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DDX6通过调控CKMT1A mRNA稳定性促进鼻咽癌细胞增殖和迁移的机制研究
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作者 熊茄妍 雷伟 +5 位作者 游波 张振新 谢海静 单颖 夏天 周勇 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期451-459,共9页
背景与目的:DDX是一类腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)依赖的RNA解旋酶,与mRNA调控、肿瘤增殖及侵袭等密切相关。本研究旨在探讨DDX家族成员DDX6对CKMT1A mRNA稳定性的影响以及DDX6-CKMT1A轴对人鼻咽癌细胞CNE2增殖和迁移能力... 背景与目的:DDX是一类腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)依赖的RNA解旋酶,与mRNA调控、肿瘤增殖及侵袭等密切相关。本研究旨在探讨DDX家族成员DDX6对CKMT1A mRNA稳定性的影响以及DDX6-CKMT1A轴对人鼻咽癌细胞CNE2增殖和迁移能力的影响及其分子机制。方法:检索癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中DDX6和CKMT1A在人头颈部鳞状细胞癌中的表达情况并进行相关性分析,利用蛋白质印迹法(Western blot)检测南通大学附属医院保存的人体鼻咽癌组织和正常鼻咽部组织中CKMT1A和DDX6的表达,本研究通过了南通大学附属医院伦理委员会的审查(编号:2022-L114)。利用transwell实验检测细胞迁移能力,采用EdU试剂盒检测细胞增殖能力,采用细胞集落形成实验检测克隆形成能力。转染慢病毒、质粒,构建南通大学附属医院保存的人源鼻咽癌细胞CNE2的shDDX6、sh-CKMT1A、sh-CKMT1A+sh-DDX6和oe-CKMT1A细胞模型,明确DDX6和CKMT1A表达水平对鼻咽癌细胞恶性生物学表型的影响。构建BALC/c裸小鼠皮下移植瘤模型,检测DDX6和CKMT1A在小鼠体内对鼻咽癌细胞成瘤性的影响。采用RNA稳定性实验检测敲除DDX6对CKMT1A mRNA的影响,进一步明确DDX6的分子机制。结果:人鼻咽癌组织中DDX6高表达,CKMT1A低表达,DDX6与CKMT1A表达呈负相关。DDX6通过破环CKMT1A mRNA稳定性,抑制CKMT1A蛋白质翻译。在CNE2细胞中,CKMT1A低表达可增强细胞迁移和增殖能力,高表达则抑制细胞迁移和增殖能力,而DDX6的敲除可逆转CKMT1A下调导致的恶性行为进展。在裸鼠皮下移植瘤模型中,低表达CKMT1A促进肿瘤细胞生长,低表达DDX6抑制肿瘤细胞生长,而同时敲除DDX6与CKMT1A能恢复单独敲低DDX6导致的抑制效果。结论:鼻咽癌细胞中DDX6通过破坏CKMT1A mRNA稳定性,负调控CKMT1A蛋白质翻译,增强鼻咽癌细胞增殖和迁移能力,从而促进鼻咽癌恶性进展。 展开更多
关键词 鼻咽癌 CKMT1A ddx6 细胞增殖 细胞迁移
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DDX6突变体的构建
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作者 周焱琳 唐翠兰 于秀芝 《浙江中西医结合杂志》 2019年第4期273-276,I0002,共5页
目的构建人源性DDX6多种突变体真核表达载体。方法以DDX6-WT为模板,利用同源重组技术构分别建出2个突变体,根据突变位置,分别命名为DDX6-EQ、DDX6-△C。结果经PCR、酶切、测序和Western Blot鉴定,构建出无解旋酶活性的DDX6-EQ和无ATP酶... 目的构建人源性DDX6多种突变体真核表达载体。方法以DDX6-WT为模板,利用同源重组技术构分别建出2个突变体,根据突变位置,分别命名为DDX6-EQ、DDX6-△C。结果经PCR、酶切、测序和Western Blot鉴定,构建出无解旋酶活性的DDX6-EQ和无ATP酶、解旋酶活性的DDX6-△C,蛋白分子量分别为54kD,34kD。结论成功构建2个突变体,为进一步研究DDX6在癌症进展过程中的调控作用奠定基础。 展开更多
关键词 ddx6 质粒构建 同源重组技术
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Marc-145细胞源DDX6基因的克隆及生物信息学分析 被引量:1
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作者 张升波 李昌红 +7 位作者 温贵兰 徐丽 田浪 杨佰启 陈彦希 文明 王开功 程振涛 《生物技术》 CAS 2018年第6期566-571,596,共7页
[目的]克隆并生物信息学分析Marc-145细胞源DDX6基因。[方法]根据GenBank预测的猴源DDX6基因序列(XM_008021118)设计合成特异性引物,通过RT-PCR从Marc-145细胞中扩增DDX6基因CDS区并进行克隆和生物信息学分析。[结果]Marc-145细胞源DDX... [目的]克隆并生物信息学分析Marc-145细胞源DDX6基因。[方法]根据GenBank预测的猴源DDX6基因序列(XM_008021118)设计合成特异性引物,通过RT-PCR从Marc-145细胞中扩增DDX6基因CDS区并进行克隆和生物信息学分析。[结果]Marc-145细胞源DDX6基因CDS全长1452bp,编码483个氨基酸。DDX6蛋白有4个基序,含有DEAD-like解旋酶超家族结构域和C端结构域。二级结构主要以α-螺旋(37.27%)和无规则卷曲(36.44%)为主。同源性及系统进化树分析结果表明Marc-145细胞源与人DDX6核苷酸同源性最高,亲缘关系最近。[结论]DDX6分子在同种属之间具有高度保守性,提示Marc-145细胞源DDX6可能与人源DDX6分子具有相似的功能和作用。 展开更多
关键词 ddx6基因 克隆 生物信息学分析
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青鳉gsdf调控ddx6介导的卵子发生的潜在机制
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作者 李茜 王光幸 +1 位作者 李新闻 关桂君 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期2099-2110,共12页
性腺体细胞衍生因子(gonadal soma-derived factor,gsdf)是青鳉(Oryzias latipes)雄性性别分化启动的开关因子之一,敲除gsdf将导致生殖细胞过度增殖以及XY雄鱼性逆转为雌鱼。本研究通过蛋白质组学对比分析青鳉野生型XX卵巢与gsdf缺失型X... 性腺体细胞衍生因子(gonadal soma-derived factor,gsdf)是青鳉(Oryzias latipes)雄性性别分化启动的开关因子之一,敲除gsdf将导致生殖细胞过度增殖以及XY雄鱼性逆转为雌鱼。本研究通过蛋白质组学对比分析青鳉野生型XX卵巢与gsdf缺失型XY卵巢,发现有60个差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs)上调,158个DEPs下调。GO(Gene ontology)功能富集到细胞间桥、脂质转运等细胞连接结构和能量代谢通路,KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)富集到RNA降解等关键信号通路,并发现DEAD-box解旋酶6(DEAD-box helicase 6,DDX6)蛋白表达量在gsdf敲除卵巢中显著升高,其mRNA的表达在转录组学分析中呈现相同增加趋势。各物种DDX6的分子结构具有高度同源性和进化保守性,RT-qPCR显示母源性ddx6 mRNA的表达随着青鳉胚胎的发育而减弱,在成体精巢与卵巢组织中均呈现高表达的特征,说明DDX6在配子发生和性腺分化发育过程中发挥重要作用。根据蛋白互作网络与组学分析结果,推测gsdf通过调控RNA降解(含有ddx6、lsm1等基因)途径抑制生殖细胞增殖,影响P-bodies(Cytoplasmic processing bodies)的组装,从而阻断了生殖细胞雌性分化。而卵黄原蛋白在gsdf缺失卵巢中的表达异常降低,这与敲除后卵母细胞大量停止在卵黄发生前的初级卵母细胞阶段的现象一致,说明gsdf可能通过DDX6介导参与初级卵泡发生和卵母细胞的发育过程。本实验研究结果为脊椎动物生殖细胞性别分化初期的分子机制研究提供了新的见解。 展开更多
关键词 蛋白质组学 gsdf ddx6 性别分化 青鳉
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LSM14B coordinates protein component expression in the P-body and controls oocyte maturation
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作者 Huiru Zhang Tao Zhang +6 位作者 Xiang Wan Chang Chen Shu Wang Dongdong Qin Lufan Li Luping Yu Xin Wu 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2024年第1期48-60,共13页
The generation of mature and healthy oocytes is the most critical event in the entire female reproductive process,and the mechanisms regulating this process remain to be studied.Here,we demonstrate that Smith-like(LSM... The generation of mature and healthy oocytes is the most critical event in the entire female reproductive process,and the mechanisms regulating this process remain to be studied.Here,we demonstrate that Smith-like(LSM)family member 14B(LSM14B)regulates oocyte maturation,and the loss of LSM14B in mouse ovaries leads to abnormal oocyte MII arrest and female infertility.Next,we find the aberrant transcriptional activation,indicated by abnormal non-surrounded nucleolus and surrounded nucleolus oocyte proportions,and abnormal chromosome assembly and segregation in Lsm14b-deficient mouse oocytes.The global transcriptome analysis suggests that many transcripts involved in cytoplasmic processing body(P-body)function are altered in Lsm14b-deficient mouse oocytes.Deletion of Lsm14b results in the expression and/or localization changes of P-body components(such as LSM14A,DCP1A,and 4E-T).Notably,DDX6,a key component of the P-body,is downregulated and accumulates in the nuclei in Lsm14b-deficient mouse oocytes.Taken together,our data suggest that LSM14B links mouse oocyte maturation to female fertility through the regulation of the P-body. 展开更多
关键词 LSM14B P-BODY ddx6 MIl arrest Chromatin configuration
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The RNA helicase DDX46 inhibits innate immunity by entrapping m^6 A-demethylated antiviral transcripts in the nucleus 被引量:11
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《Science Foundation in China》 CAS 2017年第4期1-,共1页
With the support by the National Natural Science Foundation of China,the research team directed by Prof.Cao Xuetao(曹雪涛)at the National Key Laboratory of Medical Molecular Biology&Department of Immunology,Chines... With the support by the National Natural Science Foundation of China,the research team directed by Prof.Cao Xuetao(曹雪涛)at the National Key Laboratory of Medical Molecular Biology&Department of Immunology,Chinese Academy of Medical Sciences,and the National Key Laboratory of Medical Immunology,Second Military Medical University,recently reported that RNA helicase DDX46is 展开更多
关键词 RNA The RNA helicase DDX46 inhibits innate immunity by entrapping m^6 A-demethylated antiviral transcripts in the nucleus
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