广金钱草全长转录组测序分析

目的:获得广金钱草Desmodium styracifolium(Osb.)Merr.全长转录组数据,深入挖掘其功能基因。方法:采用PacBio Sequel测序平台,对广金钱草的根、茎、叶3个部位混合样品进行全长转录组测序及分析。结果:共获得转录本140069条,N50长度为1542 nt,其中118906个(84.89%)转录本被成功注释。非冗余蛋白(NR)数据库注释中,与广金钱草最相近的物种是豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn;真核生物相邻类的聚簇(KOG)数据库注释中,比对到一般功能预测的转录本最多,有18064个;基因本体(GO)数据库注释中,86459个转录本分布于生物学过程、细胞组成和分子功能三大类45个功能组;京都基因与基因组百科全书(KEGG)注释中,参与广金钱草生物合成和其他次生代谢转录本3721个。在基因结构分析中,共得到74174个编码序列、3663个转录因子。简单序列重复(SSR)分析表明,40456个SSR中腺嘌呤和鸟嘌呤(AG)/胞嘧啶和胸腺嘧啶(CT)、AAG/CTT分别是二碱基、三碱基中优势重复类型。结论:获得了广金钱草全长转录本,为其后续的分子研究提供数据支持。

广金钱草中非黄酮类化学成分的研究

目的:对广金钱草中的化学成分进行研究。方法:采用硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、ODS柱、制备HPLC等色谱方法对广金钱草的醇提物进行分离纯化,再通过理化性质及波谱数据分析鉴定化合物结构。结果:从广金钱草中分离得到20个非黄酮类化合物,分别鉴定为:(+)-去氢催吐萝芙木醇(1)、(-)-loliolide(2)、β-谷甾醇(3)、水杨酸(4)、(+)-isololiolide(5)、6,7-二甲氧基-4-羟基-1-萘甲酸(6)、2,5-二甲氧基对苯二甲酸(7)、对羟基苯乙酮(8)、3-吲哚甲醛(9)、香草酸(10)、异香草酸(11)、对羟基苯甲酸(12)、4,5-dihydroblumenol(13)、β-胡萝卜苷(14)、7-氧代-豆甾-5,25-二烯-3-O-β-D-葡萄糖苷(15)、广金钱草内酯(16)、12-羟基茉莉酮酸(17)、麦芽酚(18)、4,5-二甲基-3-羟基-2,5-二氢-2-呋喃酮(19)、广金钱草碱(20)。结论:其中,化合物1、2、5~9、13、15、17、19为首次从该植物中分离得到。

广金钱草的化学成分

目的研究广金钱草(Desmodium styracifolium (Osb.) Merr.)的化学成分.方法利用大孔吸附树脂色谱、硅胶色谱方法进行分离纯化;根据波谱解析、理化常数分析及文献对照进行结构鉴定.结果从广金钱草水提取物经过大孔吸附树脂的体积分数为60%的乙醇洗脱物中分离鉴定了6个化合物,分别为(3α,4β,5α)4,5-二氢3(1吡咯基)4,5二甲基2(3H)呋喃酮(Ⅰ)、水杨酸(Ⅱ)、香草酸(Ⅲ)、阿魏酸(Ⅳ)、3,4二甲氧基苯酚(Ⅴ)和乙二酸(Ⅵ).结论化合物Ⅰ～Ⅳ首次从广金钱草分离得到,其中化合物Ⅰ为新天然产物.

不同来源和部位的广金钱草中化学成分研究

目的:研究不同市场、不同产地、不同部位的广金钱草中3种化学成分含量,为广金钱草临床应用提供科学依据。方法:采用HPLC法,对不同药材市场、不同产地广金钱草地上部分、茎及叶中夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆苷的含量进行测定。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%甲酸溶液(32∶68),流速为1.0 mL/min,检测波长为272 nm。结果:叶中夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆苷的含量均高于地上部分和茎;亳州、安国、玉林、樟树、禹州5个市场地上部分及五通、中庸、宛田3个产地样品叶中夏佛塔苷含量多数均≥0.13%;异夏佛塔苷存在于地上部分、茎、叶中,异牡荆苷仅存在于叶中;玉林市场药效成分含量要优于其他市场,五通产地的药材质量要优于中庸、宛田产地。结论:广金钱草药材质量评价时,建议增加异夏佛塔苷这一指标;贮存药材时,建议减少贮存时间、保持药材完整性;叶是广金钱草3种化学成分的主要富集部位。

广金钱草多糖抗氧化活性研究

目的研究广金钱草多糖的抗氧化活性。方法采用分光光度法研究了广金钱草多糖提取物的体外抗氧化作用,建立1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH自由基)、超氧阴离子自由基、还原力等几种不同的体外抗氧化模型,以此来评价该多糖的抗氧化活性。结果广金钱草提取纯化后的多糖样品中纯多糖含量达63%,当DPPH自由基清除率为50%时样品的浓度(IC50)为0.115 mg·m L-1。伴随着多糖浓度的升高其清除自由基能力逐渐增强,广金钱草多糖还原力的大小与其浓度大小成正比。结论广金钱草多糖表现出较高的抗氧化性,其浓度与抗氧化活性呈现一定的量效关系。

广金钱草总黄酮胶囊对照品的研究(英文)

目的:为广金钱草总黄酮胶囊制备含量测定用化学对照品。方法:采用常规柱层析结合制备型HPLC分离目标化合物,通过HPLC法测定其纯度和稳定性及其在胶囊中的含量,根据光谱数据(UV、IR、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、1H-13CCOSY、1H-1HCOSY、1D-HOHAHA、1D-NOE、HMBC)鉴定其结构。结果:分离到的化合物被鉴定为异夏佛塔苷,其纯度在99以上,常温条件下放置3个月内稳定,其溶液在常温条件下8h内稳定。异夏佛塔苷在广金钱草总黄酮胶囊中含量为3.0以上。结论:该化合物可作为广金钱草总黄酮胶囊的含量测定用对照品,并且能从广金钱草中分离得到。

基肥对中药材广金钱草植株生长的影响及效益分析

为了探讨施基肥对广金钱草植株生长、产量及效益的影响。采用施用鸡粪和鸡粪加复合肥进行广金钱草种植试验。结果表明:施基肥的处理与对照相比,植株主茎平均多长6.2～21.3 cm、分枝多3.9～13.5条,药材产量每平方米增产最少为82.7 g,最多达422.4 g;以每平方米施鸡粪6 kg的处理效果最佳,植株主茎最长、分枝最多、产量最高,投入产出比最高(1∶5.28)。基肥能极大促进广金钱草植株生长和增加分枝,显著提高药材产量及效益。

不同产地广金钱草药材质量研究

目的对不同产地广金钱草质量进行研究。方法采用薄层色谱法,以异牡荆苷及邻羟基苯甲酸为对照品,石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯-甲酸（体积比3∶1∶0.2）及甲苯-乙酸乙酯-甲酸（体积比1∶8∶1）为展开剂,对不同产地的广金钱草及其混淆品进行对比研究;分别采用柱色谱-紫外分光光度法、高效液相色谱法、紫外-可见分光光度法测定不同产地广金钱草药材中总黄酮、异牡荆苷、总多糖的含量。结果广东阳春产和广东化州产广金钱草薄层色谱与其他产地所产的广金钱草差异较大,广金钱草与其混淆品的薄层色谱差异很大;各地广金钱草异牡荆苷的含量在0.1~0.8 mg.g-1范围内,总黄酮含量在1%~3%范围内,总多糖的含量在2%~6%范围内。结论该薄层色谱法可用于广金钱草的鉴别,大部分产地的广金钱草药材各成分含量有显著性差异。

广金钱草营养体的化感作用

采用室内生物测定的方法,研究了广金钱草根、茎叶的水浸液对萝卜、白菜、广金钱草种子萌发和幼苗生长的化感效应。结果表明,广金钱草根、茎叶水浸液对萝卜、白菜种子的萌发率均呈抑制效应,且随浓度的增加抑制效应增强;对广金钱草种子发芽率呈现促进效应,但各浓度处理的差异不显著。而广金钱草根部和茎叶水浸液对萝卜、白菜胚根和茎的生长呈促进作用,且随处理浓度增加促进作用增强。对广金钱草根部呈现低浓度促进高浓度抑制的现象,而对其茎的生长呈现促进作用。广金钱草营养体具有一定的化感作用,但对其自身种子萌发和根、茎的生长无抑制作用。

广金钱草田间育苗影响因素研究

【目的】观察广金钱草在田间育苗过程中,播种季节和播种密度对其种子发芽率和生长状况的影响。【方法】对种子的品质进行检验后,在3-10月间进行播种试验,比较不同播种时间和密度对种子发芽率及生长状况的影响。【结果】以广东平远为种植基地,3-10月间种子的发芽率均比较稳定,苗长势良好;随着播种密度的增加,种子发芽率减少,在0.5-1 g/m^2范围内,发芽率达80%。【结论】广金钱草可在春、夏、秋3季播种,以秋季最佳,其适宜的播种密度为0.5-1g/m^2。

广金钱草抑制一水草酸钙结晶生长有效成分的研究

本文对广金钱草多糖类进行了提取和精制,并通过电导法观察精制前后对一水草酸钙结晶生长的抑制作用,发现精制后比精制前的作用更强。

广金钱草规范化栽培技术

目的规范广金钱草种植全过程。方法以国家食品药品监督管理局发布的《中药材生产质量管理规范》(GAP)为指导原则,控制影响广金钱草质量的各种因子。结果确定广金钱草的规范化种植规程。结论规范化种植可使广金钱草药材达到“真实、优质、稳定、可控”的目的。

广金钱草红外指纹图谱共有峰率和变异峰率双指标序列分析方法

目的尝试建立一种符合广金钱草自身特点的红外指纹图谱分析方法。方法利用共有峰率和变异峰率2个指标,以不同广金钱草样品的红外指纹图谱为参比,计算出所测样品相对于参比品的共有峰率和变异峰率,并按照共有峰率的大小建立不同的序列。结果该方法可初步区分不同产地的广金钱草。结论利用共有峰率和变异峰率双指标序列分析方法可以对2个或多个广金钱草样品进行方便的鉴别。

尾巨桉化感作用对广金钱草化学成分的影响

【目的】研究尾巨桉Eucalyptus urophylla×Eucalyptus grandis对广金钱草Desmodium styracifolium(Osb.)Merr.药材化学成分的影响,探索尾巨桉-广金钱草复合经营模式的可行性。【方法】在试验田中,以不同类型和重量的尾巨桉落叶铺盖在土壤上并种植广金钱草,同时另在尾巨桉人工林中直接套种广金钱草,待药材成熟后统计其产量,并利用HPLC指纹图谱法及含量测定法检测其化学成分变化。【结果】广金钱草在尾巨桉林下种植时,产量稍有下降,但药材指纹图谱与正常种植无显著差异。【结论】广金钱草可以套种在尾巨桉人工林下。

植物生长调节剂对广金钱草扦插繁殖效果的影响

【目的】探讨不同植物生长调节剂对广金钱草扦插成活率、成活苗生根数和苗高的影响,为其繁殖育苗、补苗提供技术支持。【方法】分别用不同质量浓度的NAA(萘乙酸)、IAA(吲哚乙酸)和ABT生根粉(50%奈乙·吲乙可溶性粉剂)浸泡已木质化、老熟的广金钱草枝条6 h,以浸泡清水为对照(CK),扦插21 d后统计分析各处理广金钱草的扦插繁殖效果。【结果】经50.0 mg/L IAA和ABT生根粉处理的广金钱草枝条扦插成活率分别为85.3%和82.7%,均极显著高于CK(P<0.01,下同);50.0 mg/L NAA处理的扦插成活率为79.3%,显著高于CK(P<0.05,下同);成活苗生根数、苗高以50.0 mg/L IAA和ABT生根粉处理为优。【结论】广金钱草插条经50.0 mg/L NAA、50.0 mg/L IAA或500.0 mg/L ABT生根粉浸泡6 h,扦插后21 d的成活率及成活苗的生根数和苗高均较高,育苗时间短,节省人力物力,可作为广金钱草育苗技术措施推广应用。

基于流式细胞术和K-mer分析的广金钱草基因组大小估测

目的估测广金钱草的基因组大小,为广金钱草基因组测序提供依据。方法采用流式细胞术和全基因组调查(Genome Survey)相结合的方法预估广金钱草基因组大小和杂合度。以OTTO裂解液提取广金钱草细胞核,碘化丙啶对细胞核染色,以番茄为内参,运用流式细胞术预估广金钱草基因组大小;通过第二代高通量测序技术对广金钱草基因组进行低覆盖度评估,利用生物信息学方法估算GC含量、杂合率、重复序列等。结果流式细胞术估算广金钱草的基因组大小为(654.80±11.88)Mbp,经Genome Survey测定获得广金钱草有效数据99.18 Gb,总测序深度约为153.86×,估计基因组的大小约644.62 Mbp,杂合率约0.07%,重复序列含量约59.71%。结论两种方法测得广金钱草基因组大小基本一致,基因组大小适中,杂合度较低,适合进一步的结构基因组研究。

EMS诱变广金钱草突变体库的构建

目的:利用甲基磺酸乙酯(EMS)溶液诱变处理广金钱草种子,对M_1和M_2代群体单株在茎、叶、分枝等表型变异进行观察记录,并鉴定和筛选突变体。方法:以广金钱草种子为材料,用不同EMS浓度的磷酸缓冲液(0%,0.5%,0.6%,0.7%,0.8%)分别处理广金钱草种子4、8、12 h,使其发生诱变,得到半致死剂量和处理时间,再用该半致死剂量和处理时间创建突变材料,观察并统计诱变后植株表型性状的变异。结果:EMS诱变广金钱草种子的半致死剂量浓度为0.6%,处理时间为4 h。初步鉴定了M_1代658个单株和M_2代1 131个单株的形态学性状,共获得759份发生一个到多个性状变异的突变株,主要包括叶、株高、分枝数、株型以及其他性状变异。结论:初步构建了EMS诱变广金钱草突变体库,得到了对种植生产有利的变异性状,为优良品种选育提供了基本材料。

广金钱草中槲皮素的定性分析及其与β-乳球蛋白相互作用的电喷雾质谱研究

采用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(HPLC-Q-TOF-MS)定性分析了广金钱草中的黄酮类物质,研究了β-乳球蛋白与广金钱草中槲皮素的相互作用,通过直接计算法得到了不同浓度比的β-乳球蛋白与槲皮素的结合数目和结合常数。结果表明,槲皮素能与β-乳球蛋白形成稳定的复合物;单个β-乳球蛋白结合槲皮素的数目随着浓度比的增大而增加,最多为6个,结合常数数量级为104;在高浓度比时,槲皮素与β-乳球蛋白的结合能力比乳糖强,抑制了β-乳球蛋白与乳糖的美拉德反应,有利于提高蛋白质的活性。

广金钱草种子的化学成分和DPPH自由基清除活性研究

目的对广金钱草Desmodium styracifolium种子的化学成分及其清除DPPH自由基活性进行研究。方法采用硅胶、聚酰胺、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等色谱方法进行分离纯化,通过NMR、MS等波谱数据进行结构鉴定。比较不同极性提取物总黄酮的量及其对DPPH自由基的清除活性。结果从广金钱草种子的不同极性萃取部位中分离得到10个化合物,分别鉴定为豆甾醇（1）、邻苯二甲酸二正丁酯（2）、儿茶素（3）、苯甲酸（4）、麦芽酚（5）、3-O-乙酰基-（-）-表儿茶素（6）阿福豆苷（7）、3′-甲氧基-表儿茶素（8）、山柰酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（9）、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（10）。结论其中化合物4~6、8为首次从山蚂蝗属植物中分离得到,化合物2、3、7、9为首次从广金钱草中分离得到。广金钱草种子的各段萃取物均表现出一定的DPPH自由基清除活性。

大孔吸附树脂富集纯化广金钱草总黄酮的工艺研究

目的对大孔树脂富集纯化广金钱草总黄酮的工艺条件进行初步探索。方法采用紫外-可见分光光度法,以总黄酮吸附率、解吸率为评价指标,通过考察树脂类型、原料液质量浓度、pH值、上样体积流量、解吸溶剂、水除杂用量、最佳上样量、醇洗脱体积流量、洗脱体积及绘制树脂静态吸附平衡曲线、泄露曲线和动态解吸曲线,综合评判确定最优工艺。结果 DM-130树脂富集纯化效果较好,其对广金钱草总黄酮的适宜吸附和解吸条件为:吸附原料液质量浓度为8.0 mg/mL,pH值为4.0～6.0,上样体积流量为3 BV/h;解吸先用4 BV的水除杂,再用50%乙醇洗脱,洗脱剂用量为5 BV,体积流量为2.0 BV/h。结论 DM-130树脂可用于广金钱草总黄酮的富集纯化,该方法具有操作简单、成本低廉、精制效果突出等特点,具有较高的工业生产应用价值。