采用高效离子交换色谱分离分析动物肠道菌群方法初探

报道了利用高效离子交换色谱直接分离动物粪便肠道菌群的有关研究结果.人与兔的粪便样品稀释后经离心分离岀细菌,通过DEAE弱阴离子交换色谱(30cm×2cmi.d)进一步除去杂物,将所得细菌的完整细胞样品直接上样高效液相阴离子交换色谱进行分离.色谱柱采用TSKgelSuperQ-TOYOPEARL650C强阴离子交换树脂,平衡缓冲液为0.02mol/L的哌嗪-HCl缓冲液(pH8.0),吸附于色谱柱上的细菌完整细胞用0～1mol/LNaCl线性梯度进行洗脱,洗岀液由260nm紫外吸收与光散射强度检测器检测.人与兔粪便细菌样品分别获得8个与5个组分,经镜检与培养实验确认为细菌,并且光散射仪洗脱峰峰面积同细菌计数结果具有线性相关性.实验表明,高效离子交换色谱能够应用于肠道菌群这样的复杂细菌体系的分离分析.

超大孔离子交换制备色谱分离纯化高活性凝血因子Ⅷ

建立了一条从人血浆中分离高活性凝血因子Ⅷ(FⅧ)的纯化工艺。基于FⅧ和介质孔径的尺度比及其对蛋白质活性影响的分析,设计了以超大孔离子交换制备色谱为核心步骤的新型分离纯化工艺。分别进行超大孔离子交换色谱与传统离子交换色谱的条件优化,并对优化工艺所得产品进行了活性检测(底物显色法)和纯度检测(高效凝胶过滤和凝胶电泳)。结果表明,超大孔介质结构不但可以有效地保护蛋白质大分子结构,而且能够大幅度地提高制备色谱的传质速率,从而得到具有高凝血活性的FⅧ产品。FⅧ在超大孔制备色谱过程中的回收率(85%)比传统离子交换制备色谱高4～5倍,产品比活高达154 IU/mg。此外,还研究了超大孔介质的再生程序,采用5个柱体积的1 mol/L NaOH低流速清洗色谱柱,保证了色谱工艺的稳定性。本纯化工艺步骤简单,重现性好,易于放大生产。

应用高效离子交换色谱快速分离定量不同致病力的青枯菌

应用高效离子交换色谱和激光光散射仪在线检测，快速分离定量不同致病力的青枯菌。青枯菌经过高效离子交换色谱分离得到3个特征峰，通过2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）平板鉴定和采用剪叶法回接番茄组培苗感染试验，发现这3个色谱峰所对应的青枯菌在致病力方面存在差异；其中峰3组分的致病力最强，峰1组分的致病力最弱。通过对青枯菌进样量与激光光散射仪的响应信号（峰面积）之间的线性关系研究，发现当青枯菌进样菌数为9×10^6～9×10^8时，菌数与色谱峰面积之间呈现出良好的线性关系，相关系数r=0．99。该项应用研究为不同致病力青枯菌的快速定量提供了一种新的分析方法。

连续环状离子交换色谱分离技术

本文介绍了一种新型制备色谱分离技术──连续环状离子交换色谱ＣＡＣ，建立了二维稳定连续环状离子交换色谱的数学模型。在一定条件下经过适当转化，二维稳态ＣＡＣ过程可转化为一维非稳定色谱过程。分别改变ＣＡＣ进料浓度、进料流速及冲洗流速等操作条件，测定了ＣＡＣ对果葡糖的分离性能。同时，用固定床线性色谱理论对ＣＡＣ进行预测，其预测值与实验结果较好地相吻合。实验得出，连续环状离子交换色谱对果葡糖具有较好的分离性能。

离子交换色谱法分离硼同位素的研究进展

综述了离子交换色谱法分离硼同位素的进展。在目前的研究方法中,主要采用强碱性阴离子交换树脂、弱碱性阴离子交换树脂和硼特效树脂作为柱填充材料,本文对于这3种树脂的优缺点进行了比较,最后对影响单级分离因子的因素进行了讨论。表明离子交换色谱法是一种极具潜力的硼同位素分离方法,具有高效节能的特点。

离子交换色谱柱上橙皮苷分离与配位反应的一体化

提出并实现了橙皮苷分离及其与Cu2+配位反应一体化的新设想,并借助离子交换色谱、紫外可见光谱、X-射线衍射、傅立叶红外光谱和核磁共振等分析手段探讨其作用机理.结果表明,在离子交换色谱柱上能有效实现配体分离与配位反应的一体化,制备高生物活性中药配合物新药.其反应机理在于树脂相中软碱橙皮苷与溶液相中交界酸Cu2+间存在库仑力,容易发生配位反应,配体的分子状态和疏水状态因Cu2+对橙皮素的"集中效应"和芸香二糖对橙皮素的"包埋效应"而改变,故再生剂阴离子易穿过能斯特层与橙皮苷交换,并因电子云重叠而排斥橙皮苷至液相中,从而有助于分离、反应一体化.

大米肽中压离子交换色谱分离及其免疫活性评价

为进一步提高经过DA201-C型大孔吸附树脂脱盐、40%乙醇梯度洗脱的大米免疫活性肽RPHs-A3组分的纯度和免疫活性,采用中压离子交换色谱对其进行进一步分离纯化,并对分离得到组分的免疫活性进行了评价。结果表明,采用WorkBeads 40Q强阴离子交换树脂、2.6cm×40cm色谱柱对RPHs-A3组分进行分离的最佳条件为:上样浓度30mg/mL,上样量5 mL,起始缓冲液A为pH 9.0的0.01mol/L Tris-HCl,洗脱缓冲液B为含1 mol/L NaCl的pH 9.0、0.01 mol/L Tris-HCl,上样、洗脱流速分别为1,10mL/min。共收集到5个组分,其中RPHs-A3-B3组分在MTT试验和小鼠巨噬细胞脂多糖(LPS)炎症模型中皆表现出较高免疫活性,对RAW264.7细胞具有显著增殖作用,其SI值为1.315;且对炎症模型中细胞内NO释放量具有显著抑制作用(P<0.05),抑制率为8.28%。采用中压离子交换色谱能有效地对RPHs-A3组分进行分离纯化,使SI值从1.273提高到1.315,且对细胞内NO释放量具有显著抑制作用。

离子交换色谱在蛋白质分离中的应用

离子交换色谱法是生物工业下游技术领域常用的分离纯化目的产物的手段。从色谱填料、色谱柱的选择和样品处理等方面对离子交换色谱在蛋白质分离纯化中的分离策略进行总结,并列举成功的分离案例。

青枯雷尔氏菌特征菌株高效离子交换色谱快速分离条件的优化

建立了高效离子交换色谱和紫外检测系统快速分离青枯雷尔氏菌的细菌色谱方法。通过比较青枯雷尔氏菌悬浮在哌嗪-HCl缓冲体系和双蒸水后的菌体数变化及细胞形态变化,分析该缓冲液对青枯雷尔氏菌生长活性及细胞表面特性的影响。结果表明,青枯雷尔氏菌悬浮在平衡缓冲液、洗脱缓冲液和双蒸水中的菌体数量无明显差异,分别为6.467×10~9、6.267×10~9和6.233×10~9cfu/mL。透射电镜观察发现,3种溶液处理后,青枯雷尔氏菌均保持完整的细胞结构。研究了缓冲液pH值、流速及菌体细胞浓度对青枯雷尔氏菌色谱分离效果的影响,确定青枯雷尔氏菌的最佳色谱分离条件为:缓冲液pH值为8.0,流速为2 mL/min,菌体浓度大于1.0×10~8cfu/mL且小于1.0×10^(10)cfu/mL。该分离条件缩短了分离时间,提高了分离效率,为快速分离青枯雷尔氏菌提供了一种有效的手段,同时也为细菌等微生物的分离提供了新途径。

在高效离子交换色谱上蛋白质累加进样分离法的研究

研究了离子交换色谱上的累加进样法，并用选择性累加进样法在ＳＣＸ－６柱子上纯化了尿激酶粗品，结果较好。

离子交换色谱法对肌肉中钙激活酶分离纯化的研究

试验通过离子交换色谱法对肌肉中钙激活酶(Calpain)进行定量分析研究,确定了Calpain粗提液制备工艺。对Calpain粗提液进行全波长紫外扫描说明276～280nm处有一个吸收高峰。应用DEAE离子交换层析对Calpain进行纯化,用0～500mmol·L-1NaClTris-HCl进行离子强度线性梯度洗脱,在280nm波长下测定洗脱液的光吸收值,洗脱得3个蛋白峰,μ-Calpain和m-Calpain分别在NaCl为130～180mmol·L-1和260～300mmol·L-1时洗脱下来,钙激活酶抑制蛋白(Calpastatin)在NaCl为70～110mmol·L-1时洗脱下来。Calpain分子量为110000u,通过电泳试验表明,本检测结果提取液正好在分子量约为110000u处有一条清晰的带,说明所得提取物为Cal-pain,而且纯度较高。

离子交换色谱法分离铬(Ⅲ)阳离子配合物的研究

利用阳离子交换树脂分离铬(Ⅲ)阳离子配合物,对洗脱剂、树脂(001×7和D001)进行了选择,并对洗脱剂浓度、流量、温度等因素进行考察,最后将分离出来的3种铬(Ⅲ)阳离子配合物进行可见光谱的测定,结果与文献提供的数据相吻合。结果表明,使用D001大孔阳离子交换树脂以及采用0.1,0.5,2 mol/L的高氯酸来洗脱和分离3种铬(Ⅲ)阳离子配合物的效果较好。该研究在制取、提纯无机盐的高纯化合物以及配离子的分离、鉴定方面有一定的参考价值。

离子交换色谱法分离纯化胸腺肽α_1的工艺研究

通过对胸腺肽α1的分离纯化,提高胸腺肽α1的纯度,确定简单可行的纯化工艺技术。将QAE Sephadex A-25和D208、D301、717等阴离子交换介质进行静态吸附实验,确定最适离子交换介质;通过L(933)正交试验对流速、填料高度及进样浓度进行优化,确定最佳分离条件。以QAE Sephadex A-25作为填料介质吸附胸腺肽α1,在流速60 cm/h,填料高度50 cm,进样浓度8 mg/mL条件下,胸腺肽α1纯化效果理想,经HPLC测定,得到纯度达24.596 6 mg/mL的胸腺肽α1,质量分数达12.03%,比市场上销售的胸腺肽中Tα1含量(质量分数0.6%～1.0%)高出近10倍。

连续离子交换色谱分离维生素C和古龙酸

通过维生素C和古龙酸的分离试验对影响连续离子交换色谱工作效果的主要参数进行了分析,结果表明,影响连续离子交换色谱工作效果最主要的因素为步行速度、树脂柱的进料量及解析剂的用量。

分离蛋白质的高效离子交换色谱填料的研究（Ⅳ）──强阴离子交换色谱填料的合成及应用

含环氧基的硅胶与二乙胺或聚乙烯亚胺反应，其产物再与碘甲烷或氯化苄反应，得到含季铵离子的强阴离子交换色谱填料。该填料可用于蛋白质和生物工程产品（如基因重组人干扰素γ、粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子和人绒毛膜促性腺素等）的分离纯化。其中，环氧基硅胶与二乙胺加成后再用氯化苄季铵化的产物是较好的强阴离子交换色谱填料。

离子交换色谱分离蛋白质的新进展

综述了离子交换色谱在蛋白质分离方面的新进展。参考文献100余篇。

高效离子交换色谱法分离和测定氯溴碘

用国产高效离子交换色谱仪及国产阴离子交换树脂研究了分离Cl^(-)、Br^(-)、Ⅰ^(-)的条件,以硝酸钠为洗脱液,在三十五分钟内完全分离了上述三种离子。进行了一些样品的定量测定。用无换向阀的予柱富集测定了去离子水中ppb级的Cl^(-)。从软硬酸碱理论的观点讨论了Cl^(-)、Br^(-).Ⅰ^(-)的色谱行为,得出了用结构参数及实验条件估算分配系数的经验式:1gD=0.24φg[B]-1g[B]+0.49φ+0.61。

高效离子交换膜色谱介质制备及其对蛋白质的分离

制备了一种以纤维素膜为基质,以二乙胺为配基的高效液相离子交换膜色谱介质,并考察了不同柱长、不同洗脱梯度、不同流速下其对几种标准蛋白的分离情况.与高效液相柱色谱相比,这种高效液相膜色谱柱可以更快速的达到蛋白质的分离.即使在较高流速下,柱压仍较低.实验表明,这种高效液相膜色谱柱适合于蛋白质的快速分离.

离线pH梯度-强阳离子交换色谱法分离肽段混合物

复杂肽段混合物的有效分离是高覆盖率地鉴定蛋白质混合物的前提。Shotgun蛋白质组学研究通常采用二维液相色谱(强阳离子交换色谱-反相色谱)分离后接串联质谱检测的方法。但由于离子交换色谱体系中含有高浓度的盐,使得在线分析的难度较大;而在离线分析时,也常因需要对高盐组分进行脱盐处理而易引起样品损失。因此,该文尝试用pH梯度替代盐梯度,实现pH梯度-强阳离子交换色谱方法应用于复杂肽段混合物的分离。通过对缓冲体系pH值的计算,优化了乙酸-乙酸铵体系线性pH梯度配合盐梯度的离子交换色谱方法,以及柠檬酸-氨水体系线性pH梯度的离子交换色谱方法。将这两种方法应用于牛血清白蛋白酶切产物的分离取得了与常规强阳离子交换色谱相似的分离效果。乙酸-乙酸铵体系采用的是低浓度的可挥发性铵盐,采用真空冻干的方法可以有效除盐,基质辅助激光解吸质谱靶上自然挥发也可以达到较好的脱盐效果,简化了常规方法繁琐费时的脱盐步骤及避免了由此造成的样品损失。柠檬酸-氨水体系采用pH梯度洗脱替代盐梯度洗脱,大大降低了体系中的盐浓度。这两种方法在复杂体系蛋白质组研究的样本预分离中具有较好的应用前景。

交变电场下离子交换色谱分离过程

以牛血清白蛋白在阴离子交换剂DEAE -SepharoseFastFlow上的吸附和解吸过程为例 ,考察了交变电场下离子交换色谱过程的吸附和洗脱过程及其传质特性 .结果表明 :在本文实验条件下 ,交变电场电流强度的变化对离子交换吸附平衡无显著影响 ,而外加电场在介质孔内所产生的电渗流可加速待分离组分进出固相介质的传递过程 ,显著提高色谱填充床的动态吸附容量 。