甘蓝DH株自交后代2个变异株群差异性分析

以甘蓝F1游离小孢子1个胚状体再生植株自交后代分离出DH12-8-Z型和DH12-8-T型2个变异株群为材料,分析2个株群在幼苗期、莲座期、结球期的植株形态,叶片组织结构,光合色素质量浓度和生理生化指标的差异性。结果显示:(1)形态特征上DH12-8-T型植株比DH12-8-Z型植株幼苗矮小、叶片多、叶柄短缩、节间距小、叶片小而厚、边缘翻卷呈"托盘型";结球植株矮小、外叶簇生严重、叶片褶皱、叶中脉变粗、叶色灰绿、叶球小且紧实。(2)相比DH12-8-T型植株幼苗叶片叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素和类胡萝卜素质量浓度较低;幼苗叶片组织表皮细胞较小且排列整齐紧凑,海绵组织多呈椭圆或近椭圆形,细胞明显较大,叶脉中维管束组织发达,特别是木质部导管明显粗且多。(3)DH12-8-T型植株比DH12-8-Z型植株可溶性糖和可溶性蛋白质质量分数及POD和CAT活性均较高;莲座期SOD活性较低,莲座期和结球期MDA质量摩尔浓度较低。研究表明,DH12-8-Z型植株和DH12-8-T型植株在形态和生理生化等方面都存在显著差异,两者可能是基因型不同的植株群体。

大肠杆菌DH5a菌株高效电击转化条件的优化

为探索大肠杆菌DH5a高效电击转化条件,通过对电击转化条件中细胞生长状态、DNA加入量、感受态细胞体积、电场强度、速冻和恢复时间等关键因素进行优化,筛选出大肠杆菌DH5a高效电击转化条件。结果表明:大肠杆菌在细胞生长状态OD_(600)值为0.6时制备感受态细胞,按每管50μL体积分装、-80℃乙醇速冻后,加入10 pg pUC 19质粒DNA,在20 kv·cm^(-1)电场强度、电容25μF、电阻200Ω条件下电击转化,转化后恢复培养60 min,转化效率达10~(10) cfu·μg^(-1) DNA以上水平,可满足基因文库构建、抗体库筛选等试验需求。

大肠杆菌DH5α菌株感受态制备及转化率变化研究

通过氯化钙法制备大肠杆菌DH5α菌株感受态,讨论了不同保存温度和保存时间对感受态转化率的影响。结果表明,在4℃下保存,8h达到最高转化率;在-20℃和-70℃下保存,均为48h达到最高转化率。通过氯化钙法制备的DH5α菌株感受态细胞,在-20℃条件下简单保存,20d内完全可以满足一般转化研究的要求,不需要复杂的甘油、液氮处理及超低温要求。

四脊裸孢壳Dh菌株的生物学特性及对沙枣尺蠖的防治效果

从沙枣尺蠖上分离到一真菌菌株Dh ,经鉴定为四脊裸孢壳。该菌喜温 ,生长温度范围为 1 5～ 4 5℃ ,最适温度为 30℃ ;病菌在pH4～ 8之间生长良好 ;孢子的萌发温度范围为 8～4 5℃ ,以 30℃为最适 ;在黑暗、日光灯、黑暗与散射光交替、自然光条件下 ,该菌的生长与产孢情况无明显的差异 ;该菌能利用葡萄糖、蔗糖等多种碳源 ,在可溶性淀粉、甘露醇和麦芽糖上生长量最大 ;可利用多种氮源 ,尤其对尿素、氯化铵的利用最好。Dh经纯化培养后 ,室内对沙枣尺蠖致死率达 86 4 2 % ,田间致死率达 82 1 3%。

光周期对沙枣尺蠖病菌(Dh菌株)离体培养的影响

研究了光周期对沙枣尺蠖病菌(Emericella quadriclineata)Dh菌株菌丝生长及产孢量的影响。结果表明,光照对液培菌丝生物量和平板培养产孢有明显的影响,长光照有利于菌丝生长,菌丝生物量明显高于短光照和全黑暗;培养4 d菌丝生物量最大,其中以18 h光照与6 h黑暗交替菌丝生物量最大。光照对Dh菌株平板产孢具有一定的促进作用,连续光照与各温度组合的累积产孢量显著高于连续黑暗下各温度组合,以全光照25℃培养7 d产孢量最高,第3天至第5天时增长率达到顶点;30℃和35℃下无论是光照还是黑暗条件均不适合产孢,其产孢速率呈持续下降状态。紫外光对Dh菌株生长的影响程度与照射时间有关,在供试范围内,照射时间越长菌落生长越慢。

虫生菌四脊裸胞壳Dh菌株生理特性、致病性和分子生物学研究

四脊裸胞壳（Emericella quadriclineata）Dh菌株为虫生真菌,对沙枣尺蠖（Apocheima cinerarius）、苜蓿钩麦蛾（Aproaerema anthylidella）等鳞翅目害虫的幼虫具较强的致病性,对控制草地和林业生态系统的害虫种群数量。

甘蓝型油菜DH缺瓣变异株的无性繁殖及缺瓣特性

经游离小孢子培养并加倍获得的甘蓝型油菜 95Z192的DH植株群体中的 1株缺瓣变异株 ,于盛花期取其幼嫩花序轴进行无性繁殖后 ,得到 10个株系的 12 2个植株。移栽于大田 ,于初花期逐株统计主花序上每朵花缺瓣的结果显示 ,此种变异株的缺瓣性状可稳定遗传 。

初始接种量对四脊裸胞壳Dh菌株菌丝生物量的影响

在温度（27±1）℃和光照12L：12D的条件下，用PD培养液对四脊裸胞壳（Emericella quadriclineata（Thom＆Raper）Bejami）Dh菌株进行液体振荡培养（100r／min），测定不同接种量和液体培养时间对菌丝生物量的影响．结果表明：将含干菌丝生物量为23．8mg／mL的母液按1％～15％（V／V）的比例接种后，培养60h以上，1％～15％各接种量处理均能产生21mg／mL以上的菌丝生物量．通过逻辑斯蒂生长模型拟合，发现该菌在上述液培条件下的最大菌丝生物量为36．7mg／mL左右．

甘蓝小孢子单倍体植株加倍技术探讨

【目的】比较甘蓝单倍体植株(H植株)茎生叶及其愈伤组织的秋碱处理时间及愈伤组织大小对再生植株加倍效果的影响,筛选加倍效果最佳的秋碱处理时间与合适的外植体,为扩大甘蓝小孢子双单倍体植株(DH株)群体及提高甘蓝小孢子培养效率奠定基础。【方法】以3个甘蓝H植株(H10-23,H10-3和H10-5)的茎生叶为试材,用2.0mg/L秋碱溶液浸泡处理H植株叶片外植体及其愈伤组织以获得再生DH植株,设置15,30和60h3个处理时间,比较分析秋碱处理叶片外植体和愈伤组织的时间对加倍效果的影响;同时用2.0mg/L秋碱溶液处理大(直径≥1cm)、中(1cm>直径≥0.5cm)、小(直径<0.5cm)3种类型的愈伤组织30h,比较愈伤组织大小对加倍效果的影响。【结果】2.0mg/L秋碱处理甘蓝单倍体植株叶片外植体30h,可获得44.80%的平均再生DH株加倍率;2.0mg/L秋碱处理愈伤组织30h,可获得58.13%的平均再生DH株加倍率;2.0mg/L秋碱处理中等大小的愈伤组织30h,可获得51.11%的再生DH株加倍率。【结论】用2.0mg/L秋碱处理甘蓝H植株茎生叶及其愈伤组织30h,可获得较高比例的DH株。

pqq基因簇在Escherichia coli DH5α中表达及对其溶磷促生的影响

为丰富植物促生菌的构建模式,本文以Escherichia coli DH5α为供试菌株,通过遗传转化,将水生拉恩氏菌(Rahnella aqautilis)HX2的pqq基因簇导入E.coli DH5α,获得DH5α(pqq)菌株,采用平板溶磷、钼锑抗比色法、HPLC法、温室盆栽等试验分析研究DH5α(pqq)菌株溶磷产酸促生作用机理。DH5α(pqq)菌株与E.coli DH5α相比,溶磷圈直径、有效磷浓度增加,溶解矿质磷的能力显著增强;有机酸代谢显著增加,以产葡萄糖酸为主。DH5α(pqq)处理与对照相比对玉米株高、茎鲜重、植株鲜重、茎干重、植株干重、全磷、土壤有效磷分别提高了5.2%、30.0%、32.5%、18.5%、7.7%、30.8%和24.0%,并呈显著性差异(P<0.05)。表明来自HX2菌株的pqq基因簇通过异源表达具有活性,能够实现对溶磷促生的遗传改造。

提高重组质粒转化E. coli DH5α方法的研究

研究了质粒载体和外源DNA的浓度、酶切体系的酶切时间以及酶切产物的链接时间对转化效率的影响。结果表明,当pUC19质粒载体的浓度为25ng/μL,外源基因λDNA的浓度为100ng/μL,酶切时间3h,且连接时间为14h时,构建出的重组质粒转化大肠杆菌DH5α效率最高。