DDX60促进系统性红斑狼疮患者PBMCs中Ⅰ型干扰素的表达

目的探究DExD/H盒解旋酶60(DDX60)通过调控dsDNA-cGAS-IFN-Ⅰ通路对系统性红斑狼疮(SLE)进展的作用机制。方法通过分析RNA测序数据集发现DDX60 mRNA水平在SLE患者和健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中的差异。分析SLE患者PBMCs的DDX60 mRNA水平与疾病活动度的相关关系。通过α干扰素(IFN-α)刺激人源单核细胞系THP-1,明确DDX60是否为干扰素诱导基因(ISG)。通过沉默和敲除DDX60,再转染双链DNA(dsDNA)poly(dA:dT),利用RT-qPCR检测β1干扰素(IFNB1)的mRNA水平。结果RNA测序数据集和RT-qPCR结果表明DDX60在SLE患者PBMCs中高表达。相关性分析表明,SLE患者PBMCs的DDX60 mRNA水平与疾病活动度呈正相关关系。IFN-α可以诱导THP-1细胞表达DDX60,表明DDX60是ISG。沉默DDX60后,poly(dA:dT)诱导的IFNB1 mRNA水平显著降低。结论DDX60在SLE患者PBMCs中高表达,IFN-Ⅰ-DDX60-dsDNA-cGAS-IFN-Ⅰ正反馈通路参与SLE进展,可能成为SLE临床诊治的靶点,具有诊断及预后评估价值。

DDX60在结直肠癌中表达特点的研究

目的:探讨DDX60 (DEXD/H box helicase 60)在小鼠结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)形成过程中及在临床CRC样本中的表达及意义。方法:通过致癌剂氧化偶氮甲烷(Azoxymethane,AOM)和致炎剂葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)的协同作用,构建经典的炎症相关性CRC模型。在CRC形成后的第80天和形成早期的第14天收集结肠组织,通过qRT-PCR和Western-blot检测DDX60基因及蛋白的表达。同时,收集临床CRC组织及相应癌旁组织样本,通过qRT-PCR和Western-blot检测临床CRC样本中DDX60基因及蛋白的表达。结果:与对照组相比,DDX60在小鼠CRC模型及人CRC组织中的表达均呈显著性降低(P <0. 05)。结论:DDX60的低表达可能是CRC的促因之一,DDX60可能具有抑制CRC的发生发展和治疗CRC的潜能。

DDX60通过促进小胶质细胞的细胞免疫反应抑制日本脑炎病毒复制

目的探索DDX60对13本脑炎病毒（Japanese encephalitis vires，JEV）复制的影响，并初步确定其影响机制。方法以小鼠小胶质C8-B4细胞作为研究对象，对其进行JEV感染实验，以感染紫外灭活JEV细胞作为对照组，采用RT—qPCR（实时定量逆转录聚合酶链反应）测定感染后两组细胞中DDX60的表达，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测两组细胞中免疫因子的水平。利用Lipofectamine 2000将DDX60敲降或过表达质粒转染入C8-B4细胞，对照组细胞转染空载质粒，采用RT—qPCR和Western印迹检测病毒RNA和蛋白水平变化，采用ELISA检测细胞中免疫因子表达水平的变化。结果JEV组细胞中DDX60 mRNA表达量显著低于正常细胞组（P〈0．05，P〈0．01）；DDX60过表达组中病毒RNA水平和蛋白水平明显降低（P〈0．05，P〈0．01），而DDX60敲减组中其水平显著升高（P〈0．01，P〈0．001）；与JEV失活组相比，JEV组细胞中免疫因子的水平显著提高（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．001）；与正常对照组相比，DDX60敲减组中细胞免疫因子的表达水平明显下降（P〈0．05），而DDX60过表达组中免疫因子的表达水平明显上升（P〈0．05）。结论JEV感染可显著抑制C8-B4细胞中DDX60的表达，并促进细胞中免疫因子的释放；DDX60可增强感染病毒的C8-B4细胞中免疫因子的表达。综上，DDX60通过提高细胞的免疫反应进而抑制病毒的复制。

口腔鳞状细胞癌预后标志物的筛选及与免疫浸润的相关性分析

目的旨在通过整合多个数据集筛选口腔鳞状细胞癌(OSCC)中预后生物标志物,并研究其与免疫浸润的相关性。方法从基因表达综合数据库(GEO)平台中提取OSCC相关数据集GSE9844、GSE30784和GSE138206。鉴定差异表达重叠基因群(DEGs),对DEGs进行基因本体论(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,以评估DEGs参与的潜在分子过程和通路;使用STRING网站构建蛋白质与蛋白质相互作用网络图谱;使用Cytoscape软件中MCODE插件识别HUB基因;提取癌症基因组图谱网站中OSCC的表达谱数据,使用R语言工具检测HUB基因的表达情况。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,预测正常和肿瘤组织中关键核心基因的诊断效率;使用R软件包完成HUB在OSCC免疫微环境中的表达及与24种免疫细胞的相关性分析。结果3个数据集共鉴定出231个DEGs,包括173个上调的DEGs和58个下调的DEGs。GO功能注释分析表明,DEGs主要富集在细胞外基质形成、病毒防御反应和Ⅰ型干扰素信号通路等过程。KEGG通路富集分析结果表明,DEGs主要参与细胞外基质受体相互作用、变形虫感染、小细胞肺癌、局灶黏连、PI3K-Akt信号通路和人乳头状瘤病毒感染等重要信号通路。MCODE插件计算出最大的HUB集合,包括18个HUB基因,其中只有DDX60、XAF1、ISG15和IFIT1具备成为OSCC预后标志物的潜力。DDX60的高表达提示较差的预后,而XAF1、ISG15和IFIT1的高表达则提示患者预后较好。ROC分析结果显示,DDX60、XAF1、ISG15和IFIT1在预测肿瘤和非肿瘤方面具有一定的准确性,其中ISG15具有非常高的诊断准确性。ISG15与N分期和性别显著相关,而XAF1高表达组和低表达组在性别和吸烟方面存在显著差异,其中性别最为显著(P<0.001)。DDX60、XAF1、ISG15和IFIT1的表达与OSCC免疫微环境中大多数免疫细胞的表达正相关。结论本研究从公共GEO数据库中挖掘了OSCC潜在生物标志物组合,为阐明OSCC的诊断、治疗和预后提供理论依据。