通过采用硫酸铵盐析法、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析法提取分离制备苦荞水溶性蛋白,并通过磷酸盐缓冲液pH值、动态层析流速的最佳选择改善分离提纯效果。同时通过体外吸附胆酸盐能力的测定证实所提取分离得到的苦荞水溶性蛋...通过采用硫酸铵盐析法、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析法提取分离制备苦荞水溶性蛋白,并通过磷酸盐缓冲液pH值、动态层析流速的最佳选择改善分离提纯效果。同时通过体外吸附胆酸盐能力的测定证实所提取分离得到的苦荞水溶性蛋白具有一定的降血脂功能。结果发现:当磷酸盐缓冲溶液pH值为6.5、流速1.0mL/min于室温下洗脱的效果最好,得到的3个主要分离组分中峰3的体外吸附胆酸盐能力最佳。展开更多
目的:从断体地龙提取液中筛选其促进创伤愈合的活性成分。方法:采用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析对断体地龙提取液进行分离纯化,通过CCK-8法测定不同洗脱液对NIH3T3细胞增殖的作用,筛选活性较强的组分。结果:离子交换层析梯...目的:从断体地龙提取液中筛选其促进创伤愈合的活性成分。方法:采用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析对断体地龙提取液进行分离纯化,通过CCK-8法测定不同洗脱液对NIH3T3细胞增殖的作用,筛选活性较强的组分。结果:离子交换层析梯度洗脱后得到5个洗脱峰。在一定浓度范围内,五种成分对NIH3T3细胞均有促进增殖作用,细胞增殖率随着蛋白浓度增大呈依赖上升趋势。当蛋白浓度为1.5μg/m L时,各组细胞增殖率均达到最大值,其中3号洗脱液作用的细胞增殖率最大。结论:断体地龙提取液经离子交换层析后得到的3号洗脱液促进NIH3T3细胞增殖作用最强,表明其可能含有促进创伤愈合的潜在活性成分,有待进一步研究。展开更多
目的制备MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体,并进行纯化及初步应用,为进一步研制宿主细胞残留蛋白检测试剂盒奠定基础。方法无血清悬浮培养MDCK细胞,采用不同方法(反复冻融、裂解液、超声)裂解细胞获得全细胞蛋白抗原。将抗原与弗氏佐剂...目的制备MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体,并进行纯化及初步应用,为进一步研制宿主细胞残留蛋白检测试剂盒奠定基础。方法无血清悬浮培养MDCK细胞,采用不同方法(反复冻融、裂解液、超声)裂解细胞获得全细胞蛋白抗原。将抗原与弗氏佐剂乳化后经背部多点皮下免疫家兔,间接ELISA法检测血清抗体效价,当抗体效价≥1×106时,经家兔颈动脉采血,获得含多克隆抗体的血清。血清先经硫酸铵盐析粗提,再经DEAE-Sepharose Fast Flow和Protein A精纯,获得多克隆抗体,分析抗体蛋白回收率、纯度及抗原覆盖率。应用制备的多克隆抗体,Western blot法检测MDCK细胞培养流感病毒纯化工艺各阶段样品的宿主细胞残留蛋白。结果采用不同方法裂解细胞与不同离心力制备的抗原无区别,免疫家兔后,血清抗体效价最高可达320 000;纯化后的多克隆抗体纯度> 94%,DEAE-sepharose Fast Flow柱纯化效果优于Protein A柱;MDCK细胞培养流感病毒纯化初期存在较多的宿主细胞蛋白,经多步骤纯化后,单价原液中未见残留蛋白,仅含流感病毒蛋白。结论成功制备了MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体,可定性分析纯化各阶段样品的残留蛋白。展开更多
文摘通过采用硫酸铵盐析法、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析法提取分离制备苦荞水溶性蛋白,并通过磷酸盐缓冲液pH值、动态层析流速的最佳选择改善分离提纯效果。同时通过体外吸附胆酸盐能力的测定证实所提取分离得到的苦荞水溶性蛋白具有一定的降血脂功能。结果发现:当磷酸盐缓冲溶液pH值为6.5、流速1.0mL/min于室温下洗脱的效果最好,得到的3个主要分离组分中峰3的体外吸附胆酸盐能力最佳。
文摘目的:从断体地龙提取液中筛选其促进创伤愈合的活性成分。方法:采用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析对断体地龙提取液进行分离纯化,通过CCK-8法测定不同洗脱液对NIH3T3细胞增殖的作用,筛选活性较强的组分。结果:离子交换层析梯度洗脱后得到5个洗脱峰。在一定浓度范围内,五种成分对NIH3T3细胞均有促进增殖作用,细胞增殖率随着蛋白浓度增大呈依赖上升趋势。当蛋白浓度为1.5μg/m L时,各组细胞增殖率均达到最大值,其中3号洗脱液作用的细胞增殖率最大。结论:断体地龙提取液经离子交换层析后得到的3号洗脱液促进NIH3T3细胞增殖作用最强,表明其可能含有促进创伤愈合的潜在活性成分,有待进一步研究。
文摘目的制备MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体,并进行纯化及初步应用,为进一步研制宿主细胞残留蛋白检测试剂盒奠定基础。方法无血清悬浮培养MDCK细胞,采用不同方法(反复冻融、裂解液、超声)裂解细胞获得全细胞蛋白抗原。将抗原与弗氏佐剂乳化后经背部多点皮下免疫家兔,间接ELISA法检测血清抗体效价,当抗体效价≥1×106时,经家兔颈动脉采血,获得含多克隆抗体的血清。血清先经硫酸铵盐析粗提,再经DEAE-Sepharose Fast Flow和Protein A精纯,获得多克隆抗体,分析抗体蛋白回收率、纯度及抗原覆盖率。应用制备的多克隆抗体,Western blot法检测MDCK细胞培养流感病毒纯化工艺各阶段样品的宿主细胞残留蛋白。结果采用不同方法裂解细胞与不同离心力制备的抗原无区别,免疫家兔后,血清抗体效价最高可达320 000;纯化后的多克隆抗体纯度> 94%,DEAE-sepharose Fast Flow柱纯化效果优于Protein A柱;MDCK细胞培养流感病毒纯化初期存在较多的宿主细胞蛋白,经多步骤纯化后,单价原液中未见残留蛋白,仅含流感病毒蛋白。结论成功制备了MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体,可定性分析纯化各阶段样品的残留蛋白。