DAPPER1对食管鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响及其表观遗传学调节机制

目的检测DAPPER1蛋白对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)细胞株恶性生物学行为的影响,并进一步分析ESCC组织中DAPPER1蛋白表达及引起其表达异常的可能机制。方法应用MTT、克隆形成、划痕修复实验检测DAPPER1对ESCC细胞株恶性生物学行为的影响;应用RT-PCR及甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测细胞株(TE13、T.Tn、Eca109)中DAPPER1 mRNA的表达及其启动子区甲基化状态;应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测ESCC组织中DAPPER1蛋白的表达。结果 DAPPER1在3株细胞中呈弱表达或阴性,应用甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-Dc)处理细胞后,其表达强度在各细胞株中均有不同程度的增加;同时,DAPPER1过表达及5-Aza-Dc处理可明显抑制TE13细胞的增殖及迁移能力;而应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂trichostatin A(TSA)处理细胞株后,DAPPER1在各细胞株中的表达无明显改变;DAPPER1蛋白在ESCC组织中的表达较癌旁组织明显下调(P<0.01),且其表达与该基因启动子区域异常甲基化状态有关(P<0.01)。结论 ESCC中DAPPER1主要起抑癌基因作用,并且该基因启动子区域的异常高甲基化可能是引起其表达下调的主要机制之一。

DACT1甲基化作为局部晚期鼻咽癌潜在生物标志物的临床研究

目的 分析Dapper1/Dpr1(DACT1)甲基化作为局部晚期鼻咽癌(NPC)预后生物标志物的可行性。方法 收集2018年6月~2021年3月黄石市中心医院耳鼻咽喉科保存的112例局部晚期NPC患者的肿瘤石蜡标本,采用焦磷酸测序分析DACT1甲基化状态,分为甲基化组(n=51)和非甲基化组(n=61)。随访记录患者的总生存期(overall survival,OS)。结果NPC细胞系中DACT1的甲基化依赖转录沉默。甲基化阳性在c T3~4级的患者中更为常见(P<0.001)。DACT1甲基化和非甲基化患者OS无差异(Log rank χ~2=0.066,P=0.797)。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)低表达者OS时间长于EGFR高表达者(Log rank χ~2=57.289,P<0.001),且在EGFR低表达患者中,DACT1非甲基化患者的OS较甲基化患者更长(Log rank χ~2=8.524,P=0.004)。Cox回归分析显示,DACT1-甲基化/高EGFR是影响局部晚期NPC患者OS的独立危险因素(P<0.001)。结论 对于EGFR低表达局部晚期NPC患者,DACT1非甲基化状态与更好的生存率相关。

Dapperl在胃癌组织中的表达及其对survivin介导的细胞凋亡的调控

目的研究Dapper1（Dpr1）在胃癌组织中的表达及其对survivin介导的细胞凋亡的调控。方法用RT-PCR方法检测30例患者胃癌及癌旁正常组织中Dpr1 mRNA的表达情况；用RT-PCR检测SGC7901细胞转染pcDNA3．1-Dpr1质粒前后Dprl和survivin mRNA表达的变化；用Westernblot检测转染前后Dvl-2、β-catenin及survivin蛋白表达的变化；用流式细胞术检测转染后SGC7901细胞凋亡率的变化。结果本组30例胃癌组织中17例DapperlmRNA表达下调，发生率为57％，且与胃癌的浸润深度和分化程度相关（P〈0．05）；转染pcDNA3．1-Dpr1后SGC7901细胞中Dpr1 mRNA表达水平上调，survivin mRNA表达水平下调；Dvl-2、β-catenin以及Survivin蛋白表达量降低；转染pcDNA3．1-Dpr1质粒后SGC7901细胞的凋亡率升高。结论Dpr1能够通过经典WNT通路抑制凋亡相关蛋白survivin的表达，在胃癌细胞的凋亡中发挥重要作用。