宫颈癌细胞中DAPK1基因CpG岛甲基化及其表达

目的 :探讨宫颈癌细胞中凋亡相关蛋白激酶 1(DAPK1 )基因CpG岛甲基化及其表达与宫颈癌的相关性 .方法 :应用甲基化特异性PCR和SABC免疫组化方法 ,检测 32(鳞癌 1 8,腺癌 1 4 )例宫颈癌组织DAPK1基因CpG岛甲基化修饰及蛋白表达 .结果 :宫颈癌中DAPK1基因甲基化扩增阳性率明显增高 5 6 .3% ,与正常宫颈比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,鳞癌与腺癌甲基化扩增阳性率无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;宫颈癌中DAPK1蛋白表达阳性率降低 1 5 .6 3% ,与正常宫颈比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,鳞癌和 7例与腺癌无显著性差异 (P >0 .0 5 ) .结论 :DAPK1基因CpG岛异常甲基化修饰能抑制DAPK1的转录 ,使DAPK1蛋白不表达 ,丧失抑癌作用 。

5-Aza-CdR对胃癌细胞系BGC823生长及DAPK1基因甲基化的影响

目的观察5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的胃癌BGC823细胞增生和凋亡的影响及其对此细胞中DAPK1基因的甲基化状态的影响。方法选择浓度为1×10-6的5-Aza-CdR处理体外培养的BGC823细胞后,用Annexin-v-FITC凋亡检测药物处理后细胞凋亡情况;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;RT-PCR法检测用药前后细胞中DAPK1的mRNA表达的变化。结果在药物作用24、48、72 h后细胞的凋亡率分别为5.83±0.53、9.23±0.58、15.34±0.90,较对照组明显增加(P<0.05)。DAPK1基因的甲基化状态得到了逆转,DAPK-1基因的mRNA表达得到增加。结论5-Aza-CdR对BGC823细胞具有增生抑制作用,并促进细胞凋亡。DAPK1基因表达情况与其甲基化状态的改变有关。

胃癌DAPK1基因启动子甲基化状况及表达的研究

目的对DAPK1基因甲基化状态、表达进行研究,探讨基因甲基化在胃癌发病中的作用。方法用半定量RT-PCR方法研究胃癌及癌旁组织中DAPK1基因的表达,用甲基化特异性PCR(MSP)对胃癌及癌旁组织中DAPK1基因启动子区甲基化情况进行研究。结果 DAPK1有16例表达下调,6例表达上调,基因在癌旁组织的mRNA表达明显高于癌组织,具有统计学意义(P=0.465)。DAPK1在胃癌组织及癌旁组织中甲基化率均为100%,无统计学意义(P>0.05)。结论胃癌组织中DAPK1基因表达下降与该基因甲基化无明确相关性。

PERK参与调控砷化物诱导细胞自噬反应的信号转导机制研究

目的探索PERK是否参与调控砷化物诱导的细胞自噬反应。方法体外培养人肝癌细胞HepG2,以砷化物为刺激源,采用Western印迹方法检测自噬反应标志性蛋白的表达水平、PERK诱导活化状态以及敲低PERK表达水平后砷化物诱导细胞自噬反应和p53诱导活化水平变化情况;采用双荧光素酶报告基因技术检测敲低PERK表达水平后p53的转录激活活性变化。结果砷化物刺激HepG2细胞后自噬反应相关蛋白Beclin-1诱导表达、LC3发生剪切、p62发生降解反应,同时PERK活化水平显著增强;敲低PERK表达水平后,砷化物刺激作用下Beclin-1的诱导表达、LC3的剪切以及p62的降解均被显著抑制;同样条件下p53在Ser15和Ser392位的磷酸化修饰反应水平和转录激活活性显著下降、p53下游靶基因DAPK1的诱导表达水平被显著抑制。结论 PERK能通过调节p53活化及其下游靶基因DAPK1表达从而介导砷化物诱导的细胞自噬反应。