揉拨法调节DHPR/RyR通路对肌筋膜疼痛综合征大鼠的改善作用研究

【目的】探讨揉拨法对肌筋膜疼痛综合征(MPS)大鼠的治疗作用及机制。【方法】从60只大鼠中随机抽取12只作为正常组,其余大鼠采用钝性打击结合离心运动法构建MPS模型。再将48只造模成功的大鼠随机分为模型组、揉拨法组、揉拨法+丹曲林[利若丁受体(Ry R)抑制剂]组、揉拨法+生理盐水组,每组12只。采用von-Frey法测定机械性痛阈值;检测软组织张力、肌电图;透射电镜观察激痛点组织超微结构;比色法检测激痛点组织内钙离子(Ca^(2+))含量;Western Blot法检测激痛点组织二氢吡啶受体(DHPR)α1、Ry R、乙酰胆碱酯酶(ACh E)蛋白表达。【结果】与正常组比较,模型组大鼠机械性痛阈值、激痛点软组织张力以及激痛点组织DHPRα1、Ry R、ACh E蛋白表达降低,Ca^(2+)含量增加(均P<0.05),肌电图出现振幅较高的峰电位、变化明显,激痛点组织超微结构受损;与模型组比较,揉拨法组、揉拨法+生理盐水组大鼠机械性痛阈值、激痛点软组织张力以及激痛点组织DHPRα1、Ry R、ACh E蛋白表达升高,Ca^(2+)含量减少(均P<0.05),肌电图恢复平稳,激痛点组织超微结构损伤减轻;与揉拨法组比较,揉拨法+丹曲林组大鼠机械性痛阈值、激痛点软组织张力以及激痛点组织DHPRα1、Ry R、ACh E蛋白表达降低,Ca^(2+)含量增加(均P<0.05),肌电图出现电活动变化,激痛点组织超微结构损伤加重。【结论】揉拨法可能通过激活DHPR/Ry R信号通路改善大鼠MPS。

兔膈肌骨骼肌型DHPR_(α1)亚单位和RyRs的mRNA与蛋白表达测定

本文测定了兔膈肌钙释放单位中骨骼肌型DHPRα1 亚单位和RyRs的mRNA与蛋白表达水平 ,探讨了兔膈肌钙释放单位的结构组成特征。采用RT PCR、原位杂交和免疫组织化学技术 ,分别测定兔膈肌骨骼肌型DHPRα1 亚单位和RyR1、RyR2 及RyR3 的mRNA与蛋白表达。结果显示 ,兔膈肌可见较高水平的骨骼肌型α1 亚单位和RyR1mRNA与蛋白表达 ;较低水平的RyR3mRNA与蛋白表达。表明兔膈肌钙释放单位由骨骼肌型DHPR、RyR1和RyR3 构成 ,Ca2 +释放可能具有变构耦联和CICR耦联两种形式 ,RyR3 的存在可能是膈肌ECC依赖于细胞外Ca2 +的主要原因。

兴奋-收缩偶联中DHPR与RyR的相互作用

兴奋-收缩偶联(E-Ccoupling)依赖细胞膜二氢吡啶受体(DHPR)/L型电压门控Ca2+通道和肌浆网兰诺定受体(RyR)/Ca2+释放通道的相互作用。在骨骼肌细胞中,DHPR与RyR1在结构上机械偶联,不依赖细胞外Ca2+即可激活RyR1;在心肌细胞中,去极化激活DHPR,细胞外Ca2+内流,内流的Ca2+通过钙诱导钙释放(CICR)机制激活RyR2。最近的研究表明,DHPR与RyR之间的信号转导通常是双向的。DHPR与RyR机械和化学的双向偶联机制调节这两种Ca2+通道的效率、精确度和活性。

不同频率慢性电刺激膈神经对兔膈肌骨骼肌型二氢吡啶受体_(α1)亚单位、ryanodine受体mRNA和蛋白表达的影响

测定不同频率慢性电刺激(chronic electrical stimulation,CES)膈神经5周后对兔膈肌钙释放单位中骨骼肌型二氢吡啶受体(DHPR)α1亚单位和ryanodine受体(RyrRs)的mRNA和蛋白表达水平的影响,探讨CES后兔膈肌钙释放单位结构组成的变化和可能的临床应用价值。封闭群日本大耳白兔30只,随机分为正常对照组、10、20、50和100 Hz,每组6只;以10和20 Hz为慢性低频电刺激组,50和100 Hz为慢性高频电刺激组。CES参数为波宽0.2 ms 3-6个波/次,45次/min,电压10-20 V。刺激时间2×2 h/日,每周刺激6 d,连续刺激5周。分别采用RT-PCR和免疫组织化学法测定兔膈肌骨骼肌型DHPRα1-亚单位和RyR1、RyR2和RyR3的mRNA和蛋白表达。结果显示:与对照组比较,慢性低频电刺激10和20 Hz组骨骼肌型DHPRα1-RyR2的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01),有低度的RyR2mRNA的表达出现;慢性高频电刺激50和100 Hz组骨骼肌型DHPRα1-RvR1的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01),未检测到RyR2mRNA的阳性表达。本实验提示慢性低频电刺激膈神经5周后,膈肌质膜上DHPR与RyRs之间的信号转导方式已从变构耦联为主转变为以Ca2+诱导Ca2+释放耦联为主。

按压对大鼠肌筋膜激痛点软组织张力的影响及其作用机制研究

目的:探讨按压对大鼠肌筋膜激痛点(myofascial trigger point,MTrP)软组织张力的影响及其作用机制。方法:雄性SD大鼠48只,随机分为4组:空白组、模型组、利多卡因组和按压组,每组12只。模型组、利多卡因组和按压组采用离心运动结合钝性打击的方法建立MTrP大鼠模型。造模评价后,利多卡因组给予激痛点局部注射利多卡因干预,按压组给予激痛点局部按压干预。采用软组织张力测定仪检测大鼠激痛点软组织张力,之后在激痛点局部取材。用免疫组化法检测P物质(substance P)和降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达。用试剂盒以比色法检测游离Ca^(2+)含量。用Western Blot法检测二氢吡啶受体α1(dihydropyridine receptorα1,DHPRα1)、利若丁受体(ryanodine receptor,RyR)和乙酰胆碱酯酶(acetyl cholinesterase,AChE)表达。结果:(1)与空白组相比,模型组激痛点软组织张力、Ca^(2+)、P物质和CGRP含量增高(P<0.05),DHPRα1、RyR和AChE含量降低(P<0.05);(2)与模型组相比,按压组和利多卡因组激痛点软组织张力、Ca^(2+)、P物质和CGRP含量降低(P<0.05),DHPRα1、RyR和AChE含量增高(P<0.05);(3)与利多卡因组相比,按压组软组织张力、DHPRα1、RyR、AChE、Ca^(2+)、P物质和CGRP含量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:按压可以有效降低激痛点软组织张力,其机制与促进DHPRα1、RyR和AChE表达,降低Ca^(2+)、P物质和CGRP含量有关。

调节Ryanodine受体的相关蛋白

Ryanodine受体 (RyR)是存在于内质网 /肌浆网上 (ER/SR)的一种钙释放通道。它能迅速地将Ca2 +从ER/SR中释放出来 ,从而发挥一系列的生理功能。RyR是一种颇复杂的分子 ,其位于胞质的亚基上有大量可供作用物结合的位点 ,控制构成离子通道的亚基的活性。其中 ,一些内源性蛋白对RyR的活性有重要的调节作用。本文主要介绍DHPRs、Triadin。