鼠DAG-PKC信号通路的影响

目的通过观察复心合剂对阿霉素诱导的心衰大鼠DAG/PKC信号通路表达的影响,探讨DAG/PKC信号通路与心衰的关系。方法采用阿霉素诱导建立心衰大鼠模型,造模成功后给予复心汤、卡托普利药物干预4周,比较不同组别大鼠心肌细胞内DAG、PKC的表达量。结果心衰大鼠心肌细胞中DAG、PKC表达量增高;复心汤能够降低心衰心肌细胞中DAG、PKC表达量。结论复心汤能够改善心衰大鼠一般状态,抑制心衰心肌细胞中DAG/PKC信号通路的过度表达。

基于PLC-DAG-PKC信号通路探讨背俞指针疗法对胃食管反流病的影响

目的观察背俞指针疗法对胃食管反流病(Gastroesophageal reflux disease,GERD)大鼠PLCDAG-PKC信号通路的影响。方法将50只大鼠随机分为空白组、模型组、指针组、西药组,采用食管支架置入术构建GERD大鼠模型,西药组予以兰索拉唑肠溶片联合枸橼酸莫沙必利分散片灌胃,指针组施以背俞指针疗法进行干预,疗程均为2周。干预期间,观察各组大鼠的一般状态。干预结束后,光镜下观察大鼠食管下段粘膜病理组织学改变,免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)和免疫印迹法(Western Blot,WB)观察胃运动起搏区平滑肌组织PLC、DAG、PKC蛋白表达。结果模型组大鼠一般状态较差,口角处可见反流少量食物残渣,光镜下可见食管鳞状上皮基底细胞层增厚,固有层乳头延长伴炎性细胞浸润,细胞间隙增宽。IHC和WB结果示模型组PLC、DAG蛋白表达均较空白组降低(P<0.05),PKC蛋白表达较空白组呈降低趋势但无统计学意义(P>0.05);西药组和指针组病理学观察可见食管粘膜结构基本恢复正常,鳞状上皮修复完整,基底细胞呈单层排列,未见明显炎症细胞浸润,IHC结果示西药组和指针组胃运动起搏区平滑肌组织PLC、DAG、PKC蛋白分布较模型组升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论背俞指针疗法能有效修复GERD大鼠食管粘膜结构,其机制可能与调控PLC-DAG-PKC信号通路相关。

黑豆皮花青素对2型糖尿病大鼠氧化应激信号传导通路DAG-PKC的影响

目的:观察花青素(Proanthocyanidin,PC)对2型糖尿病大鼠氧化应激信号传导通路DAG-PKC的影响。方法:用链脲佐菌素建立大鼠糖尿病模型,以不同剂量(25、50、100mg/kg)PC灌胃12wk,检测血糖、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平和晚期糖基化终产物(AGEs)的含量;测定肾小球PKC活性和总二酰基甘油(DAG)的含量。结果:PC 25～100 mg/kg能明显降低糖尿病大鼠血糖含量,50～100 mg/kg的PC可抑制AGEs的形成(P<0.05),并呈明显的剂量依赖性;PC 50、100 mg/kg大鼠血清中SOD活性,以及100 mg/kg血清中GSH-Px活性均明显高于糖尿病模型组,各剂量组(25～100mg/kg)MDA水平均明显低于糖尿病模型组;肾小球PKC活性和肾小球总DAG的含量比糖尿病模型组明显下降。结论:PC可明显降低糖尿病大鼠血糖,对AGEs的形成具有明显的抑制作用,可改善2型糖尿病大鼠的抗氧化能力。

噻唑烷二酮类药物对糖尿病肾病的直接作用及其机制

近年的研究显示 ,噻唑烷二酮类药物 (TZD)具有不依赖于胰岛素增敏作用的肾直接保护作用 ,在未降低糖尿病大鼠高血糖水平的情况下 ,TZD可减少清蛋白尿 ,抑制肾小球系膜肥大及细胞外基质 (ECM)增生。其可能的作用机制是 :在高血糖状态下 ,TZD通过激活肾小球中二酰基甘油激酶 (DGK) ,抑制二酰基甘油 (DAG) 蛋白激酶C(PKC) 细胞信号调节激酶 (ERK)通路活性而改善肾小球高滤过状态、抑制ECM蛋白的过度产生。也有研究认为 ,TZD与改善硫酸乙酰肝素原多糖 (HSPG)合成及硫酸化、从而抑制肾小球基膜 (GBM)外疏松层的阴离子位点有关。此外 ,TZD可能通过调节肾小球系膜细胞的表型转化达到肾保护作用。