miR-496靶向调控DCUN1D1抑制宫颈癌发生发展机制研究

目的研究miR-496调控DCUN1D1对宫颈癌发生发展的影响,揭示miR-496在宫颈癌中的作用。方法免疫荧光和Western blot检测DCUN1D1在宫颈癌组织和癌旁正常组织中的表达水平;采用qRT-PCR检测DCUN1D1和miR-496在不同分期宫颈癌组织中的表达水平;筛选并验证miR-496的靶基因;q RT-PCR和Western blot检测miR-496 mimics对DCUN1D1表达的影响;CCK8和Transwell检测miR-496和DCUN1D1对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响;构建宫颈癌裸鼠移植瘤模型,检测miR-496对移植瘤生长的影响。结果 miR-496在癌组织中表达水平较癌旁组织低表达,其中宫颈癌的临床分期越高,DCUN1D1的mRNA表达水平越高,而miR-496的表达水平越低(P <0.05);miR-496能通过结合DCUN1D1的3′-UTR抑制DCUN1D1的表达,miR-496过表达细胞DCUN1D1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P <0.05);相比对照组,miR-496组能抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力,但相比miR-496组,miR-496+DCUN1D1组细胞的迁移和侵袭能力增强(P <0.05);在宫颈癌裸鼠移植瘤模型中,miR-496能下调DCUN1D1并抑制移植瘤生长(P <0.05)。结论miR-496和DCUN1D1异常表达与宫颈癌发病机制相关,miR-496通过调控DCUN1D1抑制宫颈癌发生发展。

粘膜系统鳞状细胞癌(SCC)相关蛋白(DCUN1D1)的表达、纯化和晶体生长

目的:SCCRO/RP42/DCUN1D1是粘膜系统鳞片状细胞癌(SCC)发生时人类基因组3q区域扩增的潜在靶标之一,其蛋白作用机制尚不清楚,本文拟通过表达并大量纯化SCC相关蛋白DCUN1D1用于蛋白结晶以求获得其三维结构。方法:使用人肝脑组织RNA反转录产物为模板扩增出DCUN1D1基因cDNA片断并将其克隆至原核表达载体PGEX-6P-1中,通过IPTG诱导获得大量可溶性表达,再经过GST亲和层析和Sephadex G-200层析柱纯化。结果:获得了纯度95%以上的蛋白,采用悬滴气相扩散法筛选蛋白晶体,获得显微镜下可见的微晶。结论:初步得出DCUN1D1晶体生长条件及范围,为解析DCUN1D1的三维结构并进一步认识其生物功能奠定了基础。