多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2蛋白高效表达和纯化

目的在前期的研究中,DAZAP2基因在多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)患者中表达明显下调,可能为MM的负性基因.须进一步获得DAZAP2蛋白,制备抗体,从而在蛋白水平上研究DAZAP2的表达、结构和功能.方法将原核重组质粒pQE30-DAZAP2转化大肠杆菌,阳性菌株经1 mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,再经过纯化和透析.结果IPTG诱导4 hr时,得到大量重组目的蛋白,占可溶蛋白的20%左右,经过Ni-NTA层析柱纯化,获得分子量为17kD的DAZAP2蛋白浓度为0.97 mg/ml.结论DAZAP2蛋白获得高效表达,并且建立快速简便的纯化方法,目的蛋白可以用于下一步的实验.

五指山小型猪DAZAP2cDNA的克隆及其生物信息学分析

为了克隆五指山小型猪DAZ相关蛋白2(DAZAP2)cDNA全长并进行生物信息学分析,试验以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR方法克隆得到DAZAP2全长cDNA序列,并运用生物信息学软件对其核苷酸序列进行分析,预测其编码蛋白的理化性质及二级结构等。结果表明:五指山小型猪DAZAP2基因的核苷酸序列及其氨基酸序列与人、苏门达腊猩猩、斑马鱼、非洲爪蟾、牛、褐家鼠等动物具有很高的相似性。DAZAP2 cDNA全长943 bp,5'非翻译区长69 bp,3'非翻译区长367 bp,含有1个完整的开放阅读框,编码168个氨基酸。该蛋白的分子质量为17 311 ku,等电点为7.48。