DBA/2J小鼠对糖尿病诱导剂STZ反应的性别差异

目的研究DBA/2J小鼠对糖尿病诱导剂链脲佐菌素(STZ)反应的性别差异。方法DBA/2J小鼠经STZ腹腔注射后2、6、10周,分别测定体质量、空腹血糖(FBG)、尿蛋白含量。结果与雌性小鼠比较,雄性小鼠体质量降低,FBG水平及尿蛋白含量升高。结论单独STZ注射未能引起雌性DBA/2J小鼠的糖尿病反应。

青光安Ⅱ号方有效组分对慢性高眼压DBA/2J小鼠视网膜神经节细胞的保护作用及机制

目的观察青光安Ⅱ号方及其低、中、高浓度有效组分对青光眼模型小鼠视网膜神经节细胞的保护作用机制。方法将8只雌性C57BL/6小鼠设为正常对照组(A组)并灌胃蒸馏水,48只38周龄雌性DBA/2J小鼠随机分成6组:模型组(B组)、益脉康分散片组(C组)、青光安Ⅱ号汤剂组(D组)、青光安Ⅱ号有效组分低浓度组(E组)、青光安Ⅱ号有效组分中浓度组(F组)、青光安Ⅱ号有效组分高浓度组(G组),分别灌胃蒸馏水、益脉康分散片混悬液、青光安Ⅱ号方汤剂、青光安Ⅱ号方有效组分低/中/高浓度汤剂。干预4周后,HE染色观察小鼠视网膜组织结构,TUNEL染色观察视网膜神经节细胞凋亡,免疫组化染色观察视网膜组织神经节细胞层糖原合酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、β-连环蛋白(β-Catenin)及同源盒基因-6(paired box gene-6,Pax6)表达情况,Western blot法测定视网膜组织GSK-3β、β-Catenin及Pax6蛋白相对表达量。结果眼压测量发现,DBA/2J小鼠眼压在26周及以后明显上升,从第14周开始DBA/2J小鼠眼压明显高于C57BL/6J组(P<0.05或P<0.01);A组小鼠视网膜各层组织结构清晰、完整、染色均匀、清晰可见3个核层,神经节细胞呈单层排列,比较连续无间断,细胞呈圆形或椭圆形;B组小鼠视网膜以神经节细胞层(ganglion cell layer,GCL)损伤最为明显,神经节细胞明显减少,连续性中断,胞内空泡样变性,核固缩;C组、D组、E组、F组、G组神经节细胞数目增多,胞内空泡样变性改变均有所改善。与A组比较,B组凋亡指数明显升高(P<0.01);与B组比较,C组、D组、E组、F组、G组凋亡指数均明显降低(P<0.01);与C组、D组比较,E组凋亡指数升高(P<0.05)。与A组比较,B组视网膜GSK-3β表达量明显升高(P<0.01),β-Catenin和Pax6表达量明显降低(P<0.01);与B组比较,C组、D组、E组、F组、G组GSK-3β表达量均明显降低(P<0.01),C组、D组、G组β-Catenin表达量均有升高(P<0.05或P<0.01),C组、D组、F组、G组Pax6表达量均有升高(P<0.05或P<0.01);与C组和D组比较,G组GSK-3β表达量降低(P<0.05),β-Catenin和Pax6表达量升高(P<0.01)。Western blot检测发现B组视网膜GSK-3β蛋白表达量明显升高(P<0.01),β-Catenin和Pax6蛋白表达量明显降低(P<0.01);与B组比较,C组、D组、E组、F组、G组GSK-3β蛋白表达量均明显降低(P<0.01),C组、D组、G组β-Catenin和Pax6蛋白表达量均有升高(P<0.05);与C组、D组比较,G组GSK-3β表达量降低(P<0.05),β-Catenin和Pax6表达量升高(P<0.01)。结论高浓度青光安Ⅱ号方有效组分能明显改善青光眼视网膜结构,抑制RGCs凋亡,抑制GSK-3β蛋白和促进β-Catenin、Pax6蛋白在视网膜中的表达,其作用可能与激活Wnt/β-Catenin/Pax6信号通路有关。

青光安Ⅱ号方有效组分对青光眼模型DBA/2J小鼠视网膜中RhoA、ROCK及Caspase-3蛋白表达的影响

目的观察青光安Ⅱ号方有效组分对青光眼模型DBA/2J小鼠视网膜中RhoA、ROCK及Caspase-3蛋白表达的影响。方法将8只(16只眼)雌性C57BL/6小鼠设为空白组(A组),48只(96只眼)雌性DBA/2J小鼠随机分成6组,每组8只(16只眼),分别为:模型组(B组)、益脉康分散片组(C组)、青光安II号汤剂组(D组)、青光安Ⅱ号有效组分低浓度组(E组)、青光安Ⅱ号有效组分中浓度组(F组)、青光安Ⅱ号有效组分高浓度组(G组),B、C、D、E、F、G组DBA/2J小鼠喂养38周龄建立青光眼模型后开始干预,干预4周后Western blot法检测DBA/2J小鼠视网膜中RhoA、ROCK及Caspase-3蛋白的相对表达量。结果干预4周后,与A组比较,B组RhoA、ROCK、Caspase-3蛋白相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C、D、E、F、G组RhoA、ROCK、Caspase-3蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与C组比较,D、E、F组RhoA、ROCK、Caspase-3蛋白相对表达差异无统计学意义(P>0.05);与C、D组比较,G组RhoA、ROCK、Caspase-3蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论青光安Ⅱ号方有效组分能抑制Rho/ROCK信号通路及凋亡相关蛋白Caspase-3的表达,其中高浓度青光安Ⅱ号方有效组分效果优于益脉康分散片和青光安Ⅱ号方汤剂,推测青光安Ⅱ号方及其有效组分治疗青光眼的机制可能与其抑制Rho/ROCK信号通路及视网膜细胞凋亡相关蛋白表达有关。

DBA/2J小鼠耳蜗毛细胞静纤毛早期的形态结构变化

目的:观察低周龄DBA/2J小鼠耳蜗毛细胞静纤毛形态结构的变化,探讨DBA/2J小鼠早期听力受损的原因。方法:检测DBA/2J小鼠2、4周龄和8周龄听觉脑干反应,扫描电镜下观察耳蜗底回毛细胞静纤毛的形态结构特征。结果:听觉脑干反应显示DBA/2J小鼠在4周龄后表现为渐进性的听力受损。扫描电镜可见2周龄时高倍镜下纤毛束融合并伴有纤毛束软化,4周龄时纤毛束融合、软化和倒伏更为严重,8周龄低倍镜下纤毛束缺失数目较多,尚存纤毛融合倒伏更为严重。结论:DBA/2J小鼠耳蜗毛细胞静纤毛出现纤毛束融合、软化、弯曲、倒伏甚至缺失,可能是导致其早发性听力受损的主要原因。

青光安颗粒剂对DBA/2J小鼠视神经中自噬途径相关蛋白表达的影响

目的 研究青光安颗粒剂(以下简称为青光安)对自发性青光眼模型DBA/2J小鼠视神经中自噬途径相关蛋白表达的影响。方法 将10只C57BL/6J小鼠作为空白组;采用随机数字法将30只DBA/2J小鼠分为模型组、低剂量组、高剂量组,每组10只。喂养小鼠至38周龄,期间观测小鼠眼压,待DBA/2J小鼠自动成模后开始灌胃。模型组每日以生理盐水灌胃;低剂量组、高剂量组分别灌胃青光安20.75、103.75 g/kg,每日1次。各组小鼠均以常规饲料喂养。灌胃15 d后取右眼视神经。各组采用Western blot法检测微管相关蛋白轻链3 (microtubule-associated protein light chain 3,LC3)、溶酶体相关膜蛋白1 (lysosome-associated membrane protein 1,LAMP1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-3)、细胞色素C(cytochrome C,CytC)蛋白表达,采用RT-PCR法检测E3泛素连接酶(Parkin)、LAMP1、Caspase-3 mRNA的表达。结果 小鼠喂养至38周龄后,DBA/2J小鼠眼压上升,造模成功。与空白组相比,模型组LAMP1、Caspase-3、CytC、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达升高,Parkin、LAMP1、Caspase-3 m RNA表达升高(P<0.05)。与模型组相比,低剂量组LAMP1、CytC、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达降低(P<0.05),LAMP1、Caspase-3 mRNA表达降低(P<0.05);高剂量组LAMP1、Caspase-3、CytC、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达降低,Parkin、LAMP1、Caspase-3 mRNA表达降低(P<0.05)。与低剂量组相比,高剂量组Parkin、Caspase-3、LAMP1 mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论 青光安可通过调控青光眼小鼠视神经中Parkin、LAMP1、LC3、Caspase-3、CytC的表达,使得线粒体自噬过程完整进行,对视神经具有保护作用。

青光安Ⅱ号方及其有效组分对DBA/2J小鼠视网膜Ras、MEK及ERK蛋白表达的影响

目的观察青光安Ⅱ号方及其有效组分对DBA/2J小鼠视网膜细胞中Ras、MEK与ERK蛋白表达的影响,探讨其对视神经保护的作用机制。方法将8只雌性C57BL/6J小鼠作为正常对照组(A组),采用随机数字表法将48只雌性DBA/2J小鼠分为6组:模型组(B组)、阳性对照组(C组)、青光安Ⅱ号方汤剂组(D组)、青光安Ⅱ号方有效组分低剂量组(E组)、青光安Ⅱ号方有效组分中剂量组(F组)、青光安Ⅱ号方有效组分高剂量组(G组),每组8只。A、B组给予12.91 mL/(kg·d)蒸馏水;C组给予0.31 g/(kg·d)益脉康分散片;D组给予9.67 g/(kg·d)青光安Ⅱ号方汤剂;E、F、G组分别给予0.85、1.70、3.40 g/(kg·d)青光安Ⅱ号方有效组分。每4周进行眼压测量以及裂隙灯检查;灌胃4周后取视网膜组织行Western blot检测各组小鼠视网膜Ras、MEK与ERK蛋白的表达水平。结果C57BL/6J小鼠不同时相点的眼压不随年龄增长而变化(P>0.05);DBA/2J小鼠眼压在第18~38周高于C57BL/6J小鼠(P<0.05)。裂隙灯检查C57BL/6J小鼠眼前段均未见明显异常;DBA/2J小鼠随周龄增长逐渐出现角膜钙化、虹膜基质萎缩、瞳孔后粘连等眼前节病变。与A组比较,B组Ras、MEK、ERK蛋白表达水平均降低(P<0.05);与B组比较,C、D、E、F、G组Ras蛋白表达水平均升高(P<0.05),G组MEK、ERK蛋白表达水平均升高(P<0.05);与C组比较,G组Ras蛋白表达水平升高(P<0.05);与D组比较,G组MEK蛋白表达水平升高(P<0.05);与E、F组比较,G组Ras蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论青光安Ⅱ号方及其有效组分低、中、高剂量对DBA/2J小鼠视网膜Ras、MEK、ERK蛋白可起到不同程度的上调作用,以青光安Ⅱ号方有效组分高剂量组效果最佳。

青光安Ⅱ号方对DBA/2J小鼠视网膜中Rho/ROCK相关因子的影响

目的:观察青光安Ⅱ号方对DBA/2J小鼠视网膜中RhoA mRNA、ROCK mRNA、Caspase-3mRNA及Bcl-2 mRNA转录的影响。方法:使用48只DBA/2J小鼠随机平均分成模型组、青光安Ⅱ号汤剂组、青光安Ⅱ号有效组分低、中、高浓度组及阳性对照组(益脉康分散片组)6组,同时使用8只C57BL/6J小鼠作为空白组,DBA/2J小鼠喂养到38周后形成青光眼模型,干预4周后,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time,PCR)检测DBA/2J小鼠视网膜中RhoA mRNA、ROCK mRNA、Caspase-3 mRNA及Bcl-2 mRNA的转录情况。结果:干预4周后,在RhoA mRNA、ROCK mRNA和Caspase-3 mRNA的转录中,与空白组相比,其它6组的相对表达量均升高,模型组、益脉康分散片组及青光安Ⅱ号方有效组分低浓度组有统计学差异(P<0.05);与模型组相比较,其它6组的相对表达量均低于模型组,其中RhoA mRNA转录中的青光安Ⅱ号方汤剂组和青光安Ⅱ号方有效组分高浓度组有统计学差异(P<0.05);ROCK mRNA和Caspase-3 mRNA的转录中,模型组与青光安Ⅱ号方有效组分中、高浓度组统计学有差异(P<0.05);在Bcl-2 mRNA转录中,与空白组比较,其它6组相对表达量均下降,模型组、青光安Ⅱ号方汤剂组和青光安Ⅱ号方有效组分低浓度组统计学有差异(P<0.05);青光安Ⅱ号方有效组分中、高浓度组的Bcl-2 mRNA的相对表达量均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高浓度青光安Ⅱ号方可能是通过抑制Rho/ROCK信号通路而减弱了视网膜神经节细胞(RGCs)中Caspase-3的转录,激活了Bcl-2的表达,从而减弱了RGCs的凋亡。

DBA/1J小鼠胶原诱导关节炎模型的建立与鉴定

目的建立DBA/1J小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型,从形态学、病理学及免疫学等多方面对该模型进行鉴定。方法将牛Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen,CⅡ)与佐剂混合并充分乳化,于DBA/1J小鼠尾根部皮下注射进行初次免疫,21 d后同样的方法进行再次免疫。观察小鼠体重变化、关节肿胀程度等形态学指标,进行踝关节病理检查,并用CBA法检测血清中细胞因子的水平。结果造模组小鼠体重于首免后35 d开始下降并持续低于对照组。于28 d,造模组小鼠出现足爪红肿,35 d足爪肿胀厚度显著高于对照组(P<0.05),至62 d发病率高达90%。病理学检测显示,造模组小鼠关节腔变窄,滑膜组织增生,炎症细胞浸润,软骨结构不同程度破坏。相比于对照组,造模组小鼠血清中炎性因子IL-6、IFN-γ、MCP-1显著升高(P<0.05),而抗炎因子IL-10轻微下降(P>0.05)。结论 DBA/1J小鼠尾根部皮下注射牛Ⅱ型胶原可成功诱导CIA模型。

表达绿荧光蛋白的多药耐药微小残留白血病细胞的小鼠模型

为了方便研究多药耐药微小残留白血病的病理生理和治疗,采用携带绿荧光蛋白(EGFP)基因标记的小鼠多药耐药白血病细胞系P388/VCRG和DBA小鼠建立一个检测多药耐药微小残留白血病的动物模型。结果显示,P388/VCRG细胞腹腔接种DBA小鼠,白血病的发病率为100%,无自发缓解。P388/VCRG白血病模型小鼠对环磷酰胺(Cy)敏感,有较好的药物剂量生存时间关系,接种细胞的对数与Cy剂量间有良好回归相关关系。白血病诱导缓解后残留白血病细胞在肝、脾、胸腺及骨髓等脏器呈不均匀分布。冰冻切片荧光显微镜下观察EGFP+细胞是检测小鼠体内微小残留白血病细胞最敏感的方法。结论:采用P388/VCRG细胞和DBA小鼠可建立表达EGFP的多药耐药小鼠微小残留白血病模型。

淫羊藿苷调控急性淋巴细胞白血病PI3K/Akt信号传导通路的实验研究

目的观察淫羊藿苷对近交系DBA小鼠急性淋巴细胞白血病磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号传导通路的影响并分析其机制。方法近交系DBA/2小鼠60只,采用皮下注射急性淋巴细胞白血病细胞系L1210细胞以建立L1210白血病模型,然后随机均分为模型对照组、阳性对照组和淫羊藿苷2.5 mL/kg组、淫羊藿苷5 mL/kg组和淫羊藿苷10 mL/kg组(n=12只),1周后淫羊藿苷2.5 mL/kg组、5 mL/kg组和10 mL/kg组灌胃给予对应剂量的淫羊藿苷,模型对照组灌胃给予等体积0.9%氯化钠注射液对照,阳性对照组灌PI3K/Akt抑制剂LY294002对照。治疗3周后采用人工法计数尾静脉血细胞分类及血象;取小鼠肝、脾组织,采用Westem blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及磷酸化蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达,实时定量PCR(RT-PCR)检测组织同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)m RNA和Akt m RNA的表达。结果与模型对照组比较,淫羊藿苷2.5 mL/kg组、5 mL/kg组和10 mL/kg组尾静脉血细胞淋巴细胞、白细胞和L1210细胞总数均明显降低,而中性粒细胞升高(P<0.05);小鼠肝、脾组织Bcl-2、p-Akt蛋白和Akt m RNA蛋白表达水平显著降低,PTEN蛋白和PTEN m RNA则高表达(P<0.05);且上述指标中,淫羊藿苷5 mL/kg组与2.5 mL/kg组比较(P<0.05);淫羊藿苷10 mL/kg与5 mL/kg组和2.5 mL/kg组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。至治疗结束时淫羊藿苷2.5 mL/kg组、5 mL/kg组和10 mL/kg组小鼠存活数、体质量、肝脾和皮下瘤重与模型对照组比较(P<0.05),差异有统计学意义。结论淫羊藿苷可能通过阻断PI3K/Akt信号传导通路而实现抑制L1210细胞增殖效应,且这种作用呈剂量依赖性。

DBA/2J小鼠房水引流通道中色素颗粒分布及其与眼压关系的实验研究

目的探讨色素性青光眼动物模型DBA/2J小鼠房水引流通道中色素颗粒形态、大小、数量与眼压之间的关系。设计实验研究。研究对象9周龄雄性DBA/2J小鼠20只(40眼)。方法定期监测眼压和眼前节变化,12、20、28、36周龄随机各取3只(6眼),按眼压正常与否分成正常眼压和高眼压组。光镜观察不同眼压组房水引流通道结构及其内色素颗粒的分布。透射电镜观察前房和小梁网内色素颗粒的形态,用Image软件随机测量100个色素颗粒的直径,并比较不同眼压组小梁网内色素颗粒直径的差异。主要指标眼压,前房和小梁网内色素颗粒的直径。结果DBA/2J小鼠从20周龄起出现虹膜色素颗粒脱失、播散,虹膜基质萎缩伴透照缺损。12和20周龄小鼠均未出现高眼压,28和36周龄分别有36.4%和75%的小鼠眼压升高。不同周龄间眼压差异有统计学意义(χ^(2)=37.82,P<0.001)。与正常眼压组相比,高眼压组虹膜厚度变薄,前房内和虹膜前、后表面富含色素颗粒的细胞堆积,前房角变窄,小梁网内大量色素颗粒沉积。DBA/2J小鼠前房内色素颗粒的形状为圆形,平均直径(0.44±0.12μm);或椭圆形,平均长度(0.77±0.20μm)。58.6%的圆形色素颗粒直径和63.3%的椭圆形色素颗粒长度集中在0.40~0.80μm。正常眼压组小梁网内53.3%的圆形色素颗粒直径和100%的椭圆形色素颗粒长度大于0.40μm;高眼压组小梁网内100%的圆形色素颗粒直径和100%的椭圆形色素颗粒长度均大于0.40μm。高眼压组小梁网内圆形色素颗粒的直径(0.58±0.11)和椭圆形色素颗粒的长度(0.90±0.12)均大于正常眼压组(0.42±0.12μm、0.72±0.12μm),差异有统计学意义(t=-6.82,-4.657;P均<0.001)。结论DBA/2J小鼠房水引流通道中最大容许通过直径为0.40μm,大于此直径的色素颗粒沉积引流通道狭窄处并引起阻塞是其眼压升高的主要原因。

小鼠口咽部甲型链球菌的微生态研究

目的初步探讨甲型链球菌在抑制口咽部异常菌定植和维护上呼吸微生态平衡的能力。方法氨苄青霉素破坏DBA/Ⅱ型小鼠口咽部菌群后灌胃针滴加α-34链球菌菌液于小鼠口咽部,用革兰氏染色和细菌培养的方式观察小鼠口咽部菌群的变化。结果氨苄青霉素能够破坏小鼠的口咽部正常菌群构成,新移植甲型链球后,小鼠的口咽部菌群恢复正常。结论甲型链球菌能阻止病原菌在黏膜上皮细胞定植,维护口咽部正常菌群微生态平衡。