尿液胰岛素样生长因子结合蛋白-7与金属蛋白酶组织抑制剂-2在脓毒症急性肾损伤中的应用价值

目的分析尿液胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP-7)和金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)在脓毒症急性肾损伤(AKI)中的早期预测价值。方法选取2020年1月—2021年12月山西省人民医院急诊科监护室收治的脓毒症患者58例,并根据KDIGO的诊断标准分成脓毒症AKI组22例和非AKI组36例。分别在入组后0 h、24 h、48 h、72 h采集患者尿液及血液标本,并检测血肌酐(SCr)与尿IGFBP-7、TIMP-2水平。分析SCr、尿IGFBP-7、TIMP-2与脓毒症AKI的相关性。受试者工作特征曲线(ROC)分析SCr、尿IGFBP-7及TIMP-2在脓毒症早期急性肾损伤中的诊断价值。结果与非AKI组比较,AKI组各时点SCr、尿IGFBP-7、尿TIMP-2水平均升高,差异具有统计学意义(F/P=147.848/<0.001、330.849/<0.001、136.777/<0.001)。SCr与尿IGFBP-7、尿TIMP-2均呈正相关(r/P=0.680/<0.001,0.392/0.002),尿IGFBP-7与尿TIMP-2呈正相关(r/P=0.618/<0.001)。ROC曲线分析显示,SCr、尿IGFBP-7、尿TIMP-2及尿IGFBP-7联合TIMP-2预测脓毒症AKI的曲线下面积(AUC)分别为0.586、0.907、0.738、0.914,尿IGFBP-7、尿IGFBP-7联合TIMP-2优于SCr(Z/P=4.117/<0.001,4.196/<0.001);尿IGFBP-7、尿IGFBP-7联合TIMP-2优于尿TIMP-2(Z/P=2.663/0.008,3.378/0.008)。结论尿IGFBP-7、尿TIMP-2与尿IGFBP-7联合TIMP-2均可以作为早期预测脓毒症急性肾损伤发生的指标,且尿IGFBP-7、尿IGFBP-7联合TIMP-2的预测价值优于尿TIMP-2。

糖尿病肾病患者尿液基质金属蛋白酶组织抑制剂2、胰岛素样生长因子结合蛋白7的水平及其临床意义

目的探讨糖尿病肾病(DN)患者尿液基质金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP-2)、胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)水平及其临床意义。方法选取254例DN患者为研究组,另选取同期230例单纯2型糖尿病患者为对照组,比较2组患者临床资料。根据估算肾小球滤过率(eGFR)将DN患者分为Ⅰ期组32例,Ⅱ期组84例,Ⅲ期组90例,Ⅳ期组48例;根据血清肌酐及尿量将DN患者分为AKI组19例和非AKI组235例;比较血清肌酐、尿液TIMP-2、IGFBP7水平在不同组别患者中的差异。采用酶联免疫吸附法检测尿液TIMP-2、IGFBP7水平及尿肌酐水平;采用Pearson检验分析尿液TIMP-2、IGFBP7与相关指标的关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价尿液TIMP-2、IGFBP7及血清肌酐诊断DN患者发生AKI的效能。结果研究组血清肌酐、糖化血红蛋白(HbA1c)、血尿酸、尿素氮、尿微量白蛋白、24 h尿蛋白定量、尿β_(2)-微球蛋白水平均高于对照组,血清白蛋白、eGFR水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期、Ⅳ期DN患者血清肌酐、尿TIMP-2与尿肌酐的比值(TIMP-2/尿肌酐)、尿IGFBP7与尿肌酐的比值(IGFBP7/尿肌酐)均高于Ⅰ期、Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05);与非AKI组相比,AKI组患者血清肌酐、尿TIMP-2/尿肌酐、尿IGFBP7/尿肌酐均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。尿液TIMP-2、IGFBP7与血清肌酐、HbA1c、血尿酸、尿素氮、尿微量白蛋白、24 h尿蛋白定量、尿β_(2)-微球蛋白均呈正相关(P<0.05),与血清白蛋白、eGFR均呈负相关(P<0.05)。ROC曲线显示,尿液TIMP-2、IGFBP7、血清肌酐预测DN患者发生AKI的曲线下面积(AUC)分别为0.676(95%CI:0.587~0.756)、0.864(95%CI:0.792~0.918)、0.618(95%CI:0.528~0.703),尿液TIMP-2联合IGFBP7预测DN患者发生AKI的AUC为0.926(95%CI:0.866~0.965)。结论DN患者尿液TIMP-2、IGFBP7水平随病情加重而呈上升趋势,对DN患者发生AKI有一定的预测价值。

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人红白血病K562细胞系生物学活性及DNA结合抑制因子4基因表达的影响

本研究探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人慢性髓系白血病(CML)急红变细胞系K562细胞生物学活性和DNA结合抑制因子4(ID4)基因表达的影响,探寻白血病基因治疗的新靶点。应用甲基化特异性PCR方法检测K562细胞中ID4基因甲基化情况;实时荧光定量PCR检测5-Aza-CdR处理K562细胞后ID4 mRNA的表达水平;流式细胞术分析5-Aza-CdR处理后细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果表明,K562细胞中存在ID4基因的甲基化;5-Aza-CdR处理后K562细胞ID4 mRNA表达增加,并具有浓度依赖性,不同浓度药物处理组之间差异具有统计学意义(p<0.01)。5-Aza-CdR可使K562细胞凋亡率增加,并且作用呈时间剂量依赖性。且细胞凋亡率与ID4 mRNA的相对表达水平呈高度相关(r=0.95)。5-Aza-CdR处理K562细胞48小时后,随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期。结论:甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR能促使CML急红变细胞系K562细胞中沉默的ID4基因重新表达,可能进而参与K562细胞凋亡和细胞周期阻滞的调控。

DNA结合抑制因子2在大鼠脑室管膜前下区神经干细胞发育中的表达

目的探讨DNA结合抑制因子2(Id2)在大鼠脑室管膜前下区(SVZa)神经干细胞(NSCs)发育分化中的作用。方法运用RT-PCR、Western blotting、免疫组织化学技术,观察Id2在不同发育阶段SVZa-喙侧迁移流(RMS)-嗅脑(OB)流通道中的时空表达模式。结果从空间上看,Id2在RMS表达始终最高,SVZa次之,在OB表达最弱;从发育的时间来看,Id2在各区域胚胎时期表达均比刚出生时强;在OB和RMS区,成年比刚出生时表达强,老年仍有较强表达;在成年SVZa表达比刚出生时弱。结论Id2在SVZa神经干细胞的发育学表达模式提示,Id2可能有促进SVZa神经干细胞增殖和抑制其在RMS迁移区分化的作用。

可溶性致癌抑制因子2、心型脂肪酸结合蛋白评估重症急性胰腺炎患者早期心肌损伤及预后的价值

目的探讨可溶性致癌抑制因子2(sST2)、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)评估重症急性胰腺炎(SAP)患者早期心肌损伤及预后的价值。方法选取急性胰腺炎患者240例,根据病情分为轻症急性胰腺炎(MAP)组132例和SAP组108例,SAP患者按预后又分为存活组(82例)和死亡组(26例)。分别于入院后2 h、8 h、72 h,检测所有患者心肌肌钙蛋白I(cTnI)、H-FABP、sST2、N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平。分析SAP患者cTnI与H-FABP、sST2的相关性。采用受试者工伤特征曲线评价sST2及H-FABP预测SAP患者预后的价值。结果入院后2 h,MAP组和SAP组cTnI和NT-proBNP水平差异无统计学意义(均P>0.05),MAP组H-FABP、sST2水平正常,而SAP组H-FABP、sST2水平升高且高于MAP组(均P<0.05);其余时点SAP组4个指标均高于MAP组(均P<0.05)。入院后2 h,死亡组H-FABP、sST2水平均高于存活组,但两组间cTnI和NT-proBNP水平差异无统计学意义(均P<0.05);其余时点死亡组4个指标均平高于存活组(均P<0.05)。入院后8 h,SAP患者的sST2、H-FABP水平与cTnI水平呈正相关,预测SAP患者预后的曲线下面积分别为0.792、0.713。结论在发病早期,SAP患者sST2、H-FABP明显升高,两者或可用于评估SAP患者的早期心肌损伤情况及预后。

组织抑制剂金属蛋白酶-2联合胰岛素样生长因子结合蛋白-7对危重患者急性肾损伤的预测价值

目的总结组织抑制剂金属蛋白酶(TIMP)-2联合胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)-7对于急性肾损伤AKI患者的预测效能。方法在MEDLINE,EMBASE,Web of Science,Clinical Trials.gov,Cochrane Library,Google Scholar进行检索,筛选出13篇相关研究,使用STATA version17.0及R version3.2.2进行统计分析,根据不同的折点计算合并敏感性、合并特异性及95%可信区间。计算合并的曲线下面积及置信区间。结果 [TIMP-2]×[IGFBP-7]对于急性肾损伤预测效能总的合并曲线下面积为0.84(95%CI, 0.78-0.90);非手术组为0.76(95%CI, 0.68-0.84);手术组曲线下面积为0.84(95%CI, 0.81-0.88);德国亚组为(95%CI, 0.79-0.83);美国亚组为0.82(95%CI, 0.79-0.95)。当折点为0.3,[TIMP-2]×[IGFBP-7]对于急性肾损伤预测的敏感性为86%,特异性为57%;当折点为2.0,[TIMP-2]×[IGFBP-7]预测的敏感性为37%,特异性为91%。结论对于包括术后患者在内的重症患者,TIMP-2联合IGFBP-7具有较理想的曲线下面积、敏感性及特异性。

尿金属蛋白酶组织抑制剂-2·胰岛素样生长因子结合蛋白-7对脓毒血症患者急性肾损伤和肾替代治疗的早期预测价值

目的探讨尿金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)·胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP-7)对脓毒血症患者急性肾损伤(AKI)和肾替代治疗(RRT)的早期预测价值。方法选取121例脓毒血症患者和24例体检健康者,后者作为对照组。记录上述人群一般资料,检测并比较入院时的血肌酐(sCr)、乳酸脱氢酶(LDH)、C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白细胞计数(WBC)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(Fib)、TIMP-2、IGFBP-7水平。检测脓毒血症患者入住ICU后6、12、24、36 h尿TIMP-2、尿IGFBP-7,计算尿TIMP-2·IGFBP-7。将所有脓毒血症患者根据是否发生AKI分为AKI组和非AKI组,采用受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC)判断不同时间点尿TIMP-2·IGFBP-7对AKI的预测价值,确定最佳临界值,分析尿TIMP-2·IGFBP-7与AKI的关系。将AKI患者分为肾替代治疗(RRT)组和非RRT组,比较两组间尿TIMP-2·IGFBP-7,利用ROC曲线及AUC判断不同时间点尿TIMP-2·IGFBP-7对RRT的预测价值,确定最佳临界值。结果121例脓毒血症患者中发生AKI 45例。AKI组、非AKI组LDH、CRP、PCT、WBC、D-D、Fib水平均高于对照组(P<0.05),非AKI组序贯器官衰竭评估(SOFA)评分、血浆输注量、RBC输注量均低于AKI组,发病至入住ICU时间长于AKI组,差异均有统计学意义(P<0.05);入住ICU后6、12、24、36 h尿TIMP-2·IGFBP-7与AKI的发生呈正相关(r=0.206、0.383、0.415、0.462,均P<0.05),随着时间推移r增大。入住ICU后6、12、24、36 h尿TIMP-2·IGFBP-7用于预测AKI的AUC分别为0.740、0.788、0.795、0.877,最佳临界值分别为0.415、0.485、0.591、0.825 ng/(mL^2·10^3);RRT组尿TIMP-2·IGFBP-7高于非RRT组,入住ICU后6、12、24、36 h尿TIMP-2·IGFBP-7用于预测RRT的AUC分别为0.575、0.804、0.883、0.809,最佳临界值分别为0.518、0.825、0.917、1.015 ng/(mL^2·10^3)。结论尿TIMP-2·IGFBP-7是脓毒血症患者AKI发生和AKI患者行RRT的独立预测指标,具有较好的早期预测价值。

重症急性胰腺炎患者早期血清可溶性致癌抑制因子2和肽素、心型脂肪酸结合蛋白的水平变化及其临床意义

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)患者早期血清可溶性致癌抑制因子2(sST2)、和肽素、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)的水平变化及其临床意义。方法根据病情严重程度将240例急性胰腺炎患者分为轻症急性胰腺炎(MAP)组122例和SAP组118例,根据预后将SAP组进一步分为存活组62例和死亡组56例。比较SAP组和MAP组之间以及SAP两个亚组(存活亚组和死亡亚组)之间患者入院2 h、6 h、48 h时的心肌肌钙蛋白I(cTnI)、H-FABP、和肽素、sST2、N-末端B型钠肽前体(NT-proBNP)水平的差异,分析sST2、H-FABP、和肽素、cTnI水平与SAP患者死亡的相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析sST2、H-FABP、和肽素、cTnI水平预测SAP患者死亡的价值。结果入院2 h时,MAP组和SAP组之间、存活组和死亡组之间的cTnI和NT-proBNP水平差异均无统计学意义(均P>0.05),SAP组和死亡组的sST2、H-FABP、和肽素水平分别高于MAP组和存活组(均P<0.05);入院6 h、48 h时,SAP组、死亡组的cTnI、NT-proBNP、sST2、H-FABP、和肽素水平分别高于MAP组和存活亚组(均P<0.05)。入院后2 h、6 h、48 h,SAP组、死亡组、存活组患者的cTnI、H-FABP、和肽素、sST2、NT-proBNP水平均随时间延长而升高(均P<0.05)。相关性分析结果显示,sST2、H-FABP、和肽素和cTnI水平均与SAP患者的死亡率呈正相关(均P<0.05),sST2、H-FABP、和肽素、cTnI水平预测SAP患者死亡的ROC曲线下面积分别为0.860、0.737、0.680、0.751(均P<0.05)。结论SAP患者的心肌损伤随时间延长逐渐加重,且发病早期的sST2、H-FABP、和肽素水平越高,心肌损伤越重,患者死亡率越高,sST2、H-FABP、和肽素、cTnI水平均对SAP患者的预后有预测价值,其中sST2水平的预测价值最大。

尿金属蛋白酶组织抑制因子-2和胰岛素样生长因子结合蛋白7在急性肾损伤中的研究进展

急性肾损伤(AKI)是由各种原因引起的短时间内肾功能急剧下降而出现的临床综合征,目前,临床诊断AKI的标准沿用KDIGO指南,是基于SCr和(或)尿量的改变,但很难早期发现和准确评价肾脏损伤,因此,近年来,AKI早期生物标志物的研究成为热点。研究表明新型生物标志物尿[金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)]•[胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP-7)]对中重度AKI患者早期诊断预测性能较好,同时其在预测AKI不良结局方面具有很好的预测价值。该文就TIMP-2和IGFBP7在肾脏中的生物学功能、研究现状及展望进行综述。

喉鳞癌中DNA结合/分化抑制蛋白-2和血管内皮生长因子-C表达及临床意义

目的:检测喉鳞癌中DNA结合/分化抑制蛋白-2(ID-2)和血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达特征,分析其临床意义及相关性。方法:以67例喉鳞癌的患者作为观察组,留取临床资料及术后石蜡标本,以45例声带息肉组织作为对照组,应用免疫组化SP法检测二组中ID-2和VEGF-C的表达。结果:二组中ID-2和VEGF-C的表达差别有统计学意义(P>0.05),观察组中ID-2和VEGF-C的表达与病变的增殖指数、脉管累犯和淋巴结转移密切相关,ID-2的表达与肿瘤的分化程度和病变最大径密切相关。观察组中ID-2和VEGF-C的表达具有正相关性。结论:ID-2和VEGF-C在喉鳞癌中高表达,对肿瘤的形成和发展有一定的促进作用。ID-2与VEGF-C有一定的协同作用。

尿基质金属酶蛋白抑制剂-2和胰岛素样生长因子结合蛋白7联合检测在对比剂诱导急性肾损伤中的早期预测作用

目的 探讨对比剂(contrast medium,CM)损伤后,基质金属酶蛋白抑制剂-2(tissue inhibitor of metalloproteinases-2,TIMP-2)和胰岛素样生长因子结合蛋白7(insulin-like growth factorbinding protein 7,IGFBP7)在肾组织及尿液中的表达及尿[TIMP-2]·[IGFBP7]对急诊经皮冠状动脉介入治疗(primary percutaneous coronary intervention,PPCI)患者术后发生对比剂诱导的急性肾损伤(contrast-induced acute kidney injury,CI-AKI)的早期预测作用。方法 将20只大鼠按随机数字表法分为CI-AKI组(n=9)和对照组。采集大鼠术前及术后24 h动脉血液,检测血肌酐(serum creatinine,Scr);术后24 h采集大鼠肾组织标本,采用HE染色评价肾组织损伤情况,并于电镜下观察肾小管上皮细胞超微结构改变情况;进行免疫组化及蛋白质印迹法检测,观察TIMP-2和IGFBP7在肾组织中的表达。收集大鼠术前、术后4 h、12 h、24 h尿标本,采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测尿TIMP-2和尿IGFBP7水平。临床上,纳入临泉县人民医院2019年6月至2020年12月行PPCI患者109例,收集患者的一般资料及实验室检查指标,留取术前、术后6 h、12 h、24 h尿标本,使用NephroCheck?试剂盒检测尿[TIMP-2]·[IGFBP7]水平,绘制术后6 h尿[TIMP-2]·[IGFBP7]预测CI-AKI的ROC曲线,评估其对于CI-AKI早期预测的价值。结果 CI-AKI组大鼠术后24 h的Scr升高,显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,CI-AKI组大鼠肾组织HE染色可以观察到明显的小管上皮细胞空泡样变性、核固缩及凋亡小体形成,Paller评分明显高于对照组(P<0.05),电镜下可见广泛线粒体自噬体形成。CI-AKI组大鼠术后尿TIMP-2水平于术后4 h达到峰值,显著高于同期对照组水平(P<0.05)。CI-AKI组大鼠尿IGFBP-7水平于术后4 h开始升高,12 h达峰,术后4 h及12 h水平均高于同期对照组(P<0.05)。免疫组化和蛋白质印迹法结果显示,CM损伤后,TIMP-2和IGFBP7在肾小管上皮细胞中表达均显著升高。109例患者中有16例发生了CI-AKI,发生率为14.7%。发生CI-AKI的PPCI患者,尿[TIMP-2]·[IGFBP7]水平在术后6 h达峰,显著高于同期对照组水平(P<0.05)。以术后6 h的尿[TIMP-2]·[IGFBP7]结果绘制ROC曲线,其预测CI-AKI的AUC为0.841。以0.33作为界值,其预测CI-AKI的敏感性为0.750,特异性为0.893。结论 CM损伤后TIMP-2和IGFBP7在肾小管细胞及尿液中的表达均显著升高。尿[TIMP-2]·[IGFBP7]对于PPCI患者术后CI-AKI的发生具有早期预测作用。

NF-κB/P65与DNA结合抑制因子2在胃癌中的表达及其相关性

目的:探讨NF-κB/P65与DNA结合抑制因子2在胃癌中的表达及其相关性。方法:回顾性分析我院2016年1月-2017年12月收治的168例胃癌患者临床资料,采用IHC法检测NF-κB/P65与DNA结合抑制因子2表达水平,分析两者表达水平的相关性。结果:168例胃癌患者中NF-κB/P65表达阳性率和DNA结合抑制因子2表达阳性率均高于癌旁组织(P<0.05)。分析临床资料显示,DNA结合抑制因子2及NF-κB/P65表达均与肿瘤直径、分化程度、浸润深度、淋巴结转移数目、远处转移及TNM分期相关(P<0.05)。Pearson相关分析显示,DNA结合抑制因子2和NF-κB/P65在胃癌患者表达存在正相关关系(r=0.568,P<0.05)。结论:NF-κB/P65与DNA结合抑制因子2在胃癌的发生发展过程中具有协同促进效应,两者表达水平均与肿瘤直径、分化程度、浸润深度、淋巴结转移数目、远处转移及TNM分期相关,但具体分子作用机制仍有待后续更为深入研究确证。

DNA结合抑制因子、Rab5基因在子宫内膜异位症患者中的表达及其意义

目的探究DNA结合抑制因子2(ID2)、Rab5基因在子宫内膜异位症(EMS)患者中的表达及其意义。方法以2017年6月至2019年8月本院138例EMS患者为研究组,另120例行输卵管绝育手术患者作为对照组。检测两组子宫内膜组织中Rab5 mRNA、ID2 mRNA表达量,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析两者单独及联合的诊断价值。研究组按照r-AFS分期划分,比较不同病情分期患者Rab5 mRNA、ID2 mRNA、临床指标[血清癌胚抗原125(CA125)、子宫内膜抗体(EmAb)]水平,分析Rab5 mRNA、ID2 m RNA与病情分期、血清CA125、EmAb的相关性。结果研究组子宫内膜组织中Rab5 mRNA、ID2 m RNA表达量高于对照组(P<0.05);Rab5 mRNA与ID2 mRNA联合诊断EMS的AUC最大,为0.802,最佳诊断敏感度为78.99%,特异度为69.17%;EMS患者病情分期与Rab5 mRNA、ID2m RNA表达及血清CA125、EmAb水平存在正相关关系(P<0.05);EMS患者Rab5 mRNA、ID2 mRNA表达与血清CA125、EmAb水平存在正相关关系(P<0.05)。结论 EMS患者Rab5 m RNA、ID2 mRNA表达异常增高,与病情分期及血清CA125、EmAb水平关系密切,可辅助临床EMS诊断。

TP53BP2基因真核表达载体的构建及在人胚肾Expi293F细胞中蛋白表达、纯化及活性鉴定

目的构建人肿瘤抑制因子p53结合蛋白2(tumor suppressor p53-binding protein 2,TP53BP2)的重组真核表达载体,转染人胚肾Expi293F细胞,获得高纯度的重组人全长TP53BP2蛋白并对其进行生物学活性鉴定。方法利用UniProt网站查询TP53BP2基因序列,并进行Expi293F表达系统序列优化,通过同源重组连接至pcDNA3.1(+)-P2Ae GFP载体并进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)将pcDNA3.1(+)-P2A-eGFPTP53BP2质粒瞬时转染至Expi293F细胞,荧光显微镜观察转染效率,收集实验组及对照组细胞,利用免疫印记试验(Western blot,WB)检测TP53BP2重组蛋白表达水平。通过His标签纯化试剂盒及Superdex 20010/300GL层析柱进行蛋白纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)对纯化后重组蛋白进行鉴定。利用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)检测重组人全长TP53BP2蛋白与p65蛋白结合情况。利用免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测重组人全长TP53BP2蛋白与p65蛋白共定位。利用表面等离子体共振(surface-plasmon resonance,SPR)技术,检测纯化后的重组人全长TP53BP2蛋白与TP53BP2抗体的相互作用。结果经测序和双酶切鉴定,重组质粒pcDNA3.1(+)-P2A-eGFP-TP53BP2构建成功。经荧光显微镜观察结果显示转染效率约为60%,WB结果表明TP53BP2蛋白在Expi293F细胞中过表达,证明转染成功。SDS-PAGE结果表明纯化后重组蛋白纯度在90%以上,证明纯化成功。Co-IP结果表明,TP53BP2重组蛋白可与p65蛋白相互作用。IF结果表明,His标签蛋白、TP53BP2蛋白及p65蛋白存在共定位,表明三者之间存在相互作用。SPR结果表明,纯化的重组人TP53BP蛋白与TP53BP2抗体具有较好的结合活性。以上结果均证明重组人全长TP53BP2蛋白具有生物学活性。结论成功构建了TP53BP2基因真核表达载体并在人胚肾Expi293F细胞中成功表达出具有生物学活性的重组人全长TP53BP2蛋白,为进一步研究TP53BP2的结构和功能奠定了基础。

尿TIMP-2与IGFBP7的乘积对重症急性胰腺炎相关性急性肾损伤的早期预测价值

目的探究尿基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)与胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)的乘积对重症急性胰腺炎(SAP)相关性急性肾损伤(AKI)的早期预测价值。方法选取2018年3月至2021年3月新乡医学院第一附属医院收治的93例SAP患者为研究对象,根据患者是否发生AKI分为AKI组(26例)和非AKI组(67例)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者尿液中TIMP-2和IGFBP7水平;采用多因素logistic回归分析影响SAP患者发生AKI的危险因素;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析SAP患者急性胰腺炎严重程度床边指数(Bisap)评分、尿液中TIMP-2与IGFBP7的乘积对发生AKI的预测价值。结果与非AKI组相比,AKI组患者Bisap评分、D-二聚体、降钙素原(PCT)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、TIMP-2与IGFBP7的乘积均上升,血钙水平降低(P<0.05)。AKI患者尿液TIMP-2与IGFBP7的乘积随AKI分级增加而上升(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,AKI患者尿液TIMP-2与IGFBP7的乘积与Bisap评分、D-二聚体、PCT、hs-CRP均呈正相关(P<0.05),与血钙呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,Bisap评分、TIMP-2与IGFBP7的乘积是影响SAP相关性AKI发生的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,尿液TIMP-2与IGFBP7的乘积预测SAP患者发生AKI的曲线下面积(AUC)为0.923,高于Bisap评分预测的AUC(P<0.05)。结论SAP相关性AKI患者尿TIMP-2与IGFBP7的乘积异常升高,其高水平是SAP患者发生AKI的危险因素,且对发生AKI具有一定的预测价值。

TIMP-2和IGFBP-7早期预测急性肾损伤作用机制的研究进展

严重感染、缺血缺氧等导致急性肾损伤,使肾脏血管受损、肾小管中炎症细胞和促炎性细胞因子释放增多、糖酵解过程触发并上调。其中炎症细胞增多和血管受损导致小分子核糖核苷酸表达减少,从而上调小管上皮细胞中基质金属蛋白酶。金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)可广泛抑制基质金属蛋白酶活性(优先与基质金属蛋白酶2结合),为恢复两者的动态平衡,TIMP-2表达增多,同时促炎性细胞因子可直接使小管上皮细胞分泌TIMP-2。转化生长因子β1参与急性肾损伤时胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP-7)增多的过程。IGFBP-7可延长胰岛素、胰岛素样生长因子1半衰期,促进其与受体结合,延长相关通路的激活,并催化酪氨酸蛋白激酶活性,使磷酸果糖激酶活性提高,最终引起急性肾损伤肾小管上皮细胞中糖酵解过程激活、通量增多。TIMP-2与IGFBP-7能加重细胞周期停滞,可作为急性肾损伤细胞周期停滞的标志物。

重度烧伤患者入院时尿[TIMP-2]×[IGFBP7]水平与早期肾损伤的关系

目的 探讨重度烧伤患者入院时尿组织金属蛋白酶抑制剂-2[TIMP-2]×胰岛素样生长因子结合蛋白7[IGFBP7]水平与早期肾损伤的关系。方法 选取2018年11月—2022年6月本院收治的77例重度烧伤患者设为重度组、77例轻中度烧伤患者设为轻中度组,另选取同期77例体检正常者为正常组。比较3组尿[TIMP-2]×[IGFBP7]水平及血清胱抑素C(CysC)水平。根据重度烧伤患者在住院期间是否发生肾早期损伤分为非肾损伤组(45例)和肾损伤组(32例),比较非肾损伤组、肾损伤组重度烧伤患者尿[TIMP-2]×[IGFBP7]水平及血清CysC水平。分析入院时尿[TIMP-2]×[IGFBP7]、血清CysC对重度烧伤患者并发肾损伤的预测价值。结果 重度组烧伤患者尿[TIMP-2]×[IGFBP7]水平及血清CysC水平高于正常组、轻中度组(P<0.05),轻中度组烧伤患者尿[TIMP-2]×[IGFBP7]水平及血清CysC水平高于正常组(P<0.05)。肾损伤组重度烧伤患者尿[TIMP-2]×[IGFBP7]、血清CysC水平高于非肾损伤组(P<0.05)。入院时尿[TIMP-2]×[IGFBP7]、血清CysC预测重度烧伤患者并发肾损伤的AUC分别为0.873、0.699,截断值分别为1.06 [(ng/mL)^(2)/1000]、5.52 mmol/L,灵敏度分别为84.4%、59.4%,特异度分别为89.9%,73.3%。结论 发生早期肾损伤的重度烧伤患者入院时尿[TIMP-2]×[IGFBP7]水平及血清CysC水平较高,[TIMP-2]×[IGFBP7]水平或可成为预测重度烧伤患者并发肾损伤的潜在指标,为临床评估重度烧伤并发肾损伤提供参考。

2型糖尿病患者血清FABP-4、ADP、RBP4、Nesfatin-1与胰岛素抵抗程度的关系

目的:探讨2型糖尿病患者血清脂肪酸结合蛋白4(FABP-4)、脂联素(ADP)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)、摄食抑制因子1(Nesfatin-1)与胰岛素抵抗程度的关系。方法:选取2020年3月—2023年2月天津二七二医院收治的98例2型糖尿病患者纳入试验组,另选同期100名体检的健康者纳入对照组,两组均接受血清FABP-4、ADP、RBP4、Nesfatin-1与胰岛素抵抗检查,对血清FABP-4、ADP、RBP4、Nesfatin-1与胰岛素抵抗程度的关系进行分析。结果:试验组FABP-4、RBP4、Nesfatin-1指标水平高于对照组,ADP指标水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)指标水平高于对照组,胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析,FABP-4、ADP、RBP4、Nesfatin-1与HOMA-IR、HOMA-β均有相关性(P<0.05)。结论:2型糖尿病患者的FABP-4、ADP、RBP4、Nesfatin-1水平与胰岛素抵抗程度相关,可为临床诊疗提供一定参考。

基于尿组织金属蛋白酶抑制物2与胰岛素样生长因子结合蛋白7的急性肾损伤风险预测模型构建及其在重症患者中的早期预测价值

目的基于尿组织金属蛋白酶抑制物2(TIMP2)与胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)建立重症患者急性肾损伤(AKI)早期风险预测模型列线图,并验证该模型的预测价值。方法采用前瞻性观察性研究方法,选择2017年11月至2020年4月江苏省苏北人民医院重症监护病房(ICU)收治的急性呼吸衰竭或循环障碍患者。患者于入ICU 24 h内入组,收集患者基础资料及相关实验室检查指标;同时收集患者尿液,测定生物标志物TIMP2和IGFBP7水平,并计算二者乘积(TIMP2·IGFBP7)。按照患者入组12 h内是否发生2级或3级AKI分为非AKI和AKI组,比较两组患者基线特征及尿TIMP2·IGFBP7水平;将单因素分析中P<0.1的指标纳入多因素Logistic回归分析,筛选重症患者12 h内发生2级或3级AKI的独立危险因素,建立风险预测模型列线图,并评价模型的应用价值。结果最终共纳入206例重症患者,其中54例(占26.2%)在入组12 h内发生2级或3级AKI,152例(占73.8%)未发生。与非AKI组比较,AKI组患者体质量指数(BMI)、入组前血肌酐(SCr)、尿TIMP2·IGFBP7和使用血管活性药物比例更高,AKI额外暴露(入组前使用肾毒性药物)更常见。多因素Logistic回归分析显示,BMI〔优势比(OR)=1.23,95%可信区间(95%CI)为1.10~1.37,P=0.000〕、入组前SCr(OR=1.01,95%CI为1.00~1.02,P=0.042)、使用肾毒性药物(OR=2.84,95%CI为1.34~6.03,P=0.007)及尿TIMP2·IGFBP7(OR=2.19,95%CI为1.56~3.08,P=0.000)是重症患者发生2级或3级AKI的独立危险因素。基于上述独立危险因素构建AKI风险预测模型列线图;Bootstrap验证结果显示其在内部验证中表现出良好的区分度及校准度。受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析显示,单独尿TIMP2·IGFBP7预测重症患者12 h内发生2级或3级AKI的ROC曲线下面积(AUC)为0.74(95%CI为0.66~0.83),最佳截断值为1.40(μg/L)^(2)/1000(敏感度为66.7%,特异度为85.0%),且纳入尿TIMP2·IGFBP7模型的预测效能明显优于未纳入尿TIMP2·IGFBP7模型〔AUC(95%CI):0.85(0.79~0.91)比0.77(0.70~0.84),P=0.005〕,净重新分类指数(NRI)为0.29(95%CI为0.08~0.50,P=0.008),综合判别改善指数(IDI)为0.13(95%CI为0.07~0.19,P<0.001)。结论基于尿TIMP2·IGFBP7建立的AKI风险预测模型具有较高的临床价值,有望用于早期预测重症患者AKI的发生。