DEAE52离子交换层析法提纯禽腺病毒的效果观察

鸡产蛋下降综合症Egg Drop Syhdrom-1976, EDS)是禽腺病毒感染蛋鸡和种母鸡所引起的一种传染病,可使鸡群产蛋量下降10%～30%,甚至高达41%,蛋壳异常,蛋体畸形,产软壳蛋、薄壳蛋、粗壳蛋,使蛋的破损率增大,品质低劣,是目前引起产蛋下降的主要传染病.

离子交换层析初步分离大鼠肝蛋白水解酶、ADAMs、ACP、AKP和PCNA

用DEAE 离子交换层析法分离 2 /3肝切除 ( partialhepatectomy ,PH)后恢复 4、 3 6和 14 4h的大鼠再生肝及正常肝的蛋白水解酶、ADAMs、ACP、AKP和PCNA ;用SDS PAGE、Western blot、酶复性电泳等方法 ,分析了它们在不同洗脱段中的分布及活性变化 ,为分离与肝再生有关的蛋白 (酶 )提供了资料。

离子交换层析和凝胶过滤分离纯化抗凝血多肽

以DEAE C5 2离子交换层析和SephadexG5 0凝胶过滤成功地从盐源山蛭 (Haemendipsayanyuanensis)头部分离纯化了抗凝血多肽 ,获得了蛋白质质量浓度为 1.17mg·mL-1、抗凝血酶比活性为 15 2 .78U·mg-1的抗凝血多肽 ,证明了DEAE C5 2离子交换层析和SephadexG5

DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌多糖的工艺优化

为了能高效快速的分离纯化桦褐孔菌子实体多糖,使用DEAE-52纤维素静态法,分别研究了静态吸附过程中多糖的样品浓度、吸附时间、吸附温度和吸附振荡转速等因素对多糖吸附量的影响及解吸过程中洗脱时间和洗脱液量对多糖解吸量的影响,确定了多糖分离纯化优化工艺条件。结果表明:多糖浓度为40 mg/m L时,在30℃,120 r/min转速下吸附处理90 min,此时DEAE-52纤维素对多糖吸附效果最好。而分别以12倍体积的去离子水洗脱90 min后,采用11倍体积的0.2 mol/L Na Cl溶液洗脱60 min时,能达到最好的解吸效果,其中去离子水洗脱多糖浓度为0.56 mg/m L,0.2 mol/L Na Cl洗脱多糖浓度为0.38 mg/m L。静态洗脱出的两种多糖组分均为分子量均一分布的多糖组分,与DEAE-52纤维素柱层析分离效果一致。因此采用DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌子实体多糖是可行的。

DEAE-52在中药多糖分离纯化中的应用

随着科学技术的迅猛发展,越来越多的新材料和新技术应用到多糖的分离纯化中,离子交换层析在中药多糖分离纯化中应用广泛,DEAE-52作为典型的离子交换剂,具有分离效率高、操作方便、应用范围广等优点,本文就DEAE-52在中药多糖分离纯化方面的应用进行综述,为相关的研究提供参考。

滇产刺梨多糖的提取纯化及其结构分析

目的:探讨刺梨多糖提取和纯化的方法。方法:采用热水提取醇沉法从刺梨果实中提取多糖,在单因素实验的基础上,以响应面实验对刺梨多糖的提取工艺进行优化。采用Cellulose DEAE-52和Sephadex G-100柱对刺梨粗多糖进行分离纯化,Sevage法脱蛋白,D-101吸附树脂脱色素,FT-IR、HPGPC和HPLC测定分子量和单糖组成。结果:刺梨多糖是一种以Glc为主要成分的均一性酸性多糖。

不同浓度甘油和pH对DEAE-纤维素柱分离伊氏锥虫效果的影响

在不同ｐＨ条件下以不同浓度甘油破坏鼠红细胞后，用ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析分离纯化伊氏锥虫（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｅｖａｎｓｉ），结果表明在ｐＨ７．４时，２０％甘油能溶解大约９５％的大、小鼠红细胞；经此处理后，对Ｔ．ｅｖａｎｓｉ的回收率和活力无不良影响，可明显提高其分离纯化效果。作者还观察了渗透压和ｐＨ条件改变对Ｔ．ｅｖａｎｓｉ的影响。

乳清蛋白肽的酶法制备、分离纯化及活性评价

以抗氧化活性及蛋白质回收率为筛选指标对乳清蛋白肽酶解工艺进行优化,用层析柱对酶解液进行逐级分离纯化,并对其分子质量进行检测.研究结果表明:利用胰酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解制备乳清蛋白肽,最佳用酶为碱性蛋白酶、最适底物含量为4.0%、最适加酶量为8000U/g、最佳酶解时间为4h;酶解液经DEAE-52纤维素层析后得到的A组分抗氧化活性最好,其还原力为0.320 0±0.004 1,DPPH自由基清除率为6.58%±0.36%;A组分再经Sephadex G-15葡聚糖凝胶层析柱分离纯化后得到组分G,其DPPH自由基清除率为6.73%±0.083%;组分G的主要成分为分子质量378 u的肽段,其一级氨基酸组成为赖氨酸(Lys)、亮氨酸(Leu)及丝氨酸(Ser).

鲍曼不动杆菌烈性噬菌体的分离与纯化

利用柱层析方法,纯化鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)烈性噬菌体AB1。首先采用聚乙二醇6000沉淀方法,初步分离裂解液中的噬菌体,噬菌体纯度由6.1×1010 pfu/mg提高到37×1010 pfu/mg,噬菌体回收率为58.8%,蛋白质去除率为90.6%;噬菌体粗提样品经Sepharose 4B凝胶过滤层析柱进一步纯化,纯度提高到73×1010 pfu/mg,噬菌体回收率为95.7%,蛋白质去除率为48.1%;收集的噬菌体样品最后经DEAE-52阴离子交换层析柱处理,噬菌体纯度为40×1010 pfu/mg,回收率为50.8%,蛋白去除率15.6%。内毒素分析结果显示,Sepharose 4B凝胶过滤层析纯化的噬菌体样品中,内毒素含量为443.8 EU/mg,而DEAE-52阴离子交换层析纯化的噬菌体样品中,内毒素含量为544.4 EU/mg。实验结果显示,PEG沉淀方法与Sepharose 4B凝胶过滤方法能够有效地提高噬菌体纯度,而DEAE-52阴离子交换层析则不能提高噬菌体的纯度,也无法有效地去除样品中的内毒素。

羊栖菜活性组份多糖的体外抗氧化能力比较

为探索羊栖菜中分离的各组份多糖体外抗氧化活性,将DEAE-52分离纯化得到的羊栖菜多糖活性组份进行红外光谱扫描确认,并评价DPPH·、·OH、O_2^-自由基的清除能力,还原力和抗脂质过氧化力。结果表明,去蛋白多糖经DEAE-52分离纯化、0~2 M Na Cl溶液梯度洗脱得到3个主要多糖组份,其中红光谱扫描发现SFPSⅠ(0.5 M Na Cl)、SFPSⅡ(0.75 M Na Cl)、SFPSⅢ(1.0 M Na Cl)均具有糖类特征吸收峰。3个组份均表现出较强的抗氧化活性,其中SFPSⅢ抗氧化活性最高,DPPH·的IC_(50)为0.499μg,·OH的IC_(50)为0.48μg,O_2^-的IC_(50)为112.13μg;还原力最强;抗脂质过氧化能力显著优于对照品BHT。研究结果为羊栖菜活性多糖作为天然抗氧化剂及功能性食品开发提供了理论基础。

柔嫩艾美球虫裂殖子的分离纯化

采用标准分样筛过滤、离心洗涤、差速离心和DEAE 5 2纤维素柱层析法对球虫裂殖子进行了纯化 ,并对不同填充高度的DEAE 5 2纤维素层析柱的纯化效果进行了比较。结果表明 ,采用填充高度为 14cm的层析柱分离纯化效果较好 ,操作程序较简单 ,从 30只鸡的盲肠黏膜中纯化裂殖子 1.85× 10 7个 ,平均每只鸡获得裂殖子 6 .17× 10 5个 ,所获得的裂殖子杂质极少 ,其纯度适用于mRNA差异显示等分子生物学研究。

黄绿蜜环菌菌丝体多糖分离纯化与含量测定

分离纯化黄绿蜜环菌菌丝体粗多糖,提高多糖含量,以进一步应用于工业化生产。采用DEAE-52纤维素层析柱分离纯化黄绿蜜环菌菌丝体多糖,依次用水、0.1 mol/L Na Cl、0.2 mol/L Na Cl、0.4 mol/L Na Cl、0.8 mol/L Na Cl进行洗脱;苯酚-硫酸法测定纯化后多糖含量,测定波长490nm,葡萄糖浓度与吸光度的回归方程为A=6.3137X+0.2156R2=0.9909。黄绿蜜环菌菌丝体水体粗多糖经DEAE-52纤维素层析柱分离纯化后,多糖含量达到99%以上。经过中试试验验证提取及分离纯化工艺适用于工业化生产。

玉米SOD的分离与纯化

探索高速、快速的玉米SOD分离与纯化方法,旨在为玉米SOD的规模化生产提供依据。利用金属螯合亲和层析和DEAE-纤维素离子交换层析相结合的方法分离纯化玉米SOD,得到2种达到电泳纯的SOD组分(A、B),并对它们的基本性质进行了初步分析。SDS-PAGE法测定A、B两组分的亚基分子量分别为20 kD和16.4kD;由电泳后的定位染色情况可知,这2种SOD组分均属于Cu/Zn-SOD;等电聚焦表明,A、B两组分的等电点分别为7.2和6.9。

人工培养冬虫夏草胞外多糖的分离纯化研究

本文以乙醇沉淀法提取得到的人工培养冬虫夏草(Cs-HK1)粗胞外多糖为研究对象,采用DEAE-52纤维素(Cl-)离子交换柱层析和Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析进行分离、纯化得到一水溶性胞外多糖分EPS-1A。紫外光谱、比旋光度和凝胶渗透色谱法研究表明该多糖为相对均一组分,中性糖含量为99.0%,重均相对分子质量为4.0×104。多糖特征反应表明该多糖为非淀粉类,不含单糖、糖醛酸、蛋白质、核酸和多酚类物质的中性多糖。

千斤拔多糖的提取纯化及其结构鉴定

利用正交试验考察千斤拔多糖的提取工艺,并比较脱蛋白方法中的Sevag法和三氯乙酸法的纯化效果,总糖含量测定采用苯酚-硫酸法,蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法;采用DEAE-52纤维柱法来分离多糖,并运用HPLC色谱来分析千斤拔多糖中的单糖成分。结果表明:经正交试验得出千斤拔多糖的最佳提取条件为时间2.5 h,料液比为1∶30,温度80℃,其多糖得率为8.558%。对比两种脱蛋白的方法,Sevage法萃取3次时蛋白的脱除效果最好。经DEAE-52纤维柱来分离多糖共分得7个组分。经HPLC色谱鉴定出有葡萄糖,甘露糖和阿拉伯糖,主要单糖成分为葡萄糖。

单组分胰岛素的制备及质量分析

单峰胰岛素经DEAE 琼脂糖快流速离子交换层析后用醋酸锌结晶,得到结晶单组分胰岛素.层析和结晶的胰岛素回收率分别为93.8%±1.0%(n=3)和94.7%±1.5%(n=3).产品经PAGE分析为单带,HPLC检测高分子量杂蛋白和脱酰胺胰岛素的含量分别为0.42%±0.06%(n=3)和1.29%±0.06%(n=3),锌的残留量为0.187%±0.006%(n=3),产品效价为27.13±0.40U/mg(n=3).所有指标均达到USP24的质量标准.该工艺具有回收率高、产品质量好的特点.

枇杷叶多糖的分离纯化及组分鉴定

提取纯化枇杷叶多糖,并对其组分进行研究。枇杷叶多糖提取液经大孔树脂除杂,醇沉后干燥即得枇杷叶可溶性总多糖。经DEAE-52纤维素柱层析及Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析,得到纯化后多糖,并采用Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱测定多糖的分子量,水解多糖后采用薄层层析对枇杷叶多糖进行组分鉴定及单糖的组成比例测定。通过DEAE-52柱层析得3个枇杷叶多糖酸性组分,分别经过Sephadex G-200柱层析得到3个乳白色组分,分别为PSL-1、PSL-2、PSL-3。3个组分的洗脱曲线均为单一对称峰,初步判断3个组分含有单一成分的多糖。PSL-1、PSL-2、PSL-3分子量分别约为700、500、400 k Da。经过薄层层析初步推断出PSL-1含有鼠李糖和葡萄糖,含量之比为1∶0.602;PSL-2含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖,含量之比为1∶1.415∶1.408;PSL-3含有半乳糖和鼠李糖,含量之比为1∶1.03。

龙须菜多糖的提取、分离及抗氧化活性的研究

对龙须菜多糖的最适提取工艺条件、分离方法及其抗氧化活性进行了研究. 结果表明: 提取多糖的最适条件为浸提温度90℃, 浸提时间4 h, 料水比1∶100. 分别经DEAE 纤维素离子交换层析柱和Sephadex 100层析柱分离, 均显示出提取的多糖含有3种以上组分. 抗氧化实验显示该多糖对Fenton体系产生的·OH自由基具有较强的清除能力.

鸡SIgA的提取鉴定及其抗体制备

实验采用饱和硫酸铵法从健康肉鸡胆囊收集的胆汁中粗提二聚体SIgA,继而透析粗提产物除盐,然后进行纤维素DEAE-52离子交换层析,使用紫外分光光度计测定收集液的蛋白浓度,对层析产物浓缩使其浓度≥2.0 mg/m l,最后使用SDS-PAGE进行鉴定,从电泳所得图像中可以看到清晰的两个条带,一个条带分子量在67～70 ku之间为重链,另一个条带在26～28 ku之间为轻链。进一步将纯化的鸡SIgA抗体免疫健康兔,制备得到兔抗鸡SIgA抗体。