大肠杆菌DH5a菌株高效电击转化条件的优化

为探索大肠杆菌DH5a高效电击转化条件,通过对电击转化条件中细胞生长状态、DNA加入量、感受态细胞体积、电场强度、速冻和恢复时间等关键因素进行优化,筛选出大肠杆菌DH5a高效电击转化条件。结果表明:大肠杆菌在细胞生长状态OD_(600)值为0.6时制备感受态细胞,按每管50μL体积分装、-80℃乙醇速冻后,加入10 pg pUC 19质粒DNA,在20 kv·cm^(-1)电场强度、电容25μF、电阻200Ω条件下电击转化,转化后恢复培养60 min,转化效率达10~(10) cfu·μg^(-1) DNA以上水平,可满足基因文库构建、抗体库筛选等试验需求。