DEAE-琼脂凝胶微球的制备及在R-PE和C-PC提取分离中的应用

为了降低天然大分子功能蛋白的分离纯化成本,以琼脂为原料自制弱阴离子交换层析介质DEAE-琼脂凝胶微球。将DEAE-琼脂凝胶微球应用于坛紫菜R-藻红蛋白（R-PE）和螺旋藻C-藻蓝蛋白（C-PC）的提取分离,最佳洗脱条件为：层析柱规格h=35.0 cm,φ=1.0 cm,V=27.5 m L;流速v=0.33 m L/min;洗脱缓冲液为0.01 mol/L磷酸盐溶液（含有0.05~0.5 mol/L Na Cl溶液）;0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（含0.1 mol/L Na Cl）洗脱出纯度为5.0的坛紫菜R-PE;0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（含0.2 mol/L Na Cl）洗脱出纯度为4.4的螺旋藻C-PC。自制层析介质成本低廉、耗能少、可大量制备、分离效果好,可用于坛紫菜R-PE、螺旋藻C-PC的产业化制备。

键合β-环糊精琼脂凝胶微球分离纯化大豆苷元及其色谱机制研究

目的 通过制备键合β-环糊精琼脂凝胶微球（AG-β-CD）作为分离介质,对大豆异黄酮粗品中大豆苷元进行高效分离纯化。方法 利用琼脂为原料,通过乳化、交联并键合功能基团β-环糊精（β-CD）制备AG-β-CD;将其作为一种分离介质,通过考察流动相、洗脱体积流量和微球负载量3个方面,确定AG-β-CD分离纯化大豆苷元的工艺并进行验证,质谱和核磁共振鉴定其结构;通过与其他2种黄酮类物质表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）和葛根素在C18反相柱色谱保留行为比较,结合auto DOCK4.0进行分子模拟,以及流动相乙腈体积分数变化对3种黄酮类物质在AG-β-CD固定相上的保留时间的变化曲线证明其色谱机制。结果 大豆异黄酮粗品中主要成分为大豆苷元（57.14%）,AG-β-CD的负载量为1.33 mg/m L（大豆异黄酮粗品总量/柱体积）,体积流量为2 BV/h时,通过20%乙醇洗脱2 BV、40%乙醇洗脱1.33 BV、70%乙醇洗脱6~7 BV,得到质量分数≥95%（平均质量分数96.98%）的大豆苷元,收率为97.86%。色谱机制实验表明AG-β-CD具有亲水和反相双重保留与分离作用。结论 AG-β-CD能够高效地分离纯化大豆苷元。

琼脂凝胶微球纯化葛根素的工艺研究

葛根素是葛根中黄酮类物质主要活性成分,该研究以葛根素粗品为原料,利用廉价易得的琼脂制备琼脂凝胶微球键合β-环糊精分离介质(AG-β-CD),结合AB-8大孔树脂进行前处理,以高回收率分离纯化得到高纯度的葛根素。以葛根素纯度和回收率以及相关杂质的色谱纯度为考察指标,对4种不同性质的大孔树脂ADS-7(强极性)、ADS-17(中极性)、ADS-21(极性)和AB-8(弱极性)进行分离效果筛选以及工艺优化,并对AG-β-CD纯化工艺优化和验证。结果表明,优选弱极性树脂AB-8作为葛根素粗品的前处理树脂效果最佳,通过8%乙醇洗脱15 BV后,葛根素纯度为87.68%的回收率达到89.66%;通过琼脂凝胶微球键合β-环糊精分离介质进行纯化,流动相15%乙醇,承载量(上样量与柱体积之比)1.33 g·L^(-1),上样浓度8 g·L^(-1),流速1 m L·min^(-1)时,葛根素纯度高于95%的回收率达到97%以上。