DAPT基础上利伐沙班与低分子肝素在ACS患者短期抗凝中的疗效对比

目的 探讨双联抗血小板治疗(Dual Antiplatelet Therapy,DAPT)基础上利伐沙班与低分子肝素在急性冠状动脉综合征(Acute Coronary Syndrome,ACS)患者短期抗凝治疗的安全性及有效性对比。方法 选取2022年1月至2023年1月在我院收治的ACS患者100例,按随机数字表法分为利伐沙班组(n=50)和低分子肝素组(n=50),两组患者均进行DAPT治疗,利伐沙班组患者给予口服利伐沙班片进行治疗,低分子肝素组给予皮下注射低分子肝素进行治疗,对比两组患者不同程度出血发生情况、不良心血管事件发生情况、凝血指标[凝血酶时间(Thrombin Time,TT)、活化部分凝血活酶时间(Activated Partial Thromboplastin Time,APTT),凝血酶原时间(Prothrombin Time,PT)和血浆纤维蛋白原(Fibrinogen,FIB)]。结果 干预后,利伐沙班组总出血率低于低分子肝素组;利伐沙班组不良性心血管事件发生率低于低分子肝素组;利伐沙班组TT、APTT、PT升高且较低分子肝素组更明显,利伐沙班组FIB下降且较低分子肝素组更明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 在ACS患者DAPT治疗基础上,利伐沙班短期抗凝效果优于低分子肝素,且出血率及不良心血管事件发生率更低,具有安全性。

γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Notch信号逆转马兜铃酸诱导的肾小管细胞表型转化

目的探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对马兜铃酸(AA)诱导引起肾小管上皮细胞表型转化与胶原累积的作用及分子机制。方法将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为正常细胞对照组、AA10 mg·L-1组、AA 10 mg·L-1+DAPT1和10μmol·L-1组。24 h后,实时荧光定量PCR检测Notch信号关键分子Notch1、Jagged1和Numb、表型转化相关分子转化生长因子β1(TGF-β1)、E-钙黏着蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨形态发生蛋白7(Bmp7)和基质成分Ⅰ型胶原a1(Col1a1)和Ⅲ型胶原a1(Col3a1)m RNA的表达;细胞免疫荧光染色法检测Notch1、Jagged1、α-SMA和Col3a1蛋白的表达。结果与正常细胞对照相比,AA处理后,肾小管上皮细胞基质相关因子TGF-β1,α-SMA和Col3a1 m RNA表达上调,上皮标志物E-钙黏着蛋白m RNA的表达受到抑制,而且导致了Notch1、Jagged1 m RNA表达的上调和Numb m RNA表达的下调(P<0.05),提示AA促进肾小管上皮细胞表型转化与基质累积,同时激活了Notch信号通路。DAPT干预AA作用后,Notch1(P<0.01)和Jagged1(P<0.05)的m RNA表达下调,Numb m RNA表达上调(P<0.05),说明DAPT抑制了AA诱导的Notch信号通路活化。此外,与AA损伤组相比,DAPT也降低了TGF-β1,α-SMA,Col1a1和Col3a1 m RNA表达(P<0.05),提高BMP-7和E-钙黏着蛋白m RNA表达(P<0.05),提示DAPT抑制了AA诱导的上皮细胞的表型转化与基质累积。结论 DAPT抑制AA诱导的肾小管上皮细胞的表型转化与基质累积,其可能机制是DAPT靶向干预Notch信号的活化。

钝挫伤及力竭运动对大鼠骨骼肌卫星细胞激活及Pax7/CBF1/DAPT含量的影响

目的:研究钝挫伤及力竭运动对大鼠骨骼肌卫星细胞激活及Pax7/CBF1/DAPT含量的影响,探索损伤修复的机制。方法:取7周龄雄性SD大鼠24只,分为4组,每组6只:安静对照组(C组);力竭运动即刻组(E0组);力竭运动后24 h组(E24组);力竭运动后48 h组(E48组)。另取18只SD大鼠,分为3组,每组6只:钝挫伤即刻组(Do组);钝挫伤后24 h组(D24组);钝挫伤后48 h组(D48组)。各组分别于安静状态、力竭运动后和钝挫伤后不同时间点,宰杀取血,分离血清。并取下右侧腓肠肌,将腓肠肌分为二份,一份立即进行细胞培养实验,另一份和血清一起在-80℃冰箱保存,用ELISA法检测Pax7、CBF1、DAPT的含量变化。另取新生3日龄鼠3只,宰杀后同样取右侧腓肠肌进行细胞培养实验。结果:(1)体外培养结果显示:新生鼠1天后即可见到梭形卫星细胞,其它各组的肌卫星细胞增长速度较慢,到第3天、第5天时各组开始大量增殖梭形细胞,且一直保持增殖良好并传代,第7天仍有较好的长势,且出现部分融合和微管。各组比较显示,安静对照组未见卫星细胞增殖;新生鼠卫星细胞数量最高,增殖速度也最快;而钝挫伤组的肌卫星细胞数量及增殖速度显著高于力竭运动组。(2)ELISA结果显示:力竭运动组和钝挫伤组各组骨骼肌、血清中CBF1和Pax7的含量与安静对照组相比均显著上调(P<0.05),其中D0组的CBF1含量差异极显著(P<0.01),明显高于其他各组(P<0.05);D24、D48两组的Pax7含量亦明显高于其他各组(P<0.05)。而DAPT在各组骨骼肌、血清中的含量与安静对照组相比均显著下调(P<0.05),其中D0组DAPT差异极显著(P<0.01)且明显低于其他各组(P<0.05)。但力竭运动各组(E0、E24、E48)之间无显著性差异。结论:(1)钝挫伤及力竭运动可使肌卫星细胞激活、增殖分化,并且钝挫伤导致的肌卫星细胞的激活数量明显高于力竭运动组,可能由于钝挫伤的刺激更强所致。(2)钝挫伤和力竭运动可以使大鼠骨骼肌和血清Pax7和CBF1的含量上升,但下调DAPT的含量。Pax7和CBF1可能在骨骼肌卫星细胞激活及骨骼肌损伤修复中起着正向调节的作用,而DAPT可能起着负向调节作用。

超声波促进DAPT一步法制备HMX

以超声波为反应促进剂,离子液体为吸收剂,N2O5/HNO3硝解DAPT一步法制备HMX。考察了超声波频率、溶剂种类和用量、反应温度和硝解剂浓度等因素对硝解反应的影响。结果表明,合成HMX的最优化条件是:超声波频率为40kHz,离子液体为[BMIM]PF6,HNO3、N2O5和DAPT的摩尔比为24∶3∶1,反应温度为40℃,反应时间为1h。在此条件下,HMX的收率为66.8%,纯度为82%。

γ-分泌酶抑制剂DAPT对人宫颈癌Hela细胞体外增殖的影响

目的探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对人宫颈癌Hela细胞系增殖和凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞;MTT法检测不同浓度DAPT(1.0、5.0、10.0μmol/L)对Hela细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析不同浓度DAPT对Hela细胞凋亡率及细胞周期分布的影响。结果 3种浓度的DAPT均能显著抑制Hela细胞的增殖,抑制率分别为22.847%、32.492%、46.565%,作用呈明显剂量依赖性;不同浓度的DAPT能使Hela细胞凋亡率明显增加,分别为,且使S期、G2/M期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例显著增加,作用呈剂量依赖性。结论 DAPT对体外培养的人宫颈癌Hela细胞具有抑制增殖、调节细胞周期、诱导凋亡的作用。

γ-分泌酶抑制剂DAPT通过下调NOTCH1信号通路抑制结肠癌HCT116细胞增殖的实验研究

目的探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT能否通过下调NOTCH1信号通路抑制结肠癌HCT116细胞增殖,以及对Hes1基因表达的影响。方法使用不同浓度的DAPT(0μM、1μM和10μM)对结肠癌HCT116细胞进行干预。在不同时间点(0h、24h和48h)使用MTT法对HCT116细胞活性进行测定。在干预48h后,使用RT-PCR对在不同浓度(0μM、1μM和10μM)DAPT干预后细胞NOTCH1和Hes1mRNA的表达水平进行测定。使用western blot对在不同浓度(0μM、1μM和10μM)DAPT干预后细胞NOTCH1和Hes1蛋白表达水平进行测定。结果使用不同浓度DAPT(0μM、1μM和10μM)对结肠癌HCT116细胞进行干预后,细胞活性呈时间依赖性和浓度依赖性降低,差异均存在显著统计学意义(P均<0.05)。不同浓度DAPT(0μM、1μM和10μM)干预48h后,结肠癌HCT116细胞NOTCH1和Hes1mRNA和蛋白的表达水平呈浓度依赖性的下降,差异均存在显著统计学意义(P均<0.05)。结论本实验表明γ-分泌酶抑制剂DAPT可以通过下调NOTCH1信号通路,抑制结肠癌HCT116细胞增殖。

DAPT对肺成纤维细胞表型转化中Wnt信号通路的影响

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路与Notch信号通路之间存在间接或直接的相互作用以及该信号通路在DAPT抑制肺成纤维细胞增殖中的作用表达。方法:通过使用TGF-β1刺激SD大鼠胚肺成纤维细胞发生表型转化为肌成纤维细胞,并采用DAPT抑制Wnt/β-catenin信号通路,体外纯化肺成纤维细胞,使用细胞免疫荧光检测波形蛋白进行鉴定;分别采用5ng/mLTGF-β1和500nmol/L的DAPT作用于肺成纤维细胞24h,观察其形态学改变;分别采用RT-PCR及Western blot检测wnt1、β-catenin在肺成纤维细胞经TGF-β及DAPT作用24h后的表达情况。结果:与正常组相比较TGF-Β1能显著增加肺成纤维细胞中β-catenin的表达(P<0.05),但加用DAPT后wnt1及β-catenin在肺成纤维细胞中的表达下降(P<0.05)。结论:Wnt/β-catenin信号通路与Notch信号通路之间是存在相互关系的,TGF-β1可使肺成纤维细胞中的β-catenin表达增高;DAPT对于抑制肺成纤维细胞中的wnt/β-catenin信号通路发挥了作用。

DAPT调节Treg/Th17细胞免疫平衡抑制动脉粥样硬化

目的:观察Notch信号抑制剂分泌酶抑制剂(γ-DAPT)对动脉粥样硬化小鼠病理改变及Treg/Th17细胞免疫平衡的影响。方法:将24只Apo E基因敲除C57BL小鼠随机分为空白组、模型组和DAPT组。空白组用普通饲料饲养,模型组和DAPT组用高脂饲料饲养。饲养5周后,DAPT组小鼠以100 mg/(kg·d)皮下注射DAPT(溶于DMSO中),其余两组皮下注射等量DMSO。5周后,采用病理染色分析各组小鼠动脉病理改变,ELISA检测血浆中IL-17水平,采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏Treg/Th17细胞比例。结果:HE染色结果显示,模型组有明显粥样斑块形成和泡沫细胞形成,DAPT组动脉病变程度比粥样动脉硬化模型组明显减轻。正常组、模型组和DAPT组各组血浆中IL-17水平分别为(293.94±28.59)、(454.05±172.68)和(335.40±89.57)pg/ml;DAPT降低AS小鼠血浆IL-17水平(P<0.05)。空白组、模型组和DAPT组各组小鼠Treg细胞百分比分别为(3.80±0.56)%、(2.54±0.38)%和(4.73±0.64)%;DAPT降低AS小鼠血浆IL-17水平(P<0.05)。空白组、模型组和DAPT组各组小鼠Th17细胞亚群分别为(3.46±0.23)%、(4.52±0.85)%和(1.38±0.37)%。结论:DAPT降低AS小鼠血浆IL-17的水平,抑制Th17细胞亚群分化,而促进Treg细胞分化,通过改变Treg/Th17细胞免疫平衡从而减轻动脉粥样硬化。

Notch信号通路抑制剂DAPT改善酒精诱导的斑马鱼神经元分化障碍

目的探讨Notch信号通路在胎儿酒精谱系障碍(FASD)斑马鱼模型的神经元分化及及感觉-运动能力中的作用。方法首先,将斑马鱼胚胎分为二甲基亚砜(DMSO)组和50μmol/L氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯(DAPT,Notch信号通路抑制剂)处理组,检测比较两组斑马鱼的死亡率、孵化率以及畸形率;比较两组斑马鱼的身体长度;利用原位杂交和qRT-PCR技术检测两组神经干/前体细胞标志物sox2、神经前体细胞分化因子neurogenin1、神经元标志物huc的表达;检测两组在无刺激、强光、震动刺激情况下的行为学表现。其次,将斑马鱼胚胎分为DMSO组、1.5%酒精处理组、DAPT处理组、酒精和DAPT联合处理组,利用原位杂交和qRT-PCR技术检测各组sox2、neurogenin1、huc的表达,检测Notch信号通路相关基因(Notch)信号受体notch1a,促进神经发育的靶基因her8a及Notch胞内活性片段(NICD)的mRNA表达水平;检测各组在无刺激、强光、震动刺激情况下的行为学表现。结果50μmol/L DAPT处理斑马鱼胚胎后,受精后1 d(1 dpf)胚胎死亡率(P<0.01)显著增加,2 dpf孵化率显著降低(P<0.01),3 dpf畸形率(P<0.001)显著增加,15 dpf斑马鱼体长显著缩短(P<0.05);斑马鱼胚胎sox2表达水平显著降低(P<0.01),neurogenin1(P<0.05)和huc mRNA(P<0.01)表达水平显著增加;在无刺激、强光、震动刺激情况下,DAPT处理组的斑马鱼运动距离均显著缩短(P<0.001),运动速度均显著降低(P<0.05)。单独使用1.5%酒精处理斑马鱼胚胎后,notch1a、her8a及NICD的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);1.5%酒精联合DAPT处理斑马鱼胚胎后,较酒精单独处理组,neurogenin1和huc mRNA表达水平显著增加,sox2 mRNA表达水平显著降低(P<0.01),在强光刺激下的运动距离显著变长,运动速度显著变快(P<0.05)。结论酒精上调斑马鱼胚胎Notch信号、抑制神经元分化并降低感觉-运动能力,而抑制Notch信号通路可改善斑马鱼胚胎神经元分化及感觉-运动能力。

DAPT抑制人胶质瘤细胞增殖的体内外实验研究

目的研究Notch信号通路抑制剂DAPT对人胶质瘤细胞增殖的影响。方法应用不同剂量DAPT处理胶质瘤细胞系U251,噻唑蓝(MTT)比色试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,建立人胶质瘤裸鼠模型,观察肿瘤生长情况。结果DAPT呈剂量依赖性抑制U251细胞增殖,在浓度为0.25μmol/L时即有抑制作用,浓度为5.00μmol/L抑制效果更明显;随DAPT浓度增大G0/G1期细胞比率明显增多(P<0.01),而S期细胞比率明显减少(P<0.01),使细胞周期阻滞于G0/G1期;用药6周后DAPT处理组裸鼠皮下肿瘤体积明显缩小,平均瘤重对照组为(2.23±0.54)g,DAPT组为(0.97±0.29)g(P<0.01),抑瘤率为56.50%。结论DAPT通过阻断Notch信号通路,在体内外有效地抑制人胶质瘤细胞的增殖,提示抑制Notch信号通路的活性可能对胶质瘤的治疗起到一定的作用。

DAPT对肺纤维化小鼠Th17细胞分化的影响

目的研究γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断NOTCH信号通路对博来霉素致肺纤维化动物模型Th17细胞分化的影响,探索肺纤维化的发病机制。方法选取15只昆明鼠按随机数字表法分为对照组、模型组及DAPT组,每组5只。对照组气管注入生理盐水(1.25ml/kg),其余两组注入博来霉素(5mg/kg)复制肺纤维化模型。DAPT组于模型复制次日起用DAPT溶液灌胃[5mg/(kg·d)],隔天1次,直到处死。于第28天处死动物,取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色观察肺泡炎和肺纤维化程度。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺组织NOTCH1、白细胞介素-17(IL-17)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血NOTCH1、IL-17的含量。流式细胞术检测辅助T细胞17(Th17)的比例。结果模型组肺泡炎及纤维化程度较重,DAPT组炎症程度较模型组减轻,纤维组织大量减少。qRT-PCR结果显示,模型组NOTCH1、IL-17和α-SMAmRNA的表达水平均较对照组升高(P<0.05),NOTCH1水平与IL-17呈正相关(P<0.05);DAPT组较模型组下降(P<0.05)。ELISA结果显示DAPT组的外周血IL-17及NOTCH1含量较模型组下降(P<0.05)。流式细胞术结果显示模型组CD3^+CD4^+IL-17^+细胞数量增加(P<0.05),DAPT组较模型组降低(P<0.05)。结论DAPT阻断NOTCH信号通路的激活,抑制Th17的分化,减轻肺纤维化程度。

DAPT抑制胃癌BGC-823细胞增殖的体外实验研究

目的探讨Notch信号通路抑制剂氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰)-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯(DAPT)对胃癌细胞系BGC-823增值率的影响及其机制。方法体外培养BGC-823细胞,利用MTT检测DAPT引起的BGC-823细胞增值率的变化以及Western Blotting检测DAPT对凋亡相关蛋白caspase-3、Cytochrome C、Bcl-2和Bax表达水平的影响。结果与对照组相比,不同浓度DAPT可以引起明显的BGC细胞增值率的下降,同时凋亡相关蛋白caspase-3表达水平明显上升,线粒体凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比率、Cytochrome C表达水平明显升高。结论 Notch信号通路抑制剂DAPT可以通过线粒体凋亡通路诱导BGC-823细胞凋亡,抑制细胞增殖。

DAPT对人胶质瘤细胞系SHG-44增殖的抑制作用及机制

目的探讨γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对人脑胶质瘤细胞系SHG-44细胞体外增殖的抑制作用及机制。方法应用不同浓度的DAPT作用SHG-44细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及CD133+的肿瘤干细胞(TSC)数量的变化;应用RT-PCR及Western印迹法检测Notch通路关键分子(Notch-1,Delta-l,Hes-1)基因及蛋白水平的表达。结果 DAPT作用SHG-44细胞后,明显抑制了细胞增殖(P<0.05),且抑制作用呈剂量依赖性。细胞周期结果显示S期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例显著增加;CD133+的TSC数量明显减少。随着DAPT浓度的增加,Notch-1,Delta-l,Hes-1 mRNA及蛋白表达水平逐渐下降。结论 DAPT可以下调Notch通路中Notch-l、Delta-1、Hes-1的表达,减少TSC数量,抑制SHG-44细胞增殖。

DAPT通过抑制NOTCH信号通路对食管癌细胞株体外增殖的影响

目的探讨gama分泌抑制药物γ-分泌酶抑制剂(DAPT)通过抑制NOTCH信号通路对食管癌细胞株HE-1体外增殖的影响。方法将食管癌细胞随机分为四组,对照组和低、中、高实验组,实验组加入终浓度为1、5、10μmol/L的gama分泌抑制药物DAPT,对照组加入相应DAPT溶剂,检测细胞选择加入DAPT后的第0、24、48、72 h的细胞。癌细胞的增殖活性采用噻唑蓝(MTT)法进行检测,Notch信号通路活动情况采用Western印迹法检测相关蛋白的表达变化。结果三个剂量组72 h的抑制率分别为21.8%、53.0%、67.2%,高、中剂量组抑制率明显高于低于低剂量组(P<0.05);细胞增殖活性随DAPT接触时间的延长呈逐渐减低增强的趋势(P<0.05)。NOTCH信号通路中Notch2表达相对灰度值分别为0.801、0.615、0.410;hes1分别为0.812、0.623、0.453,组间差异有统计学意义(P<0.05)。蛋白的表达灰度值随DAPT接触时间延长呈逐渐减低增强的趋势(P<0.05)。结论 gama分泌抑制药物DAPT可以抑制NOTCH信号通路,进而对食管癌细胞株HE-1体外增殖发挥抑制作用。

DAPT对人肝癌细胞MHCC97H裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的探讨DAPT对人肝癌细胞MHCC97H裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法人肝癌细胞株MHCC97H接种于3~4周鼠龄的雄性裸鼠BALB/C-nu背部1周,建立裸鼠皮下移植瘤模型,记录裸鼠体质量。24只成瘤裸鼠随机分为4组,高剂量DAPT组（10 mg/kg,0.03 ml/只）、低剂量DAPT组（5 mg/kg,0.03 ml/只）、DAPT溶剂二甲基亚砜（DMSO）对照组（0.05%,0.03 ml/只）、空白对照组（生理盐水,0.03 ml/只）,腹腔注射给药。间隔2 d给药1次,共6次。观察裸鼠肿瘤生长情况及生存状态。于末次给药48 h后采用颈椎脱臼法处死全部裸鼠,称量裸鼠体质量,解剖瘤体,测量肿瘤体积,计算抑瘤率。结果药物干预前,4组移植瘤模型的裸鼠体质量差异无统计学意义（P〉0.05）;药物干预后,高剂量DAPT组与低剂量DAPT组较其他两组生存状态佳,高剂量DAPT组裸鼠体质量明显高于其他3组,差异有统计学意义（P〈0.05）;相比于其他3组,高剂量DAPT组移植瘤体积最小,差异有统计学意义（P〈0.05）;高剂量DAPT组及低剂量DAPT组的抑瘤率分别与DMSO对照组及空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 DAPT抑制人肝癌细胞MHCC97H裸鼠皮下移植瘤生长,改善人肝癌细胞MHCC97H荷瘤裸鼠的生存状态。

DAPT对离体培养的基底膜的影响

目的观察新生大鼠体外培养的基底膜在Notch通路被阻断的情况下,毛细胞的生长变化情况。方法取新生(P0)SD大鼠耳蜗基底膜进行体外培养,采用自身对照的方式,实验组基底膜加入含Notch通路阻断剂DAPT(终浓度为5μM)的高糖培养基,对照组不加DAPT,培养5天(P5)后,用激光共聚焦显微镜观察毛细胞的生长变化情况。P0时采用逆转录PCR检测Notch通路的存在与否,P5时采用实时定量PCR检测阻断Notch通路后下游基因的变化情况。结果实验组经DAPT的处理后有毛细胞的增多,逆转录PCR证实了出生第一天时尚有Notch通路的存在,实时定量PCR证实DAPT处理后Hes1和Hes5表达降低,而Math1表达升高。结论新生大鼠中Notch通路活性尚存,加入Notch通路阻断剂DAPT后,抑制毛细胞生成的Hes1和Hes5表达降低,而促毛细胞生成的Math1表达升高,并且,通过形态学观察和统计学分析发现毛细胞数目增多。

DAPT对大鼠自体移植静脉桥狭窄的抑制作用

目的观察DAPT对大鼠自体移植静脉桥狭窄的抑制作用。方法成年Wistar大鼠随机分为实验组、对照组和安慰剂组,每组12只。所有大鼠分离并切取0.5cm长颈外静脉,移植到自体同侧颈总动脉中。分别于术后第1天、第4天和第7天取各组动物各4只,完整取下移植静脉桥,常规石蜡包埋,切片行HE及PCNA和TUNEL免疫组化染色,计算静脉桥中膜增生的厚度和平滑肌细胞PCNA和TUNEL阳性指数,并用Western blot检测SM22和SM MHC变化。结果移植后第7天实验组静脉桥中膜厚度和PCNA阳性指数比对照组和安慰剂组明显较小(P<0.05),但实验组凋亡程度明显高于安慰剂组。Western blot显示静脉桥移植后SM22和SM MHC表达明显降低,syndecan-1表达降低,但DAPT能够促使其表达回复。结论 DAPT能够缓解静脉桥狭窄,并对移植静脉内平滑肌细胞增生有抑制作用。

DAPT及顺铂对人卵巢癌HO8910细胞生物学性能的影响

目的观察γ-分泌酶抑制剂DAPT及顺铂对人卵巢癌HO8910细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响,为卵巢癌治疗提供新思路。方法常规培养HO8910细胞至对数生长期,随机分为DAPT组、顺铂组、联合组及对照组,前三组分别以不同质量浓度DAPT、顺铂及DAPT+顺铂处理,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,体外迁移及侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果与对照组比较,DAPT组、联合组细胞增殖明显受抑(P均<0.05),且呈DAPT作用时间和剂量依赖性,尤以联合组为著(P<0.05);倒置显微镜下对照组细胞形态正常,DAPT组及联合组均出现细胞密度减低及凋亡现象;DAPT组、顺铂组、联合组细胞凋亡率均显著高于对照组(P均<0.05),尤以联合组为著(P均<0.05);与对照组比较,余三组细胞迁移抑制率、细胞侵袭抑制率均显著升高(P均<0.05),尤以联合组为著(P均<0.05)。结论DAPT与顺铂可协同抑制人卵巢癌HO8910细胞增殖、促进细胞凋亡、降低细胞侵袭及迁移能力,此为卵巢癌的治疗提供了新思路。

DAPT对成牙骨质细胞增殖活性的影响

目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对成牙骨质细胞株OCCM30的Notch信号通路是否有抑制作用,及对成牙骨质细胞增殖活性的影响,并初步探讨其作用机制。方法:γ-分泌酶抑制剂DAPT作用于OCCM30细胞,分别培养2、4、6d,采用RT-PCR检测Notch信号通路下游基因(Hes-1、Hey-1)和细胞周期相关基因(Cyclin D、Cyclin E)的表达,采用流式细胞术检测DAPT对OCCM30细胞周期的影响;DAPT作用于OCCM30细胞后,连续培养8d,采用CCK-8法测定细胞增殖活性。结果:实验组Hes-1、Hey-1、Cyclin D、Cyclin E mRNA的表达下降,G1/G0期细胞百分比增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);第2~8天,实验组细胞增殖活性(A450值)显著降低,呈浓度依赖性,且与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DAPT能有效抑制成牙骨质细胞株OCCM30的Notch信号通路,抑制OCCM30细胞的增殖活性,其机制可能与DAPT下调细胞周期相关基因(Cyclin D、Cyclin E)表达有关。

DAPT在ox-LDL损伤HUVECs过程中的细胞保护作用

目的:探究γ-分泌酶抑制剂N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester(DAPT)在氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)损伤人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)模型中的细胞保护作用及其对Notch信号通路的调控。方法:体外培养HUVECs,用oxLDL处理HUVECs构建细胞损伤模型。实验分为对照组、ox-LDL处理组、DAPT处理组和DAPT+ox-LDL处理组。用倒置相差显微镜观察不同处理方法下细胞的形态变化;CCK-8法检测细胞存活率;Western blot法检测蛋白Notch1、Notch4和Jagged1的表达情况。结果:体外培养HUVECs,倒置相差显微镜下发现ox-LDL处理组细胞死亡和碎片增多,经DAPT预处理后,ox-LDL作用造成的细胞损伤死亡较少,细胞碎片较少。通过CCK-8法检测发现ox-LDL处理组细胞存活率降低,DAPT处理组细胞存活率升高,DAPT预处理后ox-LDL造成存活率降低的幅度变小。在ox-LDL作用下,Notch1和Jagged1蛋白表达量降低,Notch4表达量升高;而DAPT作用下Notch1和Jagged1表达量升高,Notch4表达量降低;ox-LDL与DAPT共同作用时蛋白接近正常水平。结论:ox-LDL对HUVECs具有损伤作用;DAPT减轻ox-LDL对HUVECs造成的损伤;DAPT保护HUVECs免受ox-LDL损伤的作用与Notch信号通路有关。