DEAE-Sepharose阴离子交换柱一步纯化重组人IL-6

目的：为了制备高纯度、高活性的重组人白细胞介素与。方法：化学诱导重组表达载体pT7．7hIL-6进行蛋白表达，菌体经超声破碎分离包涵体，并对包涵体进行洗涤、变性和复性处理，用DEAE-Sepharose CL-6B弱阴离子交换柱一步纯化复性的重组人IL-6。采用3H-TdR法测定rh-IL-6的活性。结果：表达产物经纯化后纯度达95％，比活性为3．0x10^8U/mg。结论：本实验设计的纯化工艺简便易行，所得产品纯度度、产率高。

DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析对龙牙百合多糖纯化工艺研究

采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换剂、4.6 cm×100 cm的层析柱,以多糖主峰的对称性、宽度和多糖得率为指标,筛选最佳上样量、流速和吸附时间,研究龙牙百合多糖的分离纯化工艺,探索快速、大量提纯百合多糖的方法和途径。结果表明:分离多糖工艺条件为上样量2 g、洗脱流速2 mL/min、吸附时间5 min,分离得2种多糖LLP1、LLP2,得率分别为33%、19.5%,总得率为52.5%,主峰尖锐、对称性好。

离子交换凝胶Capto-DEAE替代DEAE-Sepharose纯化乙脑病毒抗原研究

乙脑病毒抗原离子交换层析中,使用新型的凝胶填料Capto-DEAE替代DEAE-Sepharose纯化乙脑病毒抗原的研究。研究结果表明,使用离子交换凝胶填料Capto-DEAE层析不仅产品质量更好,而且生产效率也得到了提高。

苦荞水溶性蛋白体外吸附胆酸盐能力的研究

通过采用硫酸铵盐析法、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析法提取分离制备苦荞水溶性蛋白,并通过磷酸盐缓冲液pH值、动态层析流速的最佳选择改善分离提纯效果。同时通过体外吸附胆酸盐能力的测定证实所提取分离得到的苦荞水溶性蛋白具有一定的降血脂功能。结果发现:当磷酸盐缓冲溶液pH值为6.5、流速1.0mL/min于室温下洗脱的效果最好,得到的3个主要分离组分中峰3的体外吸附胆酸盐能力最佳。

桔梗多糖的分离纯化与含量测定

利用离子交换凝胶柱层析法分离纯化桔梗多糖,并对纯化组分进行纯度鉴定和糖含量及蛋白质含量测定。桔梗饮片经热水浸提、乙醇分步沉淀得桔梗粗多糖PPS80,Sevage法脱蛋白后,通过DEAE-Sepharose FF离子交换和Sephadex G-75凝胶柱层析进行纯化鉴定。分别采用苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝染色法测定纯化后各组分的糖和蛋白质含量。试验结果表明,从桔梗粗多糖PPS80中分离得到2个均一性组分PPS80-I和PPS80-Ⅱ,糖含量分别为90.32%和86.75%,蛋白质含量分别为0.48%和1.96%。该试验首次采用DEAE-Sepharose FF离子交换柱层析结合Sephadex G-75凝胶柱层析有效分离纯化出桔梗多糖均一性组分,为桔梗多糖的进一步研究提供基础。

肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的提取纯化及其对细胞免疫活性的影响

采用液体深层培养得肺炎克雷伯氏菌Kp 9株发酵液,研究确立了菌体快速裂解条件:NP4 0 1%和胰蛋白酶2 5 0IU g菌体,5 0℃作用1h ,然后加入溶菌酶80 μg mL ,5 6℃作用1h ;裂解液经超滤浓缩和有机溶剂沉淀获得多糖粗品;多糖粗品先后经CTAB吸附分离,DEAE SepharoseFastFlow离子交换和SephacrylS 30 0HR凝胶过滤纯化,得分子量分布相对均一的多糖纯品,产品得率为0 2 5 1g L。采用淋巴细胞转化实验分别探讨了多糖粗品和纯品的免疫活性,研究显示荚膜多糖具有高效的体外细胞免疫活性,并具有典型的双向免疫调节作用。研究结论为肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的开发奠定了前期基础。

一步柱层析纯化B-藻红蛋白及其毛细管电泳结合激光诱导检测

本研究采用硫酸铵沉淀结合DEAE-SepharoseFF离子交换柱层析技术分离纯化紫球藻中的B-藻红蛋白。试验结果表明,藻红蛋白粗提物经65%硫酸铵沉淀2d后过柱层析,B-藻红蛋白的纯度为A545nm/A280nm=3.0;而用65%硫酸铵沉淀2个月后,只需采用一步柱层析,B-藻红蛋白的纯度可提高到5.37,即达到纯品要求(纯度大于4.5)。说明65%硫酸铵对B-藻红蛋白具有高度选择性,其工艺效果对分离纯化有很大影响。特征吸收光谱和荧光光谱证实纯化后的产物符合B-藻红蛋白的性质,Native-PAGE电泳只出现单一染色带,表明获得的B-藻红蛋白是均一的;SDS-PAGE电泳出现2条染色带,一条着色较深带为α和β亚基,分子量为16～18kD左右,另一条较浅为γ亚基,分子量大约为31kD。同时建立了涂层毛细管柱结合激光诱导荧光电泳技术快速检测B-藻红蛋白纯度的分析方法,结果出现单一峰,表明毛细管电泳用于B-藻红蛋白的纯度检测高效可靠。

批式吸附法制备人凝血因子Ⅸ复合物(英文)

目的 制备纯度较高 ,潜在血栓性小的凝血因子Ⅸ (FⅨ )复合物。方法 以人新鲜冰冻血浆为原料 ,采用SD病毒灭活工艺 ,经国产DEAE SepharoseFastFlow胶批式吸附和Ca3 (PO4) 2 吸附制备凝血因子Ⅸ复合物。结果 两步的活性收率分别为 ( 89.94± 1.31) % (n =7)、( 82 .2 7± 2 .18) % (n =6 ) ,制品的FⅨ∶C比活为 ( 16 .2 8± 2 .80 )IU/mg。FIX的量为 ( 12 6 .82±11.6 0 )IU/瓶 ( 2 0 0PE)。结论 本工艺实用性较高 ,可用于制备低成本 ,高质量的凝血因子Ⅸ复合物。

大量分离叶绿素a和b的方法

在原有分离叶绿素a和b的DEAE SepharoseCL 6B和SepharoseCL 6B柱层析法的基础上 ,用较大的层析柱 ,在保持分离效果的前提下 ,提高流速 ,并对层析柱进行原位再生处理 ,实现循环分离 ,可节省装柱和平衡时间 ,快速大量分离纯化叶绿素并可循环再生。 10 0 g菠菜叶可分离得到叶绿素a约 5 0mg ,叶绿素b约 15mg。

断体地龙促进创伤愈合活性成分筛选研究

目的:从断体地龙提取液中筛选其促进创伤愈合的活性成分。方法:采用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析对断体地龙提取液进行分离纯化,通过CCK-8法测定不同洗脱液对NIH3T3细胞增殖的作用,筛选活性较强的组分。结果:离子交换层析梯度洗脱后得到5个洗脱峰。在一定浓度范围内,五种成分对NIH3T3细胞均有促进增殖作用,细胞增殖率随着蛋白浓度增大呈依赖上升趋势。当蛋白浓度为1.5μg/m L时,各组细胞增殖率均达到最大值,其中3号洗脱液作用的细胞增殖率最大。结论:断体地龙提取液经离子交换层析后得到的3号洗脱液促进NIH3T3细胞增殖作用最强,表明其可能含有促进创伤愈合的潜在活性成分,有待进一步研究。

云芝胞内多糖CVP-Ⅱ的分离与初步鉴定

从液体发酵的云芝菌丝体中提取获得菌丝体胞内多糖,,经DEAE-SepharoseCL-6B洗脱分离出一种主要组分CVP-Ⅱ,该组分经凝胶层析显现单一峰,初步鉴定CVP-Ⅱ为较纯组分,对CVP-Ⅱ进行紫外分析,结果发现该组分呈现蛋白结合多糖的特征,从红外分析来看,明显呈现出多糖的官能团吸收.

冬虫夏草菌中酸性非限制性DNA内切酶的研究

从冬虫夏草菌丝体中提取并纯化了一种酸性非限制性DNA内切酶,命名为CSDNase.CSDNase是通过(NH4)2SO4 沉淀, Sephacryl S 100 HR分子筛层析柱,DEAE Sepharose F.F离子交换和HPLC分离纯化得到的.在SDS PAGE电泳中CSDNase分子量约为34 kDa.CSDNase对超螺旋DNA(质粒),双链DNA(λDNA),单链DNA(鲑鱼精DNA)都有非特异性的内切酶活性,但CSDNase 不能消化RNA. CSDNase 在pH5.5的醋酸铵缓冲体系中处于最大DNase活性,最适反应温度为55 ℃.CSDNase酶活不依赖于金属离子,EDTA不能抑制其酶活,但高浓度的金属离子对酶活有明显的抑制作用.

丹参多糖提取工艺研究

本文对丹参多糖的结构与组成研究,丹参药材经过水提醇沉得到丹参粗多糖,经二次醇沉纯化、H2O2脱色、冷冻干燥后得到浅黄色多糖.经过DEAE-Sepharose Na Cl梯度洗脱后,测定表明丹参多糖以中性多糖为主.

交变电场下离子交换色谱分离过程

以牛血清白蛋白在阴离子交换剂DEAE -SepharoseFastFlow上的吸附和解吸过程为例 ,考察了交变电场下离子交换色谱过程的吸附和洗脱过程及其传质特性 .结果表明 :在本文实验条件下 ,交变电场电流强度的变化对离子交换吸附平衡无显著影响 ,而外加电场在介质孔内所产生的电渗流可加速待分离组分进出固相介质的传递过程 ,显著提高色谱填充床的动态吸附容量 。

关白附多糖纯化工艺优化及抑制结肠癌肝转移

目的采用Box-Behnken法优化关白附粗多糖经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱法分离得到0.2M NaCl部位多糖ACP02的纯化工艺,为该成分的富集和后续的药效开发打下基础。方法在单因素试验基础上,以上样量、洗脱时间、洗脱流速为影响因素,总多糖含量为评价指标,Box-Behnken响应面法优化纯化工艺。以雄性BALB/C裸鼠注射HT-29单细胞悬液作为结肠癌肝转移模型,分别用多糖低剂量组(100 mg·kg^(-1 ))、多糖高剂量组(200 mg·kg^(-1 ))处理,观察老鼠体重变化,30天后处死小鼠,取出肝脏和脾脏,观察发生转移的裸鼠个体数量。结果根据响应面法得出DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱法最优工艺参数,即上样量5.03 g,洗脱时间73.10 min,洗脱流速7.33 mL·min^(-1);不同质量浓度多糖给药后,裸鼠体重无明显变化,给药组与对照组相比较发生转移的裸鼠个体数量显著性减少。结论该方法纯化ACP02方便可行、稳定可靠、预测性良好。ACP02对于体内结肠癌肿瘤肝转移有明显抑制作用。

神经红蛋白的表达、分离纯化和谱学表征

报道了神经红蛋白(NGB)的基因表达、分离纯化和谱学表征.将载有NGB基因的pET3a质粒转入E.ColiBL21(DE3)plys细菌,于TB培养基中进行表达,其表达量占菌体总蛋白的10%左右.依次经硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose阴离子交换柱,Hiload16/60Superdex75凝胶过滤柱和Hiprep16/10QFF阴离子交换柱纯化,得到了电泳纯的血红色可溶性蛋白.电喷雾质谱测得其分子量为16930.0Da.紫外-可见吸收光谱表明,还原态的NGB在425nm有一强吸收峰,在531和559nm处有弱吸收峰,它们可分别归属为金属卟啉的γ,β和α吸收带,氧化态的NGB在413nm处有强吸收,则对应于金属卟啉的γ吸收带,是电子在卟啉环中非定域化π电子的轨道跃迁(π→π?)的结果.荧光激发谱最大波长为281nm,发射谱最大波长为338nm.圆二色谱表明其二级结构为典型的α螺旋结构,在410nm处有一血红素正峰.酸稳定性研究表明,pH>4时蛋白稳定.

MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体的制备、纯化及初步应用

目的制备MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体,并进行纯化及初步应用,为进一步研制宿主细胞残留蛋白检测试剂盒奠定基础。方法无血清悬浮培养MDCK细胞,采用不同方法(反复冻融、裂解液、超声)裂解细胞获得全细胞蛋白抗原。将抗原与弗氏佐剂乳化后经背部多点皮下免疫家兔,间接ELISA法检测血清抗体效价,当抗体效价≥1×106时,经家兔颈动脉采血,获得含多克隆抗体的血清。血清先经硫酸铵盐析粗提,再经DEAE-Sepharose Fast Flow和Protein A精纯,获得多克隆抗体,分析抗体蛋白回收率、纯度及抗原覆盖率。应用制备的多克隆抗体,Western blot法检测MDCK细胞培养流感病毒纯化工艺各阶段样品的宿主细胞残留蛋白。结果采用不同方法裂解细胞与不同离心力制备的抗原无区别,免疫家兔后,血清抗体效价最高可达320 000;纯化后的多克隆抗体纯度> 94%,DEAE-sepharose Fast Flow柱纯化效果优于Protein A柱;MDCK细胞培养流感病毒纯化初期存在较多的宿主细胞蛋白,经多步骤纯化后,单价原液中未见残留蛋白,仅含流感病毒蛋白。结论成功制备了MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体,可定性分析纯化各阶段样品的残留蛋白。