NLRP3炎症小体抑制剂MCC950通过抑制Th1/Th17和促进Tregs改善脓毒症小鼠器官损伤

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体抑制剂MCC950对脓毒症小鼠T细胞分化及器官损伤的影响。方法:将18只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组(sham组)、脓毒症模型组(CLP组)和MCC950治疗组(MCC950组),每组6只。其中CLP组和MCC950组通过盲肠结扎穿孔(CLP)的方法制备脓毒症模型。MCC950组腹腔注射溶于0.5 mL 0.9%氯化钠溶液的MCC950(50 mg/kg),sham组和CLP组腹腔注射等体积的0.9%氯化钠溶液。CLP术后24 h收集小鼠血清及器官标本。HE染色法观察脓毒症小鼠肺脏、肾脏组织病理损伤程度,并计算生存率;Western blot法检测脾脏NLRP3蛋白含量;ELISA法检测小鼠血清和肺组织的细胞因子水平(IL-1β、IL-18、IL-1α、IL-6、TNF-α);分离脾脏获得脾脏淋巴细胞,采用流式细胞术检测辅助性T细胞(Th)1、Th17、调节性T细胞(Tregs)比例。结果:与sham组相比,CLP组小鼠肺组织炎性细胞浸润、水肿和肺泡壁增厚,肾小管刷状缘和上皮细胞减少,肾小球萎缩,肾小管成弥漫性扩张,大量炎性细胞浸润,脾脏NLRP3的蛋白表达上调(P<0.05),血清IL-1β、IL-18、IL-1α、IL-6、TNF-α水平均升高(P<0.05),肺组织中IL-1α、IL-6、TNF-α水平均升高(P<0.05),脾脏CD4^(+)IFN-γ^(+)Th1、CD4^(+)IL-17^(+)Th17、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Tregs比例均升高(P<0.05),小鼠7 d生存率为30%(P<0.05)。与CLP组相比,MCC950组小鼠肺组织炎性细胞浸润减轻,水肿减退,肾小管扩张不明显,炎性细胞浸润亦有所减轻,脾脏NLRP3的蛋白表达下调(P<0.05),血清IL-1β、IL-18、IL-1α、IL-6、TNF-α水平均降低(P<0.05),肺组织中IL-1α、IL-6、TNF-α水平均降低(P<0.05),脾脏CD4^(+)IFN-γ^(+)Th1、CD4^(+)IL-17^(+)Th17比例减少,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Tregs比例明显增加(P<0.05),小鼠7 d生存率显著提升(P<0.05)。结论:MCC950阻断NLRP3可改善脓毒症小鼠的器官损伤,其作用可能依赖于抑制Th1/Th17反应和促进Tregs反应。

MCC950调控巨噬细胞极化改善放射性肺损伤

探讨NLRP3特异性抑制剂MCC950对放射性肺损伤的改善作用及其可能机制。将36只7周雌性C57BL/6J小鼠随机分成对照组、辐照组和辐照+MCC950组。辐照组和辐照+MCC950组小鼠接受单次20 Gy剂量全胸廓辐照,对照组小鼠接受0 Gy剂量辐照。辐照+MCC950组小鼠辐照后第二天给予MCC950药物干预,对照组及辐照组小鼠给予生理盐水。辐照后12周检测小鼠肺系数以及肺干湿比。苏木精-伊红染色法检测小鼠肺损伤程度。蛋白免疫印迹检测巨噬细胞极化标记物、NLRP3炎性小体和炎症因子等分子蛋白表达变化。结果显示:与对照组相比,辐照组小鼠肺系数、肺干湿比以及肺损伤指标均显著升高,巨噬细胞M1型极化态标记物CD86表达明显增加,M2型极化态标记物CD163表达明显减少,NLRP3炎性小体(NLRP3、ASC和Caspase-1)和炎症因子(Pro-IL-1β、IL-1β、IL-18和TNF-a)表达均显著增加;而与辐照组小鼠相比,辐照+MCC950组小鼠肺系数、肺干湿比和肺组织炎性损伤均明显降低,CD86表达减少,CD163表达明显增加,NLRP3、ASC、Caspase-1、Pro-IL-1β、IL-1β、IL-18和TNF-a表达均明显减少。结果提示,MCC950可能是通过调控巨噬细胞极化进而改善放射性肺损伤,其有望成为放射性肺损伤的防治干预药物。

MCC950下调NLRP3炎症小体对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气管重塑及嗜酸性粒细胞水平的影响

目的探究MCC950下调NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气管重塑及嗜酸性粒细胞水平的影响。方法将60只小鼠随机分为对照组、COPD组和MCC950组。采用脂多糖联合香烟烟雾的方法复制COPD大鼠模型。HE染色分析各组大鼠肺组织病理变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Westernblotting检测各组大鼠NLRP3相关蛋白表达;检测大鼠嗜酸性粒细胞及趋化因子水平。结果与对照组比较,COPD组大鼠肺组织中NLRP3、Cleaved caspase-1和ASC蛋白相对表达量升高(P<0.05);肺组织表现出严重病理损伤和炎症细胞大量聚集(P<0.05);血清MMP-2、MMP-9、TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),TIMP-1和TIMP-2水平降低(P<0.05);细支气管壁厚度、管壁面积和管壁面积/腔周长均增加(P<0.05);静脉血嗜酸性粒细胞水平增加(P<0.05)。预先注射MCC950后,以上指标均得到逆转(P<0.05)。结论MCC950下调NLRP3炎症小体后,能够影响COPD大鼠气管重塑,改善COPD大鼠的肺组织损伤,以及降低静脉血嗜酸性粒细胞的水平。

维生素D受体及OPG T950C基因多态性与2型糖尿病合并骨质疏松症患者的相关性

研究2型糖尿病(T2DM)合并骨质疏松症(OP)与维生素D受体(VDR)、护骨素(OPG)及T950C基因多态性之间的相关性。 方法 选取我院内分泌科因2型糖尿病住院的237例患者,根据其骨密度,将其分组为:2型糖尿病不伴骨质疏松组,2型糖尿病伴骨量减少组,2型糖尿病伴骨质疏松组,检测其维生素D受体、护骨素及T950C基因型,比较其与患者自身因素检测指标间的差异。结果 多因素 Logistic回归分析显示:2型糖尿病(T2DM)合并骨质疏松(OP)与患者的年龄相关,维生素D受体(VDR)、护骨素(OPG)及T950C基因不相关。结论 2型糖尿病合并骨质疏松症患者与VDR与OPG T950C联合基因型的遗传易感性无关。

MCC950抑制NLRP3炎性小体活性改善阿尔茨海默病模型小鼠血脑屏障功能研究

目的研究核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体抑制剂MCC950对侧脑室注射淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致的阿尔茨海默病(AD)模型小鼠血脑屏障(BBB)结构和功能的影响。方法将小鼠随机分为假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组(1.3 mg/kg)和MCC950组(10 mg/kg),除假手术组外,其余各组侧脑室注射Aβ25-35制作小鼠AD模型,造模后第2天,各给药组按相应剂量连续给药21 d,每日1次,假手术组给予等量0.9%氯化钠溶液;于第15天进行Y迷宫实验,第16~21天进行Morris水迷宫实验;行为学实验后进行伊文思蓝渗漏实验并取材;ELISA试剂盒及免疫荧光染色法检测小鼠脑组织中NLRP3水平,Western blot法检测小鼠脑组织海马及皮质中紧密连接蛋白-5(claudin-5)、闭合蛋白(occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬氨酸酶(caspase-1)、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、p53上调凋亡调节因子(PUMA)、抑癌因子p53、核转录因子κB(NF-κB)的表达情况。结果与假手术组相比,模型组小鼠自发交替反应率下降,水迷宫的游泳潜伏期较长,穿越平台次数及目标象限路程减少,脑内伊文思蓝渗透率显著增加,NLRP3表达增多,claudin-5、occludin、ZO-1表达明显减少;ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18、TNF-α、PUMA、p53、NF-κB表达明显增加。与模型组比较,给药组小鼠自发交替反应率升高,水迷宫潜伏期较短,穿越平台次数及目标象限路程增加,小鼠脑内伊文思蓝含量降低,NLRP3表达明显减少,claudin-5、occludin、ZO-1明显增加;ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18、TNF-α、PUMA、p53、NF-κB表达明显减少。结论MCC950可通过PUMA/NF-κB和PUMA/p53信号通路抑制NLRP3炎性小体活性来改善AD模型小鼠血脑屏障功能。

MCC950通过抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症小体改善高蛋白质饮食雏鹅生长性能、尿酸代谢和肾脏损伤

本试验通过评估MCC950对高蛋白质饮食雏鹅生长性能、尿酸代谢、血清炎症因子含量和肾脏损伤的影响,探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)信号通路在雏鹅痛风中的可能作用机制。试验选取1日龄扬州雏鹅120只,随机分为3个组,分别为对照组、高蛋白质组(HP组)和高蛋白质+MCC950组(HP+MCC950组),每组5个重复,每个重复8只。对照组饲喂粗蛋白质为16.5%的正常蛋白质饲粮,HP组和HP+MCC950组均饲喂粗蛋白质为24.0%的高蛋白质饲粮,且HP+MCC950组每3 d按10 mg/kg BW剂量腹腔注射1次MCC950,其他2组注射等量生理盐水。试验期15 d。结果表明:1)与对照组相比,HP组雏鹅15日龄时的平均体重显著降低(P<0.05);HP组血清尿酸(UA)、肌酐(Cr)、尿素氮(UN)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)含量均显著提高(P<0.05);HP组肾脏组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),肾脏组织中NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白相对表达量显著提高(P<0.05)。2)与HP组比较,HP+MCC950组雏鹅10和15日龄平均体重均显著提高(P<0.05);HP+MCC950组血清UA、Cr、UN、CRP、IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α和TGF-β1含量均显著降低(P<0.05);HP+MCC950组肾脏组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),肾脏组织中NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。3)HP组雏鹅肾小管扩张,发生空泡变性、坏死,而HP+MCC950组肾小管结构较为清晰;HP组雏鹅肾脏组织中尿酸盐沉积面积显著大于对照组(P<0.05),HP+MCC950组肾脏组织中尿酸盐沉积面积显著小于HP组(P<0.05);雏鹅肾脏组织尿酸盐沉积面积与NLRP3蛋白相对表达量呈显著正相关(r=0.681,P<0.05)。综上所述,MCC950可促进高蛋白质饮食雏鹅生长,降低血清尿酸含量,可能与其抑制NLRP3/Caspase-1信号通路减轻炎症反应和肾脏损伤有关。

MCC950的作用靶点及其在中枢神经系统疾病治疗中作用机制研究进展

MCC950是一种特异性的小分子抑制剂,可以透过血脑屏障选择性地阻断核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的激活,减少下游IL-1β的成熟和释放。MCC950抑制NLRP3炎症小体激活的作用靶点主要是NIMA相关蛋白7、凋亡相关斑点样蛋白、氯离子和核苷酸结合寡聚化结构域中的Walker B基序等。MCC950通过抑制NLRP3/IL-1β通路的激活来减轻炎症反应,在治疗多种中枢神经系统疾病方面显示出良好的疗效,例如MCC950可通过抑制NLRP3/IL-1β通路从而保护多巴胺能神经元,改善帕金森病;MCC950通过阻断NLRP3炎症小体激活,逆转Aβ诱导的体内炎症反应的发生来改善阿尔兹海默病;MCC950还可阻断创伤性脑损伤病灶处的神经凋亡,产生神经保护作用;MCC950治疗可以削弱内质网应激,从而对癫痫产生治疗作用。

MCC950对线粒体损伤相关分子模式诱导大鼠肺损伤的保护作用

目的严重创伤诱发的急性呼吸窘迫综合征目前尚无特异性治疗策略,探讨MCC950对线粒体损伤相关分子模式(MTDs)诱导肺损伤的影响,初步分析其作用机制。方法将40只SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、MTDs组、MCC950组和MTDs+MCC950组4组,MTDs+MCC950组采用腹腔注射MCC950(20 mg/kg)预处理SD大鼠1 h后,经尾静脉注射MTDs(5%体积肝[5])到大鼠体内;对照组注射等渗盐水;MTDs组腹腔注射等渗盐水,尾静脉注射MTDs;MCC950组腹腔注射MCC950,尾静脉注射等渗盐水,12 h后麻醉,腹主动脉放血处死。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-18含量,BCA法检测BALF中蛋白含量,称重以计算肺湿重/体重比值(LWW/BW),采用HE染色后光镜观察组织病理学改变,Smith肺损伤评分评价肺损伤情况,Western blot检测Pro-Caspase-1和Caspase-1蛋白表达。结果与对照组相比,MTDs组大鼠BALF中TNF-α、IL-1β和IL-18含量显著增多(P<0.05),MCC950组差异无统计学意义(P>0.05),MTDs+MCC950组中TNF-α含量显著增多(P<0.05),而IL-1β和IL-18差异无统计学意义(P>0.05);与MTDs组相比,MCC950+MTDs组BALF中IL-1β和IL-18含量显著减少(P<0.05)。与对照组相比,MTDs组LWW/BW比值明显增大[(4.19±0.36)mg/g vs(6.32±0.54)mg/g,P<0.05],BALF中蛋白含量明显增多[(0.12±0.03)g/L vs(0.79±0.07)g/L,P<0.05];与MTDs组相比,MCC950组、MCC950+MTDs组LWW/BW比值[(4.35±0.29)mg/g、(4.47±0.46)mg/g]明显降低(P<0.05),BALF中蛋白含量[(0.12±0.06)g/L、(0.15±0.06)g/L]明显减少(P<0.05)。Smith肺损伤评分统计分析表明,与对照组相比,MTDs组肺损伤评分明显增高(1.00±0.00 vs 8.33±0.58,P<0.05);与MTDs组相比,MCC950+MTDs组肺损伤评分明显降低(8.33±0.58 vs 3.67±0.58,P<0.05)。与对照组相比,MTDs组Pro-Caspase-1和Caspase-1蛋白水平明显增高(P<0.05);与MTDs组相比,MCC950+MTDs组Caspase-1蛋白条带灰度降低,蛋白表达水平降低(P<0.05),Pro-caspase 1无明显变化(P>0.05)。结论 MCC950可能通过抑制NLRP3炎性体活化对MTDs诱导的肺损伤发挥保护作用。

TH-950HN焊条堆焊组织与性能研究

以Q345B为母材,研究了TH-950HN焊条堆焊组织与力学性能。结果表明,堆焊层强化相主要为初晶碳化物(Cr,Fe)7C3及共晶相(Cr,Fe)7C3,在焊层表面的碳化物呈块状,尺寸在20μm左右;随着焊接深度的增加,碳化物形貌转变为骨骼状和长条形;这些增强相分布在合金基体中,可以起到弥散强化的效果,从而使堆焊层具有较高的硬度;堆焊层硬度沿宽度方向与深度方向分布均匀,在深度为0～10 mm范围内,其硬度为56～65 HRC。

VITROS950全自动干化学分析仪生物参考区间适用性验证探讨

目的对950型全自动生化分析仪检验项目的现用生物参考区间进行验证，确保其适用于该实验室，为临床提供准确的诊断依据。方法按照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）C28一A2推荐方法，采集符合要求健康参考个体标本20名．按实验室标准化操作程序（SOP）文件要求规范用VITROS950全自动干化学分析仪检测标本．分析实验结果。结果共计测定19项。其中总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）和肌酐（CREA）5％以上在现用的生物参考区问以外，TP、ALB超出上限，CREA超出下限；尿素（UREA）、氯（CI）、总胆红素（TBIL）和乳酸脱氢酶（LDH）95％结果在现用的生物参考区间内；其余项目100％在现用的生物参考区间内。结论该次验证的项目除TP、ALB和CREA外，现用的生物参考区间适用于该实验室，可以继续使用；实验的验证具有科学的说服力，容易发现生物参考区间的偏离，建立完善的验证制度、程序，值得推广应用。

Mcc950在新生儿坏死性小肠结肠炎的作用及其机制研究

目的研究NLRP3炎症小体及其特异性抑制剂Mcc950对新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)的作用及机制。方法将120只1日龄新生SD乳鼠随机分为对照组、NEC组和Mcc950治疗组,每组40只。通过人工喂养、缺氧复氧、冷刺激加脂多糖(LPS)灌胃建立NEC动物模型。采用HE染色观察各组肠组织病理表现,并对肠组织行损伤评分;采用蛋白质印迹技术和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测炎症因子IL-1β和IL-18、炎症小体NLRP3、细胞焦亡主要标志分子Caspase-1和GSDMD的蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组相比,NEC组大鼠体重减轻,肠上皮细胞排列紊乱,部分绒毛坏死、脱落,黏膜层、黏膜下层及固有层可见水肿分离,相应的肠组织损伤评分升高,IL-1β、IL-18、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白及mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与NEC组相比,Mcc950治疗组大鼠体重下降趋势变缓,肠组织病理损伤减轻,肠组织损伤评分降低,IL-1β、IL-18、NLRP3、Caspase-1和GSDMD表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立NEC模型,Mcc950可抑制NLRP3介导的炎症及细胞焦亡,从而在NEC中发挥保护作用。

护骨素基因启动子区T950C多态性与2型糖尿病合并骨质疏松症的关系

目的探讨护骨素(OPG)基因启动子区T950C的多态性与2型糖尿病(T2DM)合并骨质疏松症的关系,了解T2DM合并骨质疏松症与遗传相关的易感基因。方法(1)使用聚合酶链反应技术,检测T2DM不合并骨质疏松组(A组),T2DM合并骨量减少组(B组),T2DM合并骨质疏松组(C组),OPG基因T950C的基因型,分别分析3组的OPG基因T950C多态性;(2)比较3组人群性别、体重指数、年龄、血压、体重、糖化血红蛋白、身高、血脂、空腹血糖、睾酮、雌激素、维生素D等临床指标;(3)比较OPG基因T950C的基因型间不同部位的骨密度差异;(4)通过Logistic回归分析了解T2DM合并骨质疏松患者的独立危险因素。结果(1)TC型是T2DM和T2DM合并骨质疏松症人群OPG基因T950C的主要基因型;(2)3组OPG基因T950C基因型的频率及等位基因频率的差异均无统计学意义(P>0.05);(3)3组患者体重、年龄、身高、BMI、比较,差异有统计学意义(P<0.05),且各组间相互比较,差异有统计学意义(P<0.05);(4)OPG基因T950C的3种基因型比较,各部位的骨密度均无差异(P>0.05);(5)回归分析显示:年龄、吸烟可进入回归方程,而OPGOPG基因T950C的基因型未进入回归方程。结论(1)TC型是T2DM和T2DM合并骨质疏松症患者OPG基因T950C的主要基因型;(2)OPG基因T950C的基因型可能不是T2DM及T2DM合并骨质疏松症的易感基因;(3)吸烟和年龄是T2DM合并骨质疏松患者的独立危险因素。

微波消解–ICP-AES法测定Pd950首饰中多种有害元素

提出了试样经微波消解后用电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP-AES）测定Pd950首饰中汞、铅、镉、铬、砷的分析方法。在120℃温度下,以王水为消解试剂,试样在密闭容器中消解25 min可以完全溶解。汞、铅、镉、铬、砷元素的检出限为0.006~0.15 mg/kg,回收率为92%~116%,RSD为0.07%~1.4%。总分析流程均大大缩短,微波消解前处理方法具有简便、快捷、回收率高、精密度高等优点,能够满足测定Pd950首饰中汞、铅、镉、铬、砷的需要。

SF950型水基胶复合机的设计与研究

采用先进水基胶复合技术 ,在关键技术上 ,对水基胶复合机的涂布方式、传动系统、压合机构进行分析研究和设计 ,开发了 SF950型水基胶复合机 ,达到结构简单、环保。

应用糖皮质激素患者护骨素基因T950C多态性与骨量的关系

目的:分析应用糖皮质激素患者护骨素基因启动子T950C单核苷酸多态性与骨密度及骨生化指标的相关性。方法:选择2004-03/2005-06在哈尔滨医科大学附属第二医院肾内科就诊的应用糖皮质激素六七个月的慢性肾小球肾炎患者138例,另外选择126例门诊健康体检者作为正常对照组,调查和取样均征得两组受试者本人同意。应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性方法测定两组观察对象护骨素基因启动子T950C的基因型;应用双能X射线骨密度仪测定两组观察对象股骨、腰椎等部位的骨密度;同时检测骨代谢生化指标,测定血清骨钙素应用放射免疫法,测定甲状旁腺激素应用化学发光法。结果:进入结果分析应用激素组138例,正常对照组126例。①两组观察对象护骨素基因型的分布:启动子T950C发现TT、TC、CC3种基因型,各基因型分布频率正常对照组为TT26.98%,TC48.41%,CC24.61%,应用激素组为TT27.54%,TC48.55%,CC23.91%,两组间比较差异无显著性意义(P>0.05)。②T950C不同基因型观察对象骨密度、生化指标的比较:正常对照组3种基因型之间骨密度比较,差异无显著性意义(P>0.05);应用激素组各部位骨密度呈现CC>TC>TT的趋势,但差异无显著性意义(P>0.05)。两组各基因型之间骨代谢生化指标的差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:应用糖皮质激素患者的护骨素基因T950C基因型与正常人群比较无明显差异,提示护骨素基因T950C基因型与肾小球肾炎的发病无关;护骨素基因T950C多态性与各部位骨密度无明显相关,推测可能与应用糖皮质激素后的骨量丢失无关。

MCC950阻断小胶质细胞焦亡对大鼠脑出血预后的影响

目的 研究核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体抑制剂MCC950通过抑制小胶质细胞焦亡对大鼠脑出血预后的影响。方法 54只成年雄性SD(Sprague Dawley)大鼠,按简单随机法将其分为对照组、脑出血组和MCC950治疗组,每组18只。对照组仅做钻孔处理;脑出血组经胶原酶诱导脑出血;MCC950治疗组在使用胶原酶诱导脑出血之前,先通过侧脑室注射MCC950。Longa五级评分1~3分为造模成功,分别于造模成功后24 h和72 h对3组大鼠相关指标进行检测及组间比较,即利用蛋白免疫印迹(WB)分析和免疫荧光测定血肿周围组织中小胶质细胞NLRP3炎性小体、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)和成熟白细胞介素1β(IL-1β)的蛋白表达量,同时行苏木素-伊红(HE)染色观察炎性细胞浸润程度。用干湿重法测定脑水肿,用改良神经功能损伤严重程度评分(mNSS)评估大鼠脑出血恢复程度。取27只新生SD乳鼠(0~24 h),提取原代小胶质细胞,随机分为对照组、凝血酶激活组、MCC950治疗组,每组细胞数为5×10~5个/ml,共2 ml。对照组为不进行任何干预措施;凝血酶激活组应用20 U凝血酶进行激活;MCC950治疗组使用0.2 nmol MCC950干预1 h后加入20 U凝血酶激活。于干预后24 h分别对3组原代小胶质细胞相关指标进行检测及组间比较。透射电镜下观察小胶质细胞形态,检测细胞焦亡的发生,并测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率。应用WB法分别测定3组小胶质细胞中NLRP3、活化Caspase-1、成熟IL-1β和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的蛋白表达量。结果 (1)体外实验结果显示,对照组、凝血酶激活组、MCC950治疗组小胶质细胞LDH释放率分别为(4.0±0.5)%、(21.0±0.7)%、(14.0±0.8)%,3组间差异有统计学意义(F=1 178.172,P<0.01);凝血酶激活组LDH释放率高于对照组,MCC950治疗组LDH释放率低于凝血酶激活组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。(2)体外实验结果显示,对照组、凝血酶激活组、MCC950治疗组NLRP3相对水平分别为43.8±1.1、79.1±3.1、77.9±3.0,Caspase-1相对水平分别为32.0±2.1、86.4±2.6、70.1±6.8,IL-1β相对水平分别为56.2±1.8、87.8±5.7、65.4±13.5,ASC相对水平分别为40.8±1.6、124.7±3.3、59.7±1.6,3组间小胶质细胞不同蛋白相对表达水平的差异均有统计学意义(F值分别为187.286、121.755、10.886、1 086.027,均P<0.01)。与对照组比较,凝血酶激活组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、ASC蛋白表达明显增加(均P<0.01);与凝血酶激活组比较,MCC950治疗组中Caspase-1、IL-1β、ASC蛋白表达明显降低(P<0.01或P<0.05)。在NLRP3表达水平方面,MCC950治疗组与凝血酶激活组的差异无统计学意义(P>0.05)。(3)体内实验中,对照组、脑出血组和MCC950治疗组大鼠NLRP3相对表达水平分别为78.2±2.5、126.2±2.4、66.4±3.9,Caspase-1相对表达水平分别为33.3±1.2、82.3±1.9、43.6±1.0,IL-1β相对表达水平分别为14.4±1.7、114.7±2.6、48.0±3.1,3组大鼠NLRP3炎性小体信号通路中不同蛋白相对水平的组间差异均有统计学意义(F值分别为732.738、1 000.585、1 204.343,均P<0.01)。与对照组相比,脑出血组血肿周围NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达显著增加(均P<0.01);与脑出血组相比,MCC950治疗组血肿周围NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达显著降低(均P<0.01)。(4)体内实验中,对照组、脑出血组和MCC950治疗组大鼠24 h mNSS分别为(2.3±0.8)、(12.1±0.8)、(9.7±0.7)分,72 h mNSS评分分别为(2.5±0.5)、(9.3±0.8)、(7.2±0.8)分,24 h水肿程度分别为(79.46±0.20)%、(81.58±1.67)%、(81.13±0.16)%,3组大鼠24、72 h mNSS及24 h脑组织水肿程度的组间差异均有统计学意义(F值分别为849.933、219.729、7.886,均P<0.01)。与对照组相比,脑出血组24、72 h mNSS及24 h脑组织水肿程度均增加(均P<0.01);与脑出血组相比,MCC950治疗组24、72 h mNSS均降低(均P<0.01),24 h脑组织水肿程度的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MCC950可通过抑制NLRP3炎性小体从而抑制小胶质细胞焦亡,并改善大鼠脑出血的预后。

NLRP3/SDF-1信号通路在布地奈德治疗哮喘过程的作用

目的探讨NLRP3/SDF-1信号通路在哮喘气道炎症过程的作用机制。方法36只4周龄雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和布地奈德(BUD)组,每组12只。采用腹腔注射卵清蛋白(OVA)构建小鼠哮喘模型,H-E染色观察肺组织病变,计数肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞的数量,Western-blot检测肺组织NLRP3、SDF-1和CXCR4蛋白的表达水平;采用慢病毒构建BEAS-2B/sh NLRP3细胞系,CCK-8检测细胞增殖活力,使用不同浓度(0、200、400、800 U/mL)的屋尘螨(HDM)干预细胞,模拟体外哮喘模型,比较单独使用NLRP3抑制剂(MCC950)和联合BUD治疗时,NLRP3、p-NF-κB和SDF-1蛋白的表达水平。结果(1)炎性细胞数:哮喘组较对照组增加(P<0.001),而BUD组较哮喘组降低(P<0.001)。(2)小鼠肺组织的NLRP3、SDF-1和CXCR4蛋白的表达水平:哮喘组3个指标均较对照组升高(P<0.001、P<0.01和P<0.001),BUD组则均较哮喘组降低(均为P<0.001)。(3)细胞的NLRP3、p-NF-κB和SDF-1蛋白的表达水平:400、800 U/mL HDM组的p-NF-κB表达水平均较对照组升高(P<0.05和P<0.01)。经HDM干预后,BEAS-2B/sh NLRP3组细胞的p-NF-κB水平降低(P<0.01、P<0.01和P<0.001),且SDF-1蛋白的变化趋势同p-NF-κB蛋白。与单独使用MCC950组比较,联合使用MCC950和BUD治疗组的3个指标的表达水平均降低(P<0.05、P<0.05和P<0.01)。结论BUD可通过限制NLRP3/SDF-1信号抑制哮喘的发生,联合使用BUD和NLRP3抑制剂可能成为哮喘的治疗策略。

VITROS950干式生化分析仪保养与常见故障排除

VITROS950干式生化分析仪是由美国强生Johnson&Johnson公司生产的一种具有较高准确性及重复性的全自动干式生化分析仪.使用VITROS950多年,我们不仅积累了一些使用经验,同时也注重了仪器的保养工作.

X射线荧光光谱法分析950铂合金中铂含量的不确定度评定

本文采用X射线荧光光谱法(XRF)对950铂合金中铂含量进行测试分析,主要分别从标准片、分析样品测试的均匀性、标准曲线的线性关系、测量结果的重现性、样品组成和标准片的不一致性等影响因素来评定测量结果的不确定度。最后得出合成不确定度和扩展不确定度。本方法的建立有利于在实际检测工作中对贵金属含量的判定进行合理的评定。