DDX4(VASA)在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的 :研究DDX4(VASA)在卵巢癌中与CD133基因和蛋白水平的差异性表达,从而探讨其可能的临床应用价值。方法:利用卵巢癌细胞株SKOV3,从基因和蛋白水平检测DDX4(VASA)和CD133表达的差异;同时以体内卵巢肿瘤组织为研究对象,利用免疫组化的方法检测DDX4(VASA)在其中的表达情况。结果:(1)在卵巢癌细胞SKOV3中,DDX4(VASA)蛋白和m RNA的表达水平明显高于CD133;(2)DDX4(VASA)在卵巢癌组织中高表达,且在不同卵巢癌组织类型中分布位置不同。结论:DDX4(VASA)的高表达与卵巢癌的发生、发展密切相关,检测DDX4(VASA)在卵巢癌中的差异性表达,对了解卵巢癌的生物学行为和完善卵巢癌的早期诊断有一定的临床价值。

牦牛和犏牛睾丸组织DDX4基因mRNA表达水平与启动子区甲基化

【目的】了解牦牛和犏牛睾丸组织中DDX4基因mRNA表达水平和启动子区甲基化状态。【方法】采用real-time PCR技术检测牦牛和犏牛睾丸组织DDX4基因mRNA表达水平,采用克隆测序技术获得牦牛和犏牛DDX4基因启动子区序列,采用亚硫酸氢钠测序法检测牦牛和犏牛睾丸组织中DDX4基因启动子区甲基化状态。【结果】牦牛睾丸组织中DDX4基因mRNA表达水平极显著高于犏牛(P<0.01);牦牛和犏牛DDX4基因启动子区1 370 bp,含有核心启动子区(251 bp)和CpG岛(918 bp)。犏牛睾丸组织中DDX4基因启动子区甲基化水平(86.5%)极显著高于牦牛(67.0%)(P<0.01)。【结论】牦牛睾丸组织DDX4基因表达水平极显著高于犏牛,获得了牦牛和犏牛DDX4基因启动子区序列,且犏牛睾丸组织中DDX4基因启动子区甲基化水平极显著高于牦牛(P<0.01)。

DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗对晚期卵巢癌患者疗效及血清CD133、DDX4水平的影响

目的:探讨DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗治疗晚期卵巢癌的临床疗效以及对患者血清CD133、DDX4水平的影响。方法:将60例晚期卵巢癌患者随机分为观察组(30例)和对照组(30例),对照组仅接受常规化疗,观察组采用化疗联合DC-CIK细胞免疫治疗。比较两组患者的免疫功能、治疗效果、不良反应以及血清CD133、DDX4水平在治疗前后的变化情况。结果:观察组的客观缓解率(80.0%)高于对照组(50.0%);在治疗后和6个月随访时观察组CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+以及NK细胞的比值均高于对照组,CD4+CD25+、CD133、DDX4水平均低于对照组;且治疗前、治疗后、6个月随访后自身比较CD3+CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞比值均明显升高,CD133、DDX4水平均明显降低(均P<0.05);治疗后与6个月随访后免疫功能指标两组无差异(P>0.05),骨髓抑制和肝功能损害的发生率观察组低于对照组(P<0.05)。结论:应用DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗治疗晚期卵巢癌患者可提高临床治疗效果,增强患者免疫能力,更大幅度降低血清CD133、DDX4水平,减少不良反应的发生,值得临床探索应用。

大鼠肝癌模型中Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA和蛋白表达水平及其与肿瘤检测的关系

PIWI和piRNA的表达水平与肿瘤类型密切相关。Piwil2 mRNA在肝癌中的表达量比肿瘤周围的肝脏组织的表达量高。PIWI/piRNA通路基因Piwil4、Mael和Ddx4为候选癌基因,在多种癌组织中表达,而在肝癌组织中的研究尚无报道。为探讨Piwil4、Mael和Ddx4基因在肝癌组织中表达水平变化的影响,建立了大鼠肝癌模型,并提取血清用ELISA方法检测肿瘤标记物,采用实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹方法和免疫组织化学方法检测正常肝组织与模型组肝组织中Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA转录和蛋白表达水平。结果表明,大鼠肝癌动物模型血清中肿瘤标记物含量明显升高。Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA及蛋白在肝癌模型组织中高表达。研究表明,肝癌模型组织中Piwil4、Mael和Ddx4基因表达水平有望作为肝癌检测的一种分子标志物。

弱精子症患者精子蛋白的初步研究

目的从蛋白质水平探讨弱精子症患者精子蛋白的改变,以期寻找精子活动力低下的原因。方法运用蛋白凝胶电泳技术分离90例特发性弱精子症患者和30例正常供精者精子标本的总蛋白质,结合免疫印迹技术鉴定差异蛋白,并对试验数据进行统计学分析。结果患者组与对照组精子蛋白表达量存在差异,且患者组中精子活力低下不同严重程度者的蛋白含量也存在差异(P<0.05),对于差异显著条带的Western Blotting分析显示差异蛋白为DDX4。结论精子活力与蛋白质差异表达有关,主要差异蛋白DDX4可作为评估精子活力的生物标志物。

胚胎卵巢生殖细胞表达的Stra8在成年雌鼠骨髓干细胞离体分化中的表达

目的探索雌性骨髓干细胞(FBMSCs)离体培养条件下是否表达生殖干细胞减数分裂启动标志基因Stra8,判断其是否有向卵母细胞样细胞分化的能力。方法全骨髓贴壁法分离青年雌性SD大鼠FBMSCs,传代培养第3代FBMSCs。将第3代FBMSCs随机分为2组:(1)对照组应用DMEM+15%胎牛血清培养8d;(2)全反式维甲酸(ATRA)组在对照组基础上加入终浓度为10-5mol/L的ATRA。用RT-PCR方法检测2组Oct4、Vasa、Stra8 mRNA的表达。结果对照组和ATRA组连续培养8d都可检测到Oct4、Vasa、Stra8 mRNA在诱导分化的FBMSCs中的表达。结论FBMSCs中具有能向卵母细胞样细胞分化的多能干细胞;减数分裂启动标志基因Stra8不仅在雌性胚胎生殖干细胞表达,也在成年FBMSCs离体分化中表达。

性成熟期辽宁绒山羊与子午岭黑山羊睾丸发育比较

本研究旨在探究性成熟期辽宁绒山羊与子午岭黑山羊睾丸发育是否存在差异,并对两品种繁殖性能进行比较。选取性成熟期健康的辽宁绒山羊和子午岭黑山羊各5只,采集睾丸组织,通过大体解剖和苏木精-伊红(HE)染色石蜡切片,比较两品种山羊睾丸组织发育及形态学差异;ELISA检测雄激素浓度;实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)检测两品种山羊睾丸组织中死盒多肽4(DEAD box polypeptide 4,DDX 4)和类无精症缺失基因(deleted in azoospermia-like gene,DAZL)的表达情况。结果显示,辽宁绒山羊睾丸总重和睾丸长周径极显著高于子午岭黑山羊(P<0.01),而睾丸短周径、睾丸脏体比和睾丸胴体比均差异不显著(P>0.05);辽宁绒山羊生精上皮厚度显著高于子午岭黑山羊(P<0.05),而两者精细管面积、直径和单位面积内精细管数量均无显著差异(P>0.05);两品种山羊睾丸中雄激素分泌无显著差异(P>0.05);辽宁绒山羊DDX4 mRNA及蛋白表达量均显著高于子午岭黑山羊(P<0.01或P<0.05),DAZL mRNA表达量极显著高于子午岭黑山羊(P<0.01),而蛋白表达量差异不显著(P>0.05)。以上结果表明,性成熟期辽宁绒山羊性腺发育程度与子午岭黑山羊一致,但生精上皮较子午岭黑山羊厚,生殖标记基因表达量存在差异,推测可能会影响两品种的生精能力。

复合型寡聚糖对雄性小鼠生殖能力的影响及作用途径

目的观察复合型寡聚糖(CTO)和单一寡糖(COS)对雄性小鼠生殖能力的影响及作用途径。方法选择21日龄雌、雄性小鼠72只,随机分为NC组、COS组和CTO组(COS:FOS:YP=1:1:1),每组24只,雌、雄各半分别饲养。实验开始后7w龄时同组雌、雄随机1:1合笼5d。待仔鼠出生后3、6、12w龄时分别采集相关样品,观察了血清睾酮(T)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、精子活力、DDX4蛋白表达及睾丸组织结构等指标。结果 (1)实验6w龄时睾丸系数CTO和COS组比NC组均提高,但CTO组差异显著(P<0.05)。12w龄时睾丸系数CTO、COS组比NC组均增加,组间差异显著(P<0.05);(2)12w龄时附睾精子存活率CTO和COS组均比NC组显著提高(P<0.05)。a级精子百分率CTO、COS组均优于NC组(P<0.05);(3)12w龄时曲细精管生精细胞和成熟精子数量CTO和COS组均比NC组提高(P<0.05);(4)3、6、12w龄时血清T含量CTO组最高,其次COS组,NC组最低,组间差异显著(P<0.05);(5)睾丸SOD、GSH-Px含量,3、6、12 w龄CTO组最高,其次COS组和NC组,而MDA含量呈相反的趋势,各组间差异显著(P<0.05);(6)3、6、12w龄时睾丸中DDX4蛋白表达量CTO组比COS、NC组均有提高,其中3、12w龄CTO和NC组差异显著(P<0.05)。结论 CTO优于单一COS可以提高雄性小鼠的生殖能力,并可提高睾丸中DDX4蛋白的表达量。