DHCC放射受体检测试剂盒的实验研究

建立了一种改良的血清1,25双羟胆钙化醇(1.25-Dihydroxycholecalciferol,DHCC)超微量放射全体检测(RRA)试剂盒。完成了灵敏度、精密度、准确性、稳定性及特异性等技术指标。该试剂盒的创新点为:①应用正常元代茶沟倭病鸡,成功地制备了高活性受休蛋白;②通过3种措施简化与稳定了测试程序,提高了测试灵敏度(最小可测值由7pg/ml降低至1.7pg/ml),减少了血清用量(由2ml减至1ml),缩短了测试时间(由12小时缩短到4小时);③高比活~3H—DHCC制备,使基本试剂达到国产化。

DHCC受体检测方法的研究

本文采用葡聚糖包裹的活性炭石(DCC)法、羟基磷灰石(HAP)法及等电聚焦电泳(IEF)法,在各种条件下检测了1.25(OH)_2D_3(DHCC)受体的含量。这3种方法得到的表现解离常数(Kd)分别等于4.2×10^(-9)mol/L、2.3×10^(-9)mol/L和6.4×10^(-9)mol/L;该受体蛋白分别在10nmol/L、8nmol/L和30nmol/L浓度的〔~3H〕DHCC处被饱和。该受体对D_3类似物的结合能力依次为1,25(OH)_2D_3>>25(OH)D_3>D_3≈E_2。我们所测佝偻病鸡3种组织中该受体含量依次为肠>输卵管壳腺>>肝。用DCC法,在4℃孵育2～5h,结合最稳定。用KTED缓冲液测得的胞液DHCC受体含量比用TED缓冲液高(P<0.05)。

DHCC受体的纯化

本文报告了正常雄性家兔小肠粘膜细胞核提取液,经 38％饱和废硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素层析、DNA-纤维素层析、羟基磷灰石层析、Sephadex G—200凝胶过滤,最终得到纯化5200倍的DHCC受体40μg,产率为9％。

骨代谢病乳牛血中1，25－二羟胆钙化醇（DHCC）含量的测定及发病机理研究

为了探讨乳牛骨代谢病的发病机理，测定了骨代谢病乳牛血清１，２５－二羟胆钙化醇（ＤＨＣＣ）以及维生素Ｄ、羟脯氨酸的含量，并测定了肝、肾功能。结果表明，骨代谢病乳牛血清中维生素Ｄ含量升高，ＤＨＣＣ降低，羟脯氨酸降低，肝功能未见异常，肾功能发生了某些变化等。由此认为，乳牛骨代谢病是由肾功能障碍致维生素Ｄ转变为ＤＨＣＣ过程受阻，使ＤＨＣＣ含量降低引起的。其实质是骨基质分解降低，骨晶体即骨盐减少性疾病。

1,25-(OH)_2维生素D_3放射受体检测技术的建立及其在原发性骨质疏松症中的实验研究

目的建立一种改良的血清１，２５－（ＯＨ）２维生素Ｄ３即１，２５二羟基胆钙甾醇（１，２５－ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｏｌｅ－ｃａｌｃｉｆｅｒｅｌ，ＤＨＣＣ）超微量放射受体检测技术（ＲＲＡ），对原发性骨质疏松症血清的ＤＨＣＣ含量进行检测。方法用非均相核素交换法制备了３Ｈ－ＤＨＣＣ，应用超速离心技术制备胞浆受体蛋白，改进提取与纯化手段，建立ＤＨＣＣ放射受体分析方法，检测了骨质疏松症患者血样。结果完成灵敏度、精密度、准确度、稳定性及特异性等方法学技术指标，经分析检测的原发性骨质疏松症患者血清，ＤＨＣＣ含量明显低于正常老年对照组（Ｐ＜０．０５）。结论ＤＨＣＣ降低是发生骨质疏松症的重要原因之一。

1,25-双羟胆钙化醇及其受体含量检测的实验研究

建立了一种改良的血清1,25-双羟胆钙化醇(1,25-Dihydroxycholecalciferol,DHCC)超微量放射受体检测(RRA)技术。完成了灵敏度、精密度、准确度、稳定性及特异性等技术指标。报告了我国健康青年血清DHCC正常值;检测了先天性佝偻病、青春期佝偻病病人及患肾性骨病奶牛等血清DHCC水平。 根据配体与受体相互结合的定量关系,建立了DHCCR(DHCC受体)检测技术。在游离与结合配基分离方面,除建立与比较了DCC(葡聚糖包埋的活性炭)及HAP(羟基磷灰石)方法外,还首次将IEF(等电聚焦电泳)应用于DHCCR分离技术。对佝偻病鸡小肠粘膜上皮细胞受体含量进行了检测并比较了鸡小肠、输卵管壳腺及肝组织DHCCR含量。

LTV钢铁公司克利夫兰厂新的直接热装联合机组

ＬＴＶ钢铁公司克利夫兰厂新的直接热装联合机组［美］ＮｏｒｍａｎＬ．Ｓａｍｗａｙｓ１前言在过去的７年中，美国林－坦科－沃特钢铁公司（ＬＴＶ）改造设备总花费为２３亿美元，从而不仅使质量达到具有世界竞争力的水平，而且还大幅度地降低设备运行费用。克利夫兰厂重...

聚类与协同过滤相结合的隐式推荐系统

针对目前大多推荐系统中使用的协同过滤算法都需要有显示的用户反馈的问题,提出一种在隐式反馈推荐系统中使用聚类与矩阵分解技术相结合的方法,为用户提供更好地推荐结果。其结果是由基于用户历史购买记录的隐式反馈产生的,不需任何显式反馈提供的数据。采用高维的、无参数的分裂层次聚类技术产生聚类结果,根据聚类的结果为每个用户提供高兴趣度的个性化推荐。实验结果表明,在隐式反馈的情况下该方法也能有效获得用户偏好,产生大量的高准确度推荐。

1,25-二羟胆钙化醇与其受体基因表达关系的研究

目的：研究ＤＨＣＣ与其受体基因表达的关系。方法：幼年大鼠经腹腔注射ＤＨＣＣ后，在３、６、１２和２４ｈ处死，并分别提取小肠、肾脏、心脏、肝脏和脾脏等总ＲＮＡ，用生物素标记的ＤＨＣＣＲ基因为探针进行Ｄｏｔｂｌｏｔ杂交与用３２Ｐ标记的ＤＨＣＣＲ基因为探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交检测ＤＨＣＣＲｍＲＮＡ水平。结果：给药后第６ｈ靶器官中的ＤＨＣＣＲｍＲＮＡ水平明显增高。检测ＤＨＣ－ＣＲ分布时发现小肠ＤＨＣＣＲｍＲＮＡ含量最高，肾脏其次，心脏为第三位，肝脏与脾脏中未见表达。结论：ＤＨＣＣＲ基因表达不仅出现在像小肠、肾脏等传统的靶器官，而非靶器官的心脏也有ＤＨＣＣＲｍＲＮＡ信号。提示心脏可能是一个待定的ＤＨＣＣ靶器官。