猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA刺激下NLRP3与DDX19A共定位的研究

NLRP3蛋白为核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体(NLRs)家族中含有脓素(Pyrin)结构域3的蛋白,它能够与调亡相关斑点样蛋白(ASC)以及半胱氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)组成炎性小体复合物,切割pro-IL-1β和pro-IL-18使其成为成熟的IL-1β和IL-18参与炎性反应。猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的RNA能够被DDX19A解旋酶识别并激活NLRP3炎性小体,诱导炎症反应。为研究PRRSV RNA激活NLRP3炎症小体后DDX19A与NLRP3的亚细胞定位情况,本研究以PRRSV Hu N4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)的总RNA制备的c DNA为模板,扩增了猪nlrp3基因。将其在原核细胞中表达,并采用表达的NLRP3免疫BALB/c小鼠制备了鼠源抗NLRP3多克隆抗体。此外,提取PRRSV的RNA,转染于PAMs中,36 h后分别采用抗DDX19A和抗NLRP3的多克隆抗体进行检测,激光共聚焦试验结果显示:未转染PRRSV RNA的细胞中,DDX19A和NLRP3在PAMs中呈弥散表达,无共定位现象出现,而在转染PRRSV RNA的PAMs中DDX19A和NLRP3在细胞质中呈点状分布并出现共定位现象。本研究为阐明PRRSV感染激活NLRP3炎性小体的分子机制奠定了基础。

胃癌中RNA解旋酶DDX19A的表达及临床意义

背景与目的:RNA解旋酶DDX19A(DEAD-box helicases 19A)是DDX蛋白超家族的成员之一,主要参与RNA的转运过程。该家族的许多成员参与肿瘤的发生及发展过程,然而关于DDX19A在胃癌中的作用,目前尚未见报道。结合生物信息学分析,探讨胃癌组织中DDX19A的表达情况及临床意义。方法:采用UALCAN数据库,转录水平分析胃癌及癌旁胃组织中DDX19A的表达差异,进一步分析其在胃癌中的表达及与临床分期的关系;采用Kaplan-Meier Plotter数据库分析DDX19A表达水平与胃癌患者总生存期(overall survival,OS)及无病生存期(disease-free survival,DFS)的相关性。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测16对冻存的新鲜胃癌组织及配对癌旁胃黏膜中DDX19A蛋白的表达。收集2011—2015年承德医学院附属医院病理科存档的胃癌石蜡包埋标本109例、癌旁胃黏膜标本30例,所有患者临床病理学资料完整。免疫组织化学S-P四步法检测109例胃癌及30例癌旁胃黏膜中DDX19A蛋白的表达,分析其高表达与胃癌临床病理学特征及预后的关系。结果:UALCAN及Kaplan-Meier Plotter数据库检索结果显示,DDX19A mRNA在胃癌组织中的表达明显高于癌旁胃组织(P<0.01),其高表达与胃癌临床分期及患者不良预后正相关(P<0.05)。Western blot结果显示,胃癌组织中DDX19A蛋白显著高表达(P<0.01)。免疫组织化学结果显示,胃癌组织中的DDX19A阳性表达率为68.8%(75/109),显著高于其在癌旁胃黏膜中的表达(33.3%,10/30),差异有统计学意义(P<0.01)。DDX19A高表达与胃癌分化程度、浸润深度、TNM分期密切相关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移无关(P>0.05)。69例随访资料完整的病例中,DDX19A高表达患者的OS明显短于低表达患者(P<0.05)。结论:DDX19A在胃癌组织中明显高表达,并且其高表达与胃癌临床分期、侵袭性及患者不良预后相关。DDX19A有望成为与胃癌预后相关的潜在生物标志物及治疗的新靶点。