固定化酶催化合成EPA/DHA型磷脂的研究

以大豆卵磷脂和富含二十碳五烯酸(EPA)/二十二碳六烯酸(DHA)的鱼油为底物,在固定化磷脂酶A_(1)(PLA_(1))的催化作用下,制备EPA/DHA型磷脂(EPA/DHA-PLs)。考察了PLA_(1)的固定化酶用量、水用量、反应温度、底物鱼油与磷脂质量比对EPA/DHA-PLs制备的影响,并通过响应面法分析了影响EPA/DHA-PLs合成的关键因素。研究结果表明:EPA甲酯保留时间约为54.594 min,DHA甲酯保留时间约为69.317 min,原料鱼油中EPA和DHA的总量为83.27%。EPA/DHA-PLs合成的最佳反应条件为:固定化PLA_(1)的添加量为21.81%(以底物鱼油/磷脂的总质量为基准),鱼油与磷脂质量比为5.45∶1,反应温度为54.3℃,水用量为1.08%(以底物的总质量为基准)。在此条件下,EPA/DHA的最大结合率可达65.5%。固定化PLA_(1)经5次重复使用后,剩余的酶活性仍不低于52.3%。

三种不同EPA/DHA组成鱼油乳液的体外消化特性比较

探究不同二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic Acid,EPA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)组成比例的鱼油乳液的体外消化特性。制备不同EPA/DHA(5.13、2.45、1.34)比例的O/W鱼油乳液,对消化过程中粒径、ζ-电位、微观结构及小肠阶段脂肪酸的释放行为进行研究。结果表明,不同EPA/DHA比例的鱼油乳液在消化过程中的变化趋势相似,同时各乳液消化特性有所区别。具体而言,三种初始乳液均具有较高的稳定性,电荷性介于-40.02 mV和-43.77 mV,粒径主要分布于0.1~1.0μm之间。经口腔与胃阶段消化后,各体系电荷绝对值显著降低(P<0.05),乳滴中心脂质暴露,粒径呈多峰分布且主要集中于10~100μm区间。小肠阶段各组乳液粒径显著降低至8~13μm(P<0.05),游离脂肪酸(Free Fatty Acids,FFA)相对释放结果表明,EPA/DHA=5.13组乳液(103.21%)>EPA/DHA=2.45组乳液(73.54%)>EPA/DHA=1.34组乳液(62.51%),EPA与DHA相对水平是影响三种鱼油乳液消化的重要因素。该研究可为富含EPA与DHA的海洋脂类膳食摄入及鱼油递送系统的开发设计提供一定参考。

饲料中DHA与EPA比例对星斑川鲽雌鱼性类固醇激素及繁育性能的影响

为了探索饲料中DHA与EPA比例对星斑川鲽(Platichthys stellatus)雌性亲鱼繁育性能的影响,配制等氮等脂含不同DHA与EPA比例(0.65、1.33、2.12、3.08和3.92)饲料5组,每组设3重复,室内循环水系统养殖,试验周期90 d,试验结束后取亲鱼血清及性腺检测。结果表明,随着饲料DHA与EPA比值的升高,亲鱼雌二醇(E 2)呈先升后降趋势,DHA与EPA比值为1.33时,促进作用显著(P<0.05)。性腺中FSHR、StAR和芳香化酶表达量也显著高于对照组(P<0.05);添加DHA和EPA后亲鱼的绝对繁殖力显著提高,但DHA与EPA比值为1.33效果更显著(P<0.05);在DHA与EPA比值为0.65、1.33组和2.12时,雌鱼性腺中单不饱和脂肪酸的含量显著高于其他组(P<0.05),n-6多不饱和脂肪酸出现显著下降(P<0.05),n-3多不饱和脂肪酸明显上升,差异显著(P<0.05)。由此可见,饲料中添加DHA和EPA能有效促进星斑川鲽雌性亲鱼的性腺发育,DHA与EPA比值为1.33时能提高亲鱼E 2分泌,FSHR、StAR和芳香化酶表达以及单不饱和脂肪酸的吸收,增加性腺发育能量供给,促进亲鱼性腺成熟,提高繁育性能。

裂殖壶藻油提取及高浓度 EPA/DHA分离纯化工艺研究

为实现藻油中ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 PUFAs)的简单、绿色、高效分离纯化工艺,首先利用裂殖壶菌原始菌株及定向驯化菌株ALE40为原料提取油脂,通过优势性评估及细胞通透性对比二者提油效果,并通过测定油脂指标对比3种提油方法(酸解法、超声干法、超声湿法)优劣。对超声湿法提取的粗藻油采用酯交换法进行乙酯化后,联合尿素包埋法和分子蒸馏技术富集高浓度二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),对酯交换及尿素包埋工艺条件进行单因素实验优化,通过对分子蒸馏重相DHA和EPA含量测定确定分子蒸馏级数,并对纯化藻油的理化指标进行测定。结果表明:相比裂殖壶菌原始菌株,ALE40的细胞通透性明显较好,在无需干燥的情况下,超声10 min即可达到最高油脂得率(53.2%),缩短超声时间的同时提高了破壁效率;3种提油方法中超声湿法提取的藻油理化指标较好;酯交换反应最佳条件为反应温度60℃、KOH添加量3%、醇油比10∶1、反应时间0.5 h,尿素包埋最佳工艺条件为脲酯比0.8∶1、溶酯比8∶1、包埋温度4℃、包埋时间8 h;尿素包埋后的藻油经二级分子蒸馏纯化后,藻油中EPA和DHA总含量从17.40%(酯交换反应)升高到90.86%,总回收率为62.28%;得到的纯化藻油的各项理化指标均符合行标要求,且储存3个月内无沉淀,具备一定稳定性。综上,该提取分离纯化工艺全程实现试剂循环利用,且制备的藻油酸值低、无异味。

气相色谱-质谱法测定鱼油中EPA和DHA 含量的方法研究

建立气相色谱-质谱(GC-MS)法测定鱼油中EPA、DHA的含量。方法:采用安捷伦DB-FastFAME石英毛细管柱(20 m×0.18 mm×0.20μm),质谱检测器,内标法定量检测。样品经由氢氧化钠-甲醇溶液甲酯化,经离心过滤后由GC-MS法测定。结果:EPA和DHA分别在27.150~434.41μg/mL和27.244~435.91μg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(相关系数分别为0.995 9和0.997 5)。该方法EPA和DHA的检出限分别为1.530μg/g、2.312μg/g,样品平均添加回收率为96.92%~100.42%。

脂肪酶富集DHA和EPA的研究进展

综述了脂肪酶在富集DHA和EPA方面的应用 ,总结了近十年来脂肪酶富集DHA和EPA的研究状况 。

真鲷仔稚鱼微粒饲料中DHA与EPA最佳比例的研究

制备4种n-3HUFA含量相同 ,DHA和EPA含量比(m(DHA)∶m(EPA))分别为1.70∶1 ,2.00∶1,2.30∶1和2.60∶1的微粒饲料 ,探讨DHA与EPA的配比对真鲷 (Pagrusmajor)仔稚鱼生长、存活和体内相关成分的影响。30d的养殖试验结果表明 ,m(DHA)∶m(EPA)≥2.30∶1的2种微粒饲料与m(DHA)∶m(EPA)≤2.00∶1的2种微粒饲料相比 ,真鲷仔稚鱼的生长速度和成活率 ,前者明显优于后者。该比例即m(DHA)∶m(EPA)≥2.30∶1应是真鲷微粒饲料中DHA与EPA的最佳配比。养殖试验结束后 ,对仔稚鱼体内相关成分的分析结果表明 ,仔稚鱼体内DHA的含量随微粒饲料中DHA含量的增加而增大。

低温结晶富集鱼油中EPA与DHA的方法

设计低温结晶法,从鱼油脂肪酸中富集EPA和DHA。经一次分离,含量由7％～15％提高到50％～58％,经两次分离可达73％～79％。对溶剂选择和结晶条件进行了讨论。

DHA和EPA的生理功能及其应用

综述了DHA和EPA的分布、生理功能及应用；并提出了存在的问题。

硝酸银硅胶柱分离纯化蛇鲻鱼油中的EPA和DHA

采用NaOH-乙醇皂化再硫酸酸化的方法制备蛇鲻鱼油混合脂肪酸,然后用硝酸银硅胶柱色谱分离纯化EPA和DHA。结果表明:15 g硅胶与1 g硝酸银充分混合后装柱,置于5℃的恒温层析柜中,待色谱柱平衡后,上样0.75 g混合脂肪酸,然后依次用100 mL石油醚,2%,4%,8%,10%无水乙醚-石油醚溶液各100 mL进行洗脱,洗脱液流速为0.5～1.0 mL/min,收集200 mL以后的洗脱液,进行旋转蒸发,EPA和DHA的质量分数分别从4.43%和13.94%提高至21.47%及70.13%,总质量分数可达90%以上。

脂肪酶催化鱼油醇解富集EPA和DHA的研究

研究了固定化脂肪酶Lipozyme RM IM催化鱼油部分醇解反应,探讨了油醇比、酶加量等因素对反应的影响,在优化条件下,可以使鱼油中EPA、DHA的含量由26.1%升至43.0%,得率大于75%,对鱼油醇解产物进行了分子蒸馏提纯,得到了富含EPA、DHA的甘油酯型鱼油产品。

饲料DHA/EPA比率对草鱼稚鱼生长、脂质蓄积及抗氧化系统的影响

【目的】评估饲料DHA/EPA比率对草鱼稚鱼生长、脂质蓄积及抗氧化状态的影响,为完善草鱼高不饱和脂肪酸营养理论及合理进行饲料脂质的配比提供参考。【方法】将198尾草鱼稚鱼（平均体质量（17.6±1.2）g）以11尾/缸的密度随机投放于18个循环水养殖缸中,随机分为6组,进行为期38 d的饲养试验,对照组草鱼稚鱼饲喂仅可满足必需脂肪酸需求的饲料,试验组草鱼饲喂在满足必需脂肪酸需求的基础上,添加0.5%HUFA、DHA/EPA比率分别为4.93（试验Ⅰ组）,2.05（试验Ⅱ组）,1.08（试验Ⅲ组）,0.49（试验Ⅳ组）,0.21（试验Ⅴ组）的饲料。饲养试验结束后,测量试验鱼体长和体质量,采取全鱼、肌肉、肝胰脏等进行相关指标的测定和分析。【结果】试验Ⅴ组草鱼稚鱼终末体质量、相对生长率和特定生长率显著高于对照组;试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的饲料效率和蛋白质效率均显著高于对照组,各试验组之间无显著差异;试验Ⅱ和Ⅲ组肌肉粗脂肪含量显著高于对照组,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组肝胰脏粗脂肪含量无显著差异,但均显著低于对照组;对照组肝胰脏T-Aoc显著高于试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组,其余各试验组差异不显著;各处理组间肝胰脏CAT、SOD活性和MDA含量差异均不显著。【结论】添加HUFA具有促进草鱼稚鱼生长和调控体脂在组织间分配的作用,并表现出诱发氧化应激的趋势,而饲料DHA/EPA比率在4.930.21对草鱼稚鱼的生长、脂质蓄积和抗氧化状态没有显著性影响。

饲料中DHA/EPA对三疣梭子蟹肝胰腺组织结构的影响

通过在三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)卵巢发育期间投喂添加半纯化鱼油配制的含不同比例DHA/EPA(0.39、1.24、2.19、2.89)的饲料,并以投喂新鲜缢蛏作为对照,研究了不同饲料组喂养的三疣梭子蟹的肝胰腺组织学差异。结果表明,饲料中DHA/EPA能显著影响三疣梭子蟹的肝胰腺指数(HIS)和肝胰腺细胞的组成,随着DHA/EPA的升高,HSI先升高后下降,同时肝胰腺中R细胞所占比例也呈先上升后下降趋势;而B细胞所占比例随DHA/EPA升高而升高,在Diet4组达到最大值。当DHA/EPA比例为2左右(Diet3组)时,卵巢发育最好,肝胰腺指数最大,最有利于营养物质储存。

高含量DHA/EPA甘油三酯的降血脂和保肝作用的研究

研究高含量DHA/EPA甘油三酯对模型小鼠的降血脂和肝脏保护作用。雄性C57BL/6J小鼠随机分为8组,采用高脂高糖饮食建立高脂血症小鼠模型,连续饲喂高含量DHA/EPA甘油三酯15周,实验结束时分别测定小鼠血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)含量,肝脏TC和TG含量以及脂肪酸组成。结果表明,高含量DHA/EPA甘油三酯能够显著降低小鼠血清中的TC、TG和LDL-C浓度,升高HDL-C浓度,降低肝脏中TC和TG含量,有效改善肝脏脂肪酸组成。高含量DHA/EPA甘油三酯能有效改善高脂血症的小鼠的血脂和肝脂水平。

高含量DHA/EPA甘油三酯促进肝脏糖原合成及其作用机制的研究

目的探究高含量DHA/EPA甘油三酯对糖尿病小鼠肝脏中糖原合成的改善作用及机制。方法采用高脂高糖饮食诱导建立糖尿病小鼠模型。连续饲喂高含量DHA/EPA甘油三酯15周,检测其对空腹血糖、口服葡萄糖耐量、空腹血清胰岛素以及肝糖原含量的影响;采用聚合酶链反应(re-verse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测小鼠肝脏中胰岛素介导的PI3K/PKB/GSK-3β信号通路中关键基因的mRNA表达。结果高含量DHA/EPA甘油三酯能明显降低糖尿病小鼠空腹血糖水平(P<0.01 vs模型对照组),有效改善口服葡萄糖耐量(P<0.01 vs模型对照组),明显降低空腹血清胰岛素水平(P<0.01 vs模型对照组),增加肝糖原含量(P<0.01 vs模型对照组);同时提高肝脏中胰岛素受体(insulin receptor,InsR)、胰岛素受体底物-2(insulin receptor substrate,IRS-2)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(proteinkinase B,PKB)mRNA的表达(P<0.01 vs模型对照组),抑制糖原合成激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)mRNA的表达(P<0.01 vs模型对照组),且作用效果明显优于乙酯型和低含量DHA/EPA甘油三酯型鱼油。结论高含量DHA/EPA甘油三酯通过激活胰岛素介导的PI3K/PKB/GSK-3β信号通路,促进肝糖原合成,调节血糖平衡。

酶法合成富含DHA、EPA甘油三酯的研究

以甘油和PUFA乙酯为底物,通过酶催化酯交换反应合成富含DHA、EPA的甘油三酯。首先以叔丁醇为溶剂合成甘油酯混合物,优化后的条件为:选择Novozyme 435脂肪酶为催化剂,反应温度50℃,甘油与PUFA乙酯摩尔比1:3,底物在叔丁醇中的质量浓度为200 g/L,酶加量为底物质量的2%,在此条件下反应12 h后PUFA乙酯的转化率可达到51.5%。将在此条件下得到的反应混合物除去叔丁醇,在真空条件下继续反应24 h,PUFA乙酯转化率可达到87.8%。得到的产品混合物甘油酯组成为:甘油三酯67.1%,甘油二酯18.2%,甘油单酯2.1%。

浅议DHA、EPA及其应用

DHA(二十二碳六烯酸)和EPA(二十碳五烯酸)属ω-3系多不饱和脂肪酸,对人体有着重要的生理作用,成为当今科研领域研究的热点之一。文章阐述了DHA、EPA的分子结构、代谢途径以及它们的生理作用。此外,介绍了其生物来源、应用和当前的研究热点。

婴幼儿配方食品和乳粉中DHA、EPA、亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸(AA)的测定

建立了气相色谱法同时测定乳制品中的DHA,EPA,亚油酸,亚麻酸和花生四烯酸AA含量的方法。采用色谱柱为脂肪酸型色谱柱DB-23,氢火焰离子化检测器。优化了色谱条件。结果表明,DHA,EPA,亚油酸,亚麻酸和花生四烯酸AA分离效果很好。DHA的最低检出限为0.02 g/L,回收率为100.1%,变异系数(CV)为0.82%;EPA的最低检出限为0.01 g/L,回收率为99.8%,变异系数为1.04%;亚油酸的最低检出限为0.01 g/L,回收率为99.7%,变异系数为0.82%;亚麻酸的最低检出限为0.01 g/L,回收率为99.7%,变异系数为0.96%;AA的最低检出限为0.01 g/L,回收率为99.9%,变异系数为0.96%。

脂肪酶催化乙酯甘油酯酯交换制备富含EPA和DHA的甘油三酯

采用脂肪酶催化乙酯型鱼油和甘油酯型鱼油进行酯交换制备富含EPA和DHA的甘油三酯。对脂肪酶进行了筛选,并确定了两种脂肪酶TLIM和K酶用于后续研究。应用填充床反应器作为反应装置,采用正交试验对影响酯交换反应的几个主要因素条件进行了优化,得到了反应的最佳条件为:以K酶为催化剂,反应温度40℃,加酶量6%,反应时间18 h,底物摩尔比2.0∶1.0。同时,也得到了以TLIM酶为催化剂,获得最高含量EPA和DHA反应的最佳条件。

皂化-尿素包合法制备高含量EPA、DHA产品研究

在金属盐沉淀法和尿素包合法基础上研究了皂化 尿素包合法新工艺 ,简化操作 ,降低成本 ,产品EPA、DHA含量可达 82 5 7%以上。