虫草多糖醇沉和DEAE-32纤维素柱层析特性研究

分级醇沉、分步醇沉和DEAE-32纤维素柱层析法研究了虫草多糖的分子量和多糖组分分布。分级醇沉实验表明,各醇沉浓度对应的得率都随醇浓度的升高而呈增加趋势,多糖含量变化起伏较大,醇浓度为30%和70%时所得多糖含量较高,虫草胞内和胞外多糖分子量分布都很不均匀;分步醇沉测定了各部分多糖所占的比例。DEAE-32纤维素柱层析实验结果表明:冬虫夏草的胞外多糖和胞内多糖具有分子量相似的中性多糖峰,并且它们的含量较为接近;二者的酸性多糖组分也具有相似的规律。

改良DEAE-纤维素法制备龙须菜琼胶糖研究

以龙须菜琼胶为原料,分别采用KMnO4-H2C2O4法漂白、乙醇处理和DEAE-纤维素纯化等工艺制备生化级琼胶糖,并采用正交试验设计对工艺参数进行优化,对琼胶糖的理化指标和电泳性能进行测定。结果表明:漂白实验的最佳工艺条件为KMnO4浓度0.10%、pH6.0、漂白时间5min、H2C2O4浓度0.30%,漂白后琼胶白度(HW值)为82.98、凝胶强度为1083g/cm2;乙醇处理的最佳工艺条件为料液比1:40(g/ml)、乙醇体积分数60%、处理时间6h,处理后琼胶透明度(透光率)为50.2%。制备的琼胶糖灰分含量为0.25%、凝胶强度为1127g/cm2、硫酸基含量为0.24%;结晶紫电泳、电内渗测定和基因组DNA电泳实验表明,改良DEAE-纤维素法制备的琼胶糖具有优异的电泳性能,适用于生物化学和分子生物学的凝胶电泳研究。

响应面法优化琼脂糖的DEAE-纤维素法提取工艺

利用DEAE-纤维素法对琼脂糖进行纯化处理,并应用响应面法进行工艺优化。结果表明:DEAE-纤维素的添加量、提取温度、提取时间为影响琼脂糖中凝胶强度及硫酸根含量的主要因素。经响应面法优化得到最优工艺参数:DEAE-纤维素添加量55g,提取温度80℃,提取时间2.5h。在最佳提取工艺的条件下制得的琼脂糖,其凝胶强度达1210g/cm2,硫酸根含量为0.17%;红外光谱分析结果表明自制琼脂糖与对照琼脂糖结构相似。基因组DNA电泳表明其具有良好的电泳性能。

双峰驼精清诱导排卵活性成分的DEAE-纤维素柱层析分离及其生物活性

选用 DEAE-纤维素离子交换柱对双峰驼精清进行分离 ,各层析组分用于大鼠垂体组织体外培养 ,并给母驼肌注有活性的组分 ,以 RIA法测定垂体组织培养液和母驼血浆中 LH及 FSH的浓度。结果表明 ,驼精清经 DEAE-纤维素柱分离后可得到 5个蛋白组分 ( L1～ L5) ,其中 L3在大鼠垂体培养时引起 LH的释放明显增加 ( P<0 .0 5) ,FSH则无明显变化。给卵巢上无大卵泡发育的母驼肌注有活性的组分 L3 ,可引起血浆中LH明显升高 ,FSH也无变化。由此表明 ,L3在体内外试验中均具有引起 LH释放的生物活性 ,它可能是诱导排卵的活性因子或其成分之一。

DEAE-纤维素分离提纯海带硫酸多糖的研究

采用微波提取法对两种海带样品多糖成分进行提取,通过DEAE-纤维素离子交换柱分离法纯化。结果表明:柱分离时,洗脱流速保持在1.0～1.5mL/min之间,洗脱液为0.04mol/L、0.05mol/L、0.06mol/LNaOH时,两种海带多糖可分别分离纯化出两种硫酸多糖:A1、A2和J1、J2。用硫酸钡浊度法测得硫酸根的含量分别为:6.26%、3.69%、1.02%、3.09%。

用Percoll试剂和DEAE-纤维素层析柱分离纯化鳝锥虫

用51%的Percoll分离液和DEAE-纤维素层析柱,从自然感染的黄鳝(Monopterus albusZuiew)中分离鳝锥虫(Trypanosoma monopteriChen et Hsieh,1964)。对含虫血液样品分别以2.1×103r/min、2.5×103r/min、2.9×103r/min、3.3×103r/min、3.6×103r/min离心5、10、15、20min,观察红细胞的去除和鳝锥虫存留百分数,结果表明:2.9×103r/min离心15min分离效果最佳。离心分离的混悬液含有锥虫、白细胞、血栓细胞和极少的红细胞,悬混液再经DEAE-纤维素过柱,得到纯净的鳝锥虫。过柱后光学显微镜观察,锥虫形态正常,运动活泼,无血细胞。本方法具有耗时短、回收率高的特点,是把梯度分离和离子交换结合在一起的一种快速有效方法,为鳝锥虫的进一步研究奠定了基础。另外,此方法还可以作为快速、准确检测自然状态下黄鳝是否感染锥虫的手段,为鳝锥虫的流行病学研究提供可靠的数据。

DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌多糖的工艺优化

为了能高效快速的分离纯化桦褐孔菌子实体多糖,使用DEAE-52纤维素静态法,分别研究了静态吸附过程中多糖的样品浓度、吸附时间、吸附温度和吸附振荡转速等因素对多糖吸附量的影响及解吸过程中洗脱时间和洗脱液量对多糖解吸量的影响,确定了多糖分离纯化优化工艺条件。结果表明:多糖浓度为40 mg/m L时,在30℃,120 r/min转速下吸附处理90 min,此时DEAE-52纤维素对多糖吸附效果最好。而分别以12倍体积的去离子水洗脱90 min后,采用11倍体积的0.2 mol/L Na Cl溶液洗脱60 min时,能达到最好的解吸效果,其中去离子水洗脱多糖浓度为0.56 mg/m L,0.2 mol/L Na Cl洗脱多糖浓度为0.38 mg/m L。静态洗脱出的两种多糖组分均为分子量均一分布的多糖组分,与DEAE-52纤维素柱层析分离效果一致。因此采用DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌子实体多糖是可行的。

不同浓度甘油和pH对DEAE-纤维素柱分离伊氏锥虫效果的影响

在不同ｐＨ条件下以不同浓度甘油破坏鼠红细胞后，用ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析分离纯化伊氏锥虫（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｅｖａｎｓｉ），结果表明在ｐＨ７．４时，２０％甘油能溶解大约９５％的大、小鼠红细胞；经此处理后，对Ｔ．ｅｖａｎｓｉ的回收率和活力无不良影响，可明显提高其分离纯化效果。作者还观察了渗透压和ｐＨ条件改变对Ｔ．ｅｖａｎｓｉ的影响。

纳米细菌纤维素柱层析分离

以海南特有的椰子水为原料,通过木醋杆菌合成细菌纤维素(bacterial cellulose,简称BC)。通过膜分离将大分子凝胶和菌种以及破碎细胞除去,采用等电点法和Sevage法除蛋白、乙醚除脂肪、离子交换树脂除盐、DEAE-32柱进行柱层析得到中性纳米细菌纤维素,经过Sephadex-G100柱层析精制得到重均分子量(Mw)为9598,分子量分布指数约为1.1的纳米细菌纤维素。用透射电镜测试了其形貌,证明其颗粒近似球形,直径约20nm。

大蒜多糖的分离纯化及抗氧化性的研究

采用热水浸提法从大蒜中提取大蒜粗多糖(GA),用DEAE-纤维素柱层析对GA进行纯化,得到中性多糖(GB)和酸性多糖(GC)。进一步对3种大蒜多糖的抗氧化性进行测定,结果显示:GB具有较好的清除羟基自由基和还原能力,GC具有较好的清除超氧阴离子自由基和配位能力,而GA的抗氧化能力则介于GB和GC之间。

酵母蛋白多糖的分离纯化及鉴定

以热带假丝酵母和八孢裂殖酵母为材料 ,通过化学抽提法得到多糖粗取物 ,经DEAE 纤维素阴离子交换柱分离纯化得到组分Ma和Mb ,经SephadexG 2 0 0柱层析鉴定 ,它们为均一成分 ,分子量分别为 4 38kD和 6 6 7kD ;蛋白分析表明Ma和Mb为蛋白多糖 ;经薄层层析和高压液相分析 ,Ma主要含甘露糖 ,Mb则由甘露糖和半乳糖组成 ,其摩尔比为 1 3∶1 ;氨基酸组成分析表明Ma和Mb含有 4种极性氨基酸和 1 2种非极性氨基酸 ;经邻苯三酚自氧化法检测Ma与Mb均能抑制邻苯三酚自氧化 ,具有体外抗氧化能力。动物实验表明Ma和Mb具有抑制小白鼠肝癌H2 2实体瘤的作用。

紫苏叶多糖纯化工艺的研究

研究了Seveage法对紫苏叶多糖的脱蛋白工艺。结果表明,氯仿与正丁醇的体积比为4∶1,样液与Seveage试剂的体积比为1∶1,时间为30 min,次数为4次,紫苏叶多糖的脱蛋白率为72.1%,多糖损失率为17.3%。紫苏叶多糖提取液经活性炭脱色、Seveage脱蛋白后通过DEAE-纤维素柱层析,采用蒸馏水、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mol/L Na Cl洗脱液进行洗脱,分离得到紫苏叶多糖Ⅰ(PLPⅠ)3.18μg/m L、紫苏叶多糖Ⅱ(PLPⅡ)4.64μg/m L、紫苏叶多糖Ⅲ(PLPⅢ)12.22μg/m L、紫苏叶多糖Ⅳ(PLPⅣ)26.36μg/m L、紫苏叶多糖Ⅴ(PLPⅤ)32.63μg/m L、紫苏叶多糖Ⅵ(PLPⅥ)62.52μg/m L六个紫苏叶多糖组分。

柔嫩艾美球虫裂殖子的分离纯化

采用标准分样筛过滤、离心洗涤、差速离心和DEAE 5 2纤维素柱层析法对球虫裂殖子进行了纯化 ,并对不同填充高度的DEAE 5 2纤维素层析柱的纯化效果进行了比较。结果表明 ,采用填充高度为 14cm的层析柱分离纯化效果较好 ,操作程序较简单 ,从 30只鸡的盲肠黏膜中纯化裂殖子 1.85× 10 7个 ,平均每只鸡获得裂殖子 6 .17× 10 5个 ,所获得的裂殖子杂质极少 ,其纯度适用于mRNA差异显示等分子生物学研究。

当归醇沉组分对肝CYP同工酶的影响

目的 :观察当归醇沉组分对肝 CYP同工酶的影响。方法 :采用 DEAE-纤维素作为分离递质 ,用 3种 p H值不同的洗脱液将当归醇沉物 (ESA)分离为 3种组分 :ESA-1、ESA-2、ESA-3。结果 :发现 ESA和 ESA-3可使小鼠肝脏微粒体中总 CYP量增加 ,ESA-2可抑制 7-乙氧异恶唑 -0 -脱乙基酶 (EROD)的活性 ,ESA-1、 ESA -2、 ESA-3均降低苯胺羟化酶 (AN H)的活性 ,ESA -2则升高红霉素 N-脱甲基酶 (ERD)的活性。结论 :当归可通过影响 CYP同工酶而发挥其在药物相互作用、抗肿瘤、抗氧化等方面的功能。

玉米SOD的分离与纯化

探索高速、快速的玉米SOD分离与纯化方法,旨在为玉米SOD的规模化生产提供依据。利用金属螯合亲和层析和DEAE-纤维素离子交换层析相结合的方法分离纯化玉米SOD,得到2种达到电泳纯的SOD组分(A、B),并对它们的基本性质进行了初步分析。SDS-PAGE法测定A、B两组分的亚基分子量分别为20 kD和16.4kD;由电泳后的定位染色情况可知,这2种SOD组分均属于Cu/Zn-SOD;等电聚焦表明,A、B两组分的等电点分别为7.2和6.9。

固定化Bacillus thuringiensis ZJOU-010壳聚糖酶的研究

采用吸附交联技术,以DEAE-22纤维素为载体、戊二醛为交联剂,固定Bacillus thuringiensis ZJOU-010壳聚糖酶,考察固定化酶的制备条件,并研究固定化酶的性质。结果表明B.thuringiensis ZJOU-010壳聚糖酶的最佳固定化条件为:戊二醛体积分数3.0%、加酶量20mg、固定化时间10h;在此条件下制备的固定化壳聚糖酶的最适pH值和温度分别为4.83和50℃;与游离酶相比,该固定化酶的热稳定性较好,在40℃和50℃条件下的半衰期(t1/2)分别为36.3h和6.2h,动力学常数Km值为9.19g/L;该固定化酶重复使用10批后活力仍可保持初始活力的88.32%。

人工培养冬虫夏草胞外多糖的分离纯化研究

本文以乙醇沉淀法提取得到的人工培养冬虫夏草(Cs-HK1)粗胞外多糖为研究对象,采用DEAE-52纤维素(Cl-)离子交换柱层析和Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析进行分离、纯化得到一水溶性胞外多糖分EPS-1A。紫外光谱、比旋光度和凝胶渗透色谱法研究表明该多糖为相对均一组分,中性糖含量为99.0%,重均相对分子质量为4.0×104。多糖特征反应表明该多糖为非淀粉类,不含单糖、糖醛酸、蛋白质、核酸和多酚类物质的中性多糖。

自盐藻藻渣中提取及纯化盐藻多糖

目的从萃取过β-胡萝卜素后的盐藻藻渣中提取纯化盐藻多糖。方法采用热碱水提取,DEAE-纤维素和Sepharose-4B柱层析等方法分离纯化盐藻多糖。结果通过DEAE-纤维素柱层析分离得到3个组分,每个组分经过Sepdex-4B柱层析分别得到2个组分。结论这6个组分为均一组分,均为含有硫酸基和已糖醛酸的糖蛋白。

枇杷叶多糖的分离纯化及组分鉴定

提取纯化枇杷叶多糖,并对其组分进行研究。枇杷叶多糖提取液经大孔树脂除杂,醇沉后干燥即得枇杷叶可溶性总多糖。经DEAE-52纤维素柱层析及Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析,得到纯化后多糖,并采用Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱测定多糖的分子量,水解多糖后采用薄层层析对枇杷叶多糖进行组分鉴定及单糖的组成比例测定。通过DEAE-52柱层析得3个枇杷叶多糖酸性组分,分别经过Sephadex G-200柱层析得到3个乳白色组分,分别为PSL-1、PSL-2、PSL-3。3个组分的洗脱曲线均为单一对称峰,初步判断3个组分含有单一成分的多糖。PSL-1、PSL-2、PSL-3分子量分别约为700、500、400 k Da。经过薄层层析初步推断出PSL-1含有鼠李糖和葡萄糖,含量之比为1∶0.602;PSL-2含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖,含量之比为1∶1.415∶1.408;PSL-3含有半乳糖和鼠李糖,含量之比为1∶1.03。

粗毛栓菌漆酶的分离纯化及部分性质研究

将一株自筛的粗毛栓菌（Trametes gallic Fr）接种在含有麦草粉的培养基中可获得较高产量的漆酶,此酶可以吸附到DEAE-纤维素上而被直接从发酵液中分离出来.采用DEAE-纤维素柱层析,用含有0.1-0.9mol/L NaCl的磷酸缓冲液（pH4.5）进行梯度洗脱,可以获得较为纯化的漆酶,经研究,该菌株所产漆酶,以邻联甲苯胺为底物,最适pH值为4.0,最适反应温度40℃,Km为0.105 mmol/L.