DEAD⁃box解螺旋酶46基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的分析短发夹RNA(shRNA)介导DEAD⁃box解螺旋酶46(DDX46)基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量逆转录PCR(RT⁃qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)测定人正常乳腺上皮细胞系和乳腺癌细胞系中DDX46表达差异。以慢病毒介导的shRNA敲低乳腺癌SK⁃BR⁃3细胞中DDX46的表达,实验分为空白对照组、阴性对照组和sh⁃DDX46组。RT⁃qPCR检测各组细胞DDX46 mRNA的表达水平,蛋白质印迹法检测DDX46蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平,克隆形成和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞生长增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果DDX46 mRNA在各乳腺癌细胞系中的表达量均高于正常乳腺上皮细胞(P<0.05)。sh⁃DDX46组细胞DDX46 mRAN和蛋白表达水平均明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。sh⁃DDX46组的细胞生长增殖能力明显低于两对照组(P<0.05)。空白对照组、阴性对照组和sh⁃DDX46组SK⁃BR⁃3细胞凋亡率分别为(4.21±1.65)%、(5.36±1.23)%和(10.21±2.39)%,与空白对照组和阴性对照组相比,sh⁃DDX46组SK⁃BR⁃3细胞凋亡率明显增加(P=0.007;P=0.016)。沉默DDX46后凋亡通路蛋白B细胞淋巴瘤/白血病⁃2(Bcl⁃2)的表达量明显降低(P<0.05),Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶⁃3剪切体(cleaved Caspase⁃3)表达明显增高(P<0.05)。结论DDX46在乳腺癌细胞中高表达,沉默DDX46基因能够抑制乳腺癌细胞增殖并促进凋亡,凋亡信号通路可能是其作用机制之一。

结直肠癌DDX46蛋白表达及其与C-erbB-2、Ki-67、p53和nm23蛋白表达的相关性

目的研究结直肠癌中DDX46蛋白的表达及其与C-erbB-2、Ki-67、p53和nm23蛋白表达的相关性:方法收集2010年1月至2012年12月南京医科大学附属无锡第二医院149例结直肠癌手术后肿瘤组织及45例癌旁组织,应用免疫组织化学法检测DDX46蛋白表达水平及肿瘤组织中C-erbB-2、Ki-67、p53和nm23蛋白表达水平,分析DDX46蛋白表达水平与结直肠癌患者临床病理特征的相关性及结直肠癌组织样本中C-erbB-2、Ki-67、p53和nm23蛋白与DDX46蛋白表达的相关性:结果149例结直肠癌组织中.DDX46蛋白低表达50例(33.6%),高表达99例(66.4%);45例癌旁组织中,DDX46蛋白低表达37例(82.2%),高表达8例(17.8%),癌组织与癌旁组织DDX46蛋白高表达率差异有统计学意义(χ^2=33.09,P<0.01 )。DDX46蛋白表达水平与肿瘤分化程度、浸润程度、淋巴结转移、TNM分期有关(均P<0.05 ),分化程度越低、浸润程度越高、有淋巴结转移、TNM分期越晚的患者中.DDX46高表达者所占比例越高。DDX46蛋白表达水平与p53、Ki-67、nm23蛋白表达有关(均P<0.05 ),其中与p53 ,Ki-67蛋白表达呈正相关(r值分别为0.161 ,0.347 ),与nm23蛋白表达呈负相关(r=-0.561 )结论DDX46蛋白在结直肠癌组织中的高表达与肿瘤的恶性生物学行为和重要的癌基因相关。DDX46蛋白可作为结直肠癌患者潜在的诊断、靶向治疗的标志物。