白蚊伊蚊经卵传递登革2型病毒的实验研究

目的证明白蚊伊蚊亲代能够经卵传递登革2型病毒给子代,并且在传递过程中病毒毒力呈逐渐增强趋势。方法采用套式PCR分批检测感染雌蚊的子一代至子四代卵内登革病毒结合C6/36细胞培养分离病毒及TCID50法滴定病毒滴度。结果白蚊伊蚊能经卵传递DEN-2,至少可传四代以上;且在传代中病毒毒力有增强的趋势。结论实验证明白蚊伊蚊对登革2型病毒有较大的媒介效能,且在维持登革病毒的自然循环中起重要作用。

两种PCR方法检测白纹伊蚊体内登革热2型病毒的比较研究

目的比较TaqMan MGB探针实时聚合酶链反应(TaqMan MGB Real-time PCR)和巢式反转录聚合酶链反应(巢式RT-PCR)检测白纹伊蚊体内登革热病毒(Dengue virus,DV)的敏感性差异,建立一种敏感、特异、重复性好的DV鉴定方法。方法在实验室使雌性白纹伊蚊人工感染Den-2,在50只/组情况下,设不同的感染蚊虫浓度(只/1000μl),利用TaqMan MGB Real-time PCR和巢式RT-PCR检测,根据荧光信号和电泳判断结果。结果二步法TaqMan MGB Real-ti me PCR可检测到标本中感染蚊虫的最低浓度为3只/1000μl,一步法TaqMan MGB Real-ti me PCR和巢式RT-PCR可检测到标本中感染蚊虫的最低浓度为5只/1000μl。结论二步法TaqMan MGB探针检测白纹伊蚊体内的DV敏感度高,特异性好,快速、科学,是白纹伊蚊携带DV指数较理想的监测方法。

不同地理株埃及伊蚊经口接种登革2型病毒的感染性研究

目的 研究海南、广东、台湾和印尼Baro等 4个地理株埃及伊蚊对登革 2型病毒的感染情况。方法 分别用鼠血和猪血配制不同病毒滴度的病毒混悬液经口接种埃及伊蚊 ,间接免疫荧光检测蚊脑液病毒抗原。结果 用鼠血病毒混悬液时 ,印尼Baro株对登革 2型病毒的感染率与海南株、台湾株的感染率差异有显著性 (海南株 :P =0 .0 0 79<0 .0 1;台湾株 :P =0 .0 116<0 .0 5 ) ,与广东株的感染率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,随着病毒滴度的下降 ,各株埃及伊蚊对病毒的感染率呈明显下降趋势 ;鼠血和猪血各株饱血雌蚊经口接种登革 2型病毒的感染率差异无统计学意义 (χ2 =1.63 2 0 ,P =0 .2 0 14 >0 .0 5 )。结论 不同地理株埃及伊蚊对登革 2型病毒易感性存在差异。

白纹伊蚊经滞育卵传递登革Ⅱ型病毒的实验研究

目的 证明登革Ⅱ型病毒能否在白纹伊蚊滞育卵内存活并传至子代。方法 采用逆转录 -聚合酶链反应检测病毒 ,C6 36细胞培养分离病毒。结果 能在白纹伊蚊滞育卵内检测到病毒 ,且滞育卵解除滞育后 ,子 1代幼虫和成蚊中均检测到病毒 ,总的批阳性率为 9.6 % ,子代最低感染率为 1∶2 94.3 ;第一个生殖营养周环子代未分离到病毒 ;第二、三生殖营养周环子代间最低感染率差异无显著性 ( χ2 =0 .0 1,P >0 .0 5 )。结论 试验证明登革Ⅱ型病毒能在白纹伊蚊滞育卵内存活并传至子代。

Taq Man MGB探针实时聚合酶链反应检测白纹伊蚊体内登革病毒

目的初步研究TaqManMGB探针实时聚合酶链反应(TaqManMGBRealtimePCR)检测白纹伊蚊登革病毒的敏感性,建立一种敏感、特异、重复性好的登革病毒(Denguevirus,DV)鉴定方法。方法在实验室使雌性白纹伊蚊人工感染Den2型病毒,设不同的感染蚊虫浓度(只/500μl或只/1000μl)和不同的分组方法(不加未染毒的蚊虫、分别用未染毒的实验室饲养的雌性白纹伊蚊补加到每份标本10、25、50只/组),利用一步法和二步法TaqManMGBPCR检测,根据荧光信号判断结果。结果二步法TaqManMGBPCR可检测到标本中感染蚊虫的最低浓度为2只/500μl和3只/1000μl,一步法TaqManMGBPCR可检测到标本中感染蚊虫的最低浓度为5只/500μl,蚊自身的RNA对登革病毒RNA的检测敏感性并无明显的影响。结论TaqManMGB探针检测白纹伊蚊体内的DV敏感度高,特异性好,是白纹伊蚊携带登革病毒指数较理想的监测方法,标本较好的处理方法为500μl标本处理液研磨20～30只/组,TaqManMGBRealtimePCR最好采用二步法。

登革Ⅱ型病毒感染Balb/C实验小鼠的研究

目的 :探讨Balb/C小鼠作为实验动物模型感染登革病毒的情况。方法 :小鼠腹部皮下多点注射接种大剂量登革病毒后在一定时间内检测血清病毒、抗体及腹腔巨噬细胞、脾细胞登革病毒感染情况。结果 :Balb/C实验小鼠接种感染登革病毒以后能产生 1～ 2d病毒血症 ,接种后第 4d血清中即可检测到特异性抗体 ,说明在登革病毒感染早期即产生可检测到的特异性抗体 ,而腹腔巨噬细胞在接种后前 1～ 2d登革病毒感染率较高 ,但下降很快 ,第 4d以后感染水平很低 ,小鼠脾细胞登革病毒感染率极低 ,几乎检测不到阳性。结论

埃及伊蚊对登革Ⅱ型病毒感染Balb/C实验小鼠的增强

以Balb C小鼠为实验动物 ,探讨了埃及伊蚊Aedesaegypti唾液对登革病毒感染宿主的影响。结果显示 ,在皮下接种剂量相同的情况下 ,如果Balb C实验小鼠预先被一定数量的埃及伊蚊叮咬以后 ,实验小鼠感染病毒的程度有所提高 ,血清中的抗体滴度明显降低 ,腹腔巨噬细胞感染登革病毒的阳性率及感染的时间动态曲线也有明显差异 ,感染高峰期延迟。这些说明实验小鼠被媒介蚊虫叮咬以后变得相对容易被登革病毒感染 ,可能是媒介蚊虫叮咬小鼠时分泌的唾液对宿主的免疫反应系统有一定作用。因此可以初步肯定埃及伊蚊在登革病毒的感染传播过程中 ,影响了Balb C实验小鼠的免疫功能 。