不育男性精子DCXR mRNA表达与顶体酶阳性反应率的关系

目的探讨原因不明男性不育患者精子DCXR mRNA的表达与顶体酶阳性反应率和受精力的关系。方法收集88例精液标本,其中正常生育组20例,不育男性68例。参照世界卫生组织(WHO)标准方法对标本进行精液常规分析,68例不育标本分为不育A组和不育B组。采用实时荧光定量PCR法,检测DCXR基因mRNA的相对表达量;以固定底物膜法观察顶体酶阳性反应率;以人精子穿透去透明带金黄地鼠卵异种体外受精试验(SPA)检测精子受精力。结果实时荧光定量PCR检测结果显示:正常生育组的精子DCXR基因mRNA的相对表达量明显高于不育A、B两组,经统计学分析均有显著性差异(P<0.05);不育A、B两组的精子顶体酶阳性反应率和受精率与正常生育组比较均有显著性下降(P<0.05)。相关性分析提示精子DCXR基因mRNA的相对表达量与顶体酶阳性反应率存在正相关性(r=0.440,P<0.01),精子DCXR基因mRNA的相对表达量与受精率存在正相关性(r=0.422,P<0.01)。结论原因不明男性不育患者精子DCXR mRNA的表达减少,精子DCXR mRNA的表达与顶体酶阳性反应率和受精率有一定相关性。

解脲脲原体感染对精子膜蛋白DCXR表达和精子凋亡的影响

目的探讨解脲脲原体(Uu)感染对男性不育患者精子膜蛋白DCXR表达和精子凋亡的影响。方法参照世界卫生组织(WHO)标准方法对145例精液标本进行精液常规分析。Western blot和免疫荧光分别检测人精子DCXR蛋白的表达和定位,采用TUNEL法检测精子凋亡。对Uu感染阳性者进行敏感抗生素治疗,分析治疗前、后的不育症患者精液各项指标的变化。结果 Uu阳性不育组精子DCXR/β-actin平均光密度和精子DCXR阳性率均低于与Uu阴性不育组(P <0.05),治疗后Uu阳性不育组的DCXR/β-actin平均光密度和精子DCXR阳性率均明显高于治疗前Uu阳性不育组,差异有统计学意义(P <0.05)。Uu阳性不育组的精子凋亡率高于与Uu阴性不育组,治疗后Uu阳性不育组的精子凋亡率明显低于治疗前Uu阳性不育组,差异有统计学意义(P <0.05)。相关性分析提示精子DCXR蛋白表达量和精子DCXR阳性率分别与精子凋亡率呈负相关。结论 Uu感染阳性导致精子DCXR蛋白表达减少、精子DCXR阳性率降低和精子凋亡率升高,Uu感染合理治疗后精子DCXR蛋白表达和精子凋亡有明显改善;精子DCXR蛋白的表达具有保护精子并减少精子凋亡率的作用。

解脲脲原体感染对精子膜蛋白DCXR表达和精子凋亡的影响

目的探讨解脲脲原体(Uu)感染对男性不育患者精子膜蛋白双羟基/L-木酮糖还原酶(DCXR)表达和精子凋亡的影响。方法参照世界卫生组织(WHO)标准方法对145例精液标本进行精液常规分析。Western blot和免疫荧光分别检测人精子DCXR蛋白的表达和定位,采用TUNEL法检测精子凋亡。对Uu感染阳性者进行敏感抗生素治疗,分析治疗前、后的不育症患者精液各项指标的变化。结果 Uu阳性不育组精子DCXR/β-actin平均光密度和精子DCXR阳性率均低于Uu阴性不育组(P<0.05),治疗后Uu阳性不育组的DCXR/β-actin平均光密度和精子DCXR阳性率均明显高于Uu阳性不育组治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。Uu阳性不育组的精子凋亡率高于Uu阴性不育组,治疗后Uu阳性不育组的精子凋亡率明显低于Uu阳性不育组治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析提示精子DCXR蛋白表达量和精子DCXR阳性率分别与精子凋亡率呈负相关性(r=-0.427、-0.562,P<0.01)。结论 Uu感染阳性导致精子DCXR蛋白表达减少、精子DCXR阳性率降低和精子凋亡率升高,Uu感染合理治疗后精子DCXR蛋白表达和精子凋亡有明显改善;精子DCXR蛋白的表达具有保护精子并减少精子凋亡率的作用。

抗二羰基/L-木酮糖还原酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人二羰基/L-木酮糖还原酶(Dicarbon-yl/L-xylulosereductase,DCXR)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Westernblot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAPXR表达文库筛选鉴定抗原。结果获得1株可稳定分泌抗人DCXRmAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),该mAb可用于ELISA检测、Westernblot、免疫组化和免疫沉淀实验。结论成功制备了抗人DCXR的mAb,为DCXR的研究提供了有力的工具。

二羰基/L-木酮糖还原酶单克隆抗体的鉴定与应用

目的:抗人二羰基/L-木酮糖还原酶(dicarbonyl/L-xylulose reductase,DCXR)的单克隆抗体(mAb)的初步鉴定与应用。方法:通过免疫荧光染色法对DCXR mAb进行亚细胞定位,通过免疫沉淀法对DCXR mAb进行初步应用研究。结果:DCXR mAb定位于肝脏的线粒体,通过免疫沉淀法该mAb可以从线粒体总蛋白中去除相应的蛋白DCXR。结论:成功制备了抗人DCXR的mAb,为DCXR的研究提供了有力的工具。