超滤/DEAE离子交换层析法分离纯化IgY

应用平板式膜超滤技术与 DEAE 离子交换层析法对卵黄免疫球蛋白(IgY)进行分离纯化。首先,卵黄液经过缓冲液稀释分离;然后,用平板式膜组件对其超滤,并且分析了各种因素对其的影响,确定分子截留量为100 ku,操作压力差为0.12 MPa、进料温度为30℃,pH5.2,截留液抗体回收率达到91.89%,纯度为86%。经 DEAE 离子交换层析得到高纯度的 IgY。

膜分离耦合离子交换层析制备高纯度α-乳白蛋白

以生牛乳为原料,经膜分离及喷雾干燥制得鲜乳乳清蛋白粉,结合离子交换层析制备高纯度α-乳白蛋白。结果表明:在浓缩3倍、微滤1次、洗滤2次的膜分离条件下,50 nm陶瓷膜渗透液中α-乳白蛋白占真蛋白的21.04%,高于100 nm陶瓷膜渗透液(15.84%);对50 nm陶瓷膜渗透液进行喷雾干燥,并进行离子交换层析,层析时,在10倍柱体积内,Na Cl溶液浓度由0 mol/L增至0.5 mol/L,α-乳白蛋白与β-乳球蛋白能较好地分离,得到的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白纯度分别为98.18%和97.82%。本研究结果可为工业化制备高纯度α-乳白蛋白乳基料提供技术支持。

离子交换层析分离单抗电荷异质体的模型辅助过程优化

针对单抗电荷异质体分离,采用离子交换层析机理模型,预测洗脱分离行为,辅助工艺条件优化。设计了校准实验,拟合得到模型参数,模型计算与实验吻合良好,具有良好的预测能力。利用模型分析比较了不同洗脱方式,得到最优的两步阶跃洗脱方案,具有较高的收率,但发现该分离过程对盐浓度极为敏感。进一步针对第一步洗脱盐浓度进行过程稳健性约束的过程优化,发现盐浓度为108.5 mmol/L时过程稳健性增强。经实验验证,两步阶跃洗脱收率最高可达到85.3%,稳健约束优化后第一步等度洗脱盐浓度操作区间增大为98.9~117.5 mmol/L。结果表明,模型辅助的工艺优化可以进行复杂条件分析,促进难分离体系的分离过程优化,并能够针对过程稳健性给出合理解决方案。

离子交换树脂层析纯化菜籽卵磷脂的工艺研究

探讨以菜籽水化脱磷油脚为原料,通过离子交换树脂层析纯化菜籽磷脂酰胆碱(PC)的工艺过程,对工艺条件进行优化。首先通过丙酮、石油醚等溶剂萃取工艺,制备出菜籽粉末磷脂,然后利用离子交换树脂纯化PC。确定高效液相检测方法为PC的定量、定性分析方法,对柱层析工艺进行优化。结果表明,柱层析的最佳工艺条件为:单位树脂上样量0.08 g·mL^(-1);流速3.0 mL·min-1;上样浓度0.1 g·mL^(-1);高径比10∶1;前300 mL用95%乙醇洗脱,后150 mL用含异丙醇40%的异丙醇/水溶液洗脱。经HPLC-ELSD定量分析,产品纯度和回收率分别为72.3%和72.6%。

离子交换层析法对人血管性血友病因子中人纤维连接蛋白去除效果的研究

目的通过层析工艺处理人凝血因子Ⅷ层析洗涤制品,采用离子交换层析法对人血管性血友病因子(vWF)中人纤维连接蛋白(Fn)去除效果进行研究,以期在不改变活性收率条件下,选择1种能够有效降低Fn的方法。方法在多批次的工艺开发实验中,采用德国默克公司生产的Fractogel■EMD TMAE(M)强阴离子填料进行层析,考察了vWF瑞斯托霉素效价(vWF:RCof)、vWF回收率、蛋白质含量和Fn含量。结果在vWF小试纯化工艺开发过程中,经过离子交换层析工艺能有效降低样品中Fn含量,去除率达到87%以上,vWF效价回收率达到80%以上,其他质量指标未发生明显变化。结论使用离子交换层析纯化vWF,能够有效降低Fn含量,对于开发新产品工艺和提高血液制品生产企业产品质量具有积极意义。

利用离子交换层析法制备人凝血因子VIII的条件优化

通过对离子交换层析法中的试验条件的筛选和优化,获得高收率人凝血因子Ⅷ制品。方法 选用Fractogel®EMD TMAE(M)凝胶作为填料,取同一批次的人凝血因子Ⅷ上柱前液,研究不同浓度的洗涤液和洗脱液对人凝血因子Ⅷ效价和蛋白含量的影响。结果 从人凝血因子Ⅷ回收率和比活性考虑,洗涤液为2200mM氯化钠浓度和洗脱液为450mM氯化钠浓度时为层析洗涤洗脱最佳条件。结论 在本试验层析条件前提下,调节洗涤液为220mM氯化钠浓度和洗脱液为450mM氯化钠浓度,制备获得的人凝血因子Ⅷ制品纯度更高、稳定性和安全性更好。

离子交换介孔分子筛DEAE-SBA-15的制备及其用于分离纯化粉尘螨主要变应原Derf2

通过3-含氧缩水甘油基-丙基-三甲氧基硅烷(GPTS)将二乙胺基乙基(DEAE)嫁接在介孔分子筛SBA-15的表面,制得弱阴离子交换层析剂DEAE-SBA-15,使其既具有分子筛作用,又具有离子交换作用的特点.经DEAE-SBA-15层析后,从粉尘螨代谢培养基中获得单一的洗脱峰,SDS-PAGE显示一条谱带,其相对分子质量为14000,表明经分离纯化所得到的蛋白质是粉尘螨主要变应原Derf2.对螨性哮喘患者皮肤点刺试验表明,所得Derf2仍具有变应原活性,且仅通过一次柱色谱即得Derf2,表明DEAE-SBA-15是一种较好的离子交换层析剂.

大孔吸附树脂法及离子交换层析柱法精制纯化丹参多糖的研究

目的:对中药丹参中多糖成分进行提取、分离、精制和纯化研究。方法:丹参药材经过水提醇沉得到粗多糖(SMP)。采用大孔树脂法及离子交换层析柱法精制纯化粗多糖,综合比较D-101、AB-8、DB-301及MG-1等4种大孔吸附树脂对粗多糖的分离纯化效果,进一步以DEAE-52离子交换层析法对过AB-8柱制备得到的粗多糖进行分离精制。结果:粗多糖中总多糖含量为40.35%,蛋白质含量为8.96%,经4种大孔树脂初步纯化后发现AB-8、DB-301型的树脂效率高,纯化后多糖含量分别可达78.72%、80.45%。总多糖经DEAE-52离子交换树脂进一步分离得到SMP1、SMP2、SMP3三个组分。结论:AB-8、DB-301型大孔吸附树脂及DEAE-52型树脂可应用于丹参多糖的精制纯化。

枇杷叶多糖酶法提取工艺优化及其离子交换层析纯化

单因素试验和响应面试验得到酶法提取枇杷叶多糖最佳条件为提取时间2.95 h、提取温度41℃、酶用量15.6 mg/g,多糖提取率为8.03%。研究枇杷叶多糖在离子交换填料DEAE Sepharose CL-6B上的吸附行为,考察缓冲液p H值和离子强度对吸附等温线的影响。结果表明,在实验范围内,吸附平衡数据符合单分子层吸附的Langmuir方程,枇杷叶多糖在DEAE-Sepharose CL-6B上的吸附量随着缓冲液p H值的上升而增加,低离子强度的缓冲液有利于多糖的吸附。实验确定枇杷叶多糖离子交换柱层析进样条件为p H 8.0条件下,选取不含Na Cl的缓冲液,通过离子交换柱层析后枇杷叶多糖被分为3个组分,得率分别为32.66%、1.22%和3.12%。

透明质酸的离子交换层析纯化

采用强酸型阳离子树脂为交换剂的离子交换柱 ,和经组氨酸基团修饰的强碱型阴离子树脂为交换剂的离子交换层析柱串联 ,以氯化钠溶液为洗脱剂 ,对透明质酸粗品进行分离和纯化。得到的透明质酸精品的蛋白质含量低于 0 .0 75 % ,平均分子量大于 9.41× 10 5,纯化收率为 5 8%～ 6 1%。并对洗脱剂的流速、浓度、p H等条件进行比较 ,确定了最佳洗脱条件。

离子交换层析法纯化羊血SOD及其稳定性研究

以羊血为原料,通过热处理、透析、离子交换层析等方法获得SOD提取物,测定其酶活力和蛋白质含量,并从温度、pH稳定性和外源试剂耐受性等几个方面对SOD稳定性进行了研究.结果表明:经过离子交换层析后,SOD的比活力达到5289.1U·mg-1,回收率为60%,纯化倍数为25.3倍;在40～60℃保温30min,SOD酶活力基本不变;pH6～9范围内SOD的稳定性较好;SOD对2mmol·L-1H2O2和尿素较敏感,2mmol·L-1SDS对SOD没有明显的抑制作用.

凝胶层析和离子交换层析结合法纯化高盐发酵液中谷氨酰胺转胺酶

采用凝胶层析和离子交换层析相结合的方法分离纯化高盐培养基中的谷氨酰胺转胺酶,优化的凝胶层析的条件,上样量6 mL,流速为0.25 mL/min;离子交换层析的上样量50 mL,流速为3 mL/min。酶被纯化了4.22倍,比活力达17.33 U/mg蛋白,回收率为77.5%。液相色谱-串联质谱鉴定、蛋白质数据库比对结果表明,纯酶与AAN01353是同种蛋白质。

凝胶层析和离子交换层析结合法纯化重组降血压肽VLPVPR

为了提高VLPVPR的纯度,采用凝胶层析结合离子交换层析的方法对VLPVPR进行纯化。先用Sephadex G-10凝胶对VLPVPR溶液脱盐,再考察离子交换剂(SP Sepharose Fast Flow和Q Sepharose Fast Flow)对重组降血压肽VLPVPR的纯化效果,确立纯化VLPVPR的优化工艺。实验结果表明SP Sepharose Fast Flow不适于VLPVPR的纯化。采用Q Sepharose Fast Flow的纯化工艺为:上样量为柱床体积的10%,用10mmol/L pH9.0的CHES缓冲液洗脱,流速为1mL/min。VLPVPR回收率为93.8%,纯度达到47.2%。采用Q Sepharose Fast Flow纯化提高了VLPVPR的纯度。

离子交换层析纯化透明质酸

考察6种离子交换树脂的静态吸附解析效果,选出201*7阴离子交换树脂填柱,确定洗脱流速为0.6mL/min,40mL0.3mol/LNaCl和50mL0.5mol/LNaCl双浓度洗脱,实现透明质酸和杂蛋白的分离。制得透明质酸产品蛋白含量为0.057%,葡萄糖醛酸含量为43%,平均相对分子质量大于1.1×106,收率为54%,符合医用级透明质酸行业标准的要求。

蛋白质zeta电位与离子交换层析容量因子的相关性研究

针对蛋白质离子交换层析分离过程预测的困难,选择zeta电位作为中间参数,建立zeta电位与层析容量因子之间的关联。选择牛血清白蛋白(BSA)作为模型蛋白质,考察了pH、离子浓度、离子种类等对蛋白质zeta电位的影响,证实了zeta电位作为蛋白质表面电荷特性表征参数的可行性。以阴离子交换Sepharose FF DEAE为模型层析介质,测定了BSA在不同pH和盐浓度下的容量因子。综合考虑蛋白质和介质两方面因素,选择两者zeta电位乘积(-ζ_1×ζ_2)作为中间参数,对于不同pH和盐浓度的流动相,(-ζ_1×ζ_2)与容量因子的对数呈现良好的线性关系,实现了由简便的zeta电位分析预估宏观离子交换层析分离行为的目的,该关联关系的建立将有助于层析分离过程的优化设计。

离子交换层析微柱法及亲和电泳法与液相色谱分析法对糖化血红蛋白含量测定的比较

目的 探讨微柱法对HbA1C定量检测的意义。方法 采用微柱法、电泳法与HPLC法分别对同一标本进行HbA1C含量测定 ,比较 3种方法对HbA1C含量检测结果。结果 微柱法精确度和重复性好 (批内变异系数CV <1.5 % ,批间CV <5 % ) ,与参比方法HPLC经相关处理 ,其相关系数r =0 .945 ,两法具有高度的相关性 (P <0 .0 0 1)。结论 采用微柱法对HbA1C定量测定 ,无须贵重仪器设备 ,是一种简便快速的测定方法 ,能在大多数临床实验室广泛推广。

离子交换批量层析纯化重组类人胶原蛋白Ⅱ

对阳离子交换树脂CM52纯化类人胶原蛋白Ⅱ(Hum an-like Collagen B ioprote inⅡ,HCBⅡ)的合适条件进行了研究。通过实验,确定了批量层析的最佳操作条件,即在pH=4.0、NaC l 0.15 mol/L、进料质量浓度7 mg/mL、处理量17.26 mL/g进行吸附,吸附时间为60 m in,然后在pH=4.0、NaC l 0.30 mol/L下进行脱附。实验表明:采用批量层析吸附HCBⅡ后上柱洗脱,树脂CM52对HCBⅡ的吸附量可达到48.6 mg/g,回收率83.8%,最终纯化的HCBⅡ达电泳纯,相对分子质量为97k。

离子交换层析分离纯化重组人血清白蛋白

通过层析实验 ,比较了几种阴离子交换剂在不同温度、p H值、离子强度、进样流速、进样浓度下对人血清白蛋白的吸附与脱附性能 ,研究了它们对人血清白蛋白和卵清蛋白的分离能力 ,并考察了柱层析过程中吸附载体对重组人血清白蛋白和杂蛋白的分离选择性。实验结果表明 :牌号为DEAE Sepharose FF的载体不仅对重组人血清白蛋白具有良好的分离度 。

离子交换层析色谱法分离壳聚糖

用CMsepharoseCL 6B离子交换剂,使用不同的柱尺寸,采用离子强度线性梯度洗脱,对脱乙酰度80%,90%的壳聚糖样品进行分离。从脱乙酰度80%的壳聚糖样品分离得到3个组分实验结果表明,采用线性梯度洗脱时,直径相同的柱子,长的离子交换柱有利于壳聚糖的分离;对同一根离子交换柱,线性梯度洗脱体积的增加有利于壳聚糖的分离.分离不同脱乙酰度壳聚糖时,高脱乙酰度壳聚糖较低脱乙酰度壳聚糖在起始缓冲液洗脱时,洗脱出的壳聚糖含量较低,在高离子强度处洗脱出的壳聚糖含量较高.

聚乙二醇伴随式离子交换层析分离重组乙肝病毒表面抗原

针对由中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达的多聚亚基蛋白HBsAg在离子交换层析过程中容易因亚基解离而导致蛋白解聚和丧失生物活性的难题,实验中选择聚乙二醇(PEG)作为保护剂伴随式(Polyethylene Glycol-Accompanied)离子交换层析分离纯化HBsAg。实验表明,在流动相中加入1%PEG10000(WV)作为纯化伴侣,HBsAg的回收率由55%左右提高到80%以上,纯化倍数基本保持在12左右。对纯化产物进行SDS_PAGE分析表明,1%PEG10000的纯化伴侣伴随式离子交换层析能全部保留HBsAg的糖基化蛋白单体(27kD和30kD),高效液相色谱联用多角度激光散射(High Performance Size Exclusion Chromatography-Multiangle Laser Light Scattering,HPSEC-MALLS)进一步分析阐明了PEG能促使HBsAg颗粒尺寸分布更均一,结构更接近天然乙肝表面抗原。