DHRS7C基因多态性与驴体尺性状的关联分析

本研究旨在探索DHRS7C基因外显子多态性及其与阳原驴体尺性状的相关性。基于课题组前期阳原驴的体尺性状全基因组关联分析(Genome-wide Association Study,GWAS)结果,选择DHRS7C(Dehydrogenase/Reductase Member 7C)为候选基因,通过PCR扩增其外显子区域、Sanger测序、基因分型以及关联分析等方法,寻找与阳原驴体尺性状显著相关的SNP位点。对显著位点突变前后的mRNA二级结构,蛋白质二、三级结构进行预测比对。结果表明:阳原驴DHRS7C基因外显子区域内存在g.12389830 G>A突变,产生GG、GA 2种基因型,不同基因型个体之间的体长、胸围、管围差异不显著,体高差异显著,GA基因型个体体高显著高于GG基因型;该突变造成蛋白质第63位精氨酸变为赖氨酸,形成错义突变,通过在线网站结构预测,突变前后mRNA二级结构,蛋白质二、三级结构均无明显变化;同时,研究发现该基因还存在g.12397240 G>A、g.12397287 G>A、g.12398389 G>A、g.12398466 G>A 4个突变,但在本研究驴群中尚未发现它们与体尺性状存在显著相关性。综上所述,DHRS7C基因外显子3区域中的SNP(g.12389830 G>A)位点可作为阳原驴体高性状的潜在分子标记。

HPV16 E6 下调 DHRS2 表达可介导宫颈上皮细胞的致癌转化

目的探讨HPV16 E6对宫颈上皮细胞基因及信号通路的影响,筛选与致癌转化相关的基因。方法构建HPV16 E6感染的正常人宫颈上皮细胞(HUCEC)模型,进行转录组测序筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因和基因组(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析差异信号通路。采用RT-qPCR验证主要差异下调表达基因。对主要差异基因的蛋白结构与HPV16 E6蛋白进行分子对接预测分析,通过RT-qPCR及Western blot验证HUCEC细胞模型中主要差异基因表达情况,并采用RT-qPCR及Western blot实验在宫颈癌细胞系SiHa及CaSki中进一步验证差异基因的表达。结果共筛选出差异表达2倍以上的基因55个。本研究聚焦下调差异基因,结果表明:负调控的差异基因GO功能富集于氧化还原过程;KEGG富集分析主要与碳水化合物代谢及癌症等相关。10个差异基因mRNA下调表达趋势与测序结果基本一致。分子对接预测DHRS2与HPV16 E6蛋白存在相互作用。与对照组比较,HUCEC细胞模型中HPV16 E6下调DHRS2的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)、ETV5的蛋白(P<0.01)表达;在SiHa、CaSki细胞系中,与对照组比较,DHRS2的mRNA及蛋白表达亦明显下调(P<0.05),并与P53蛋白表达趋势正相关。结论HPV16 E6可能通过下调DHRS2表达介导宫颈细胞致癌转化,促进宫颈癌发生。

MARDHRS4的鉴定及其对DHRS4转录的调节

目的:筛选新的小鼠DHRS4反义链转录本并对其功能进行研究。方法:采用快速cDNA末端扩增方法,从小鼠正常肝细胞株NCTC1469中克隆DHRS4反义链转录本,据此转录本设计合适siRNA,然后转染NCTC1469细胞,转染成功36h后应用RT-qPCR检测细胞内DHRS4mRNA水平的改变。结果:成功克隆出1个新的天然反义RNA,全长835nt,属于长链非编码RNA(longnon-coding RNA,LncRNA),命名为MARDHRS4,应用siRNA干扰MARDHRS4后,DHRS4mRNA降低约40%。结论:来自DHRS4反义链的LncRNA MARDHRS4具有增强DHRS4转录的作用。

DHRS4L2非编码RNA调控CPNE6基因表达（英文）

DHRS4/NRDR基因编码一种属于SDR家族的酶,在维甲酸合成、类固醇代谢和苯甲基代谢中发挥生物合成催化作用.DHRS4基因定位于14q11.2,有两个相似的拷贝基因,分别为DHRS4L2和DHRS4L1.我们前期发现了DHRS4L2基因一个上游转录起始位点,命名为DHRS4L2-Ea.在本研究中,我们用RT-PCR和双脱氧测序法发现一个新的从DHRS4L2-Ea转录的选择性剪接亚型DHRS4L2-900a(KC237374).同时RT-PCR结果显示在SK-N-SH细胞DHRS4L2-Ea选择性剪接亚型中DHRS4L2-iso(AY616183)表达最多,为主要亚型.在SK-N-SH细胞过表达DHRS4L2-800a(AY920361)使DHRS4L2-Ea基因下游CPNE6 mRNA表达下调.在HeLa细胞过表达DHRS4L2-800a(AY920361)或DHRS4L2-900a(KC237374)进一步表明DHRS4L2-Ea抑制CPNE6表达的作用.定量PCR结果显示si-RNA抑制DHRS4L2-Ea表达使CPNE6 mRNA表达上调.亚硫酸盐测序结果显示在SK-N-SH转染DHRS4L2-800a(AY920361)的样本中CPNE6基因DNA CpG甲基化增加.综上所述,本研究揭示DHRS4L2表达的非编码RNA抑制其下游基因CPNE6的表达.

鹅DHRS7基因克隆、序列分析及其在鹅肥肝形成过程中的表达特点

为获得鹅DHRS7基因全长cDNA,并探讨该基因是否参与鹅肥肝的形成过程。本研究应用抑制消减杂交文库获得鹅DHRS7基因部分EST序列,采用RACE技术扩增了鹅该基因全长cDNA,并对其序列进行了生物信息分析;用荧光定量PCR技术检测了DHRS7在鹅肝脏、皮脂、腹脂等10个组织中的差异表达,以及填饲对鹅肝脏中DHRS7表达变化的影响。结果发现,鹅DHRS7基因cDNA全长1 279bp,含一个完整的开放阅读框1 011bp(可编码336个氨基酸),25bp的5′UTR和243bp的3′UTR序列;生物信息学分析结果显示,鹅DHRS7含有跨膜结构域以及NADP结合位点,且在这些功能区域变异较少;荧光定量结果显示,DHRS7在鹅肝脏和脂肪组织中都有较高表达,填饲后鹅肝脏中DHRS7的表达水平显著上调(P<0.05)。以上结果表明,DHRS7在鹅肥肝形成过程中具有重要的作用。

用DHR型k-ε紊流模型对锥形渐扩管内紊流的数值仿真——壁面函数·BFC法之时间步长、加速系数和数值方法的影响

用DHR型k-ε紊流模型及其壁面函数·BFC(边界拟合曲线坐标变换)法,对总扩散角为80、扩散度为4的锥形渐扩管内充分发展的不可压粘性紊流场进行了数值仿真.所研究紊流的入口雷诺数为1.16×105和2.93×105.在不同的时间步长、加速系数和数值方法等计算条件下进行了数值仿真.分别给出了时均流速和紊流动能分布的计算结果,并分别将其与实验结果进行比较和分析,得知不同计算条件对计算结果的影响程度,计算结果与实验结果较好符合.

结直肠癌患者DHRS9的表达及其临床意义

目的:探讨脱氢酶/还原酶家族成员9(DHRS9)表达对结直肠癌临床预后的意义。方法:采用免疫组织化学染色方法检测163例临床结直肠癌组织样本,并挑选58例新鲜样本,提取总蛋白和总RNA,采用Western blot和q PCR方法检测DHRS9表达情况。结果:Western blot和q PCR检测结果表明,结直肠癌组织中DHRS9蛋白和mRNA表达均下调,且淋巴结转移(P=0.032)、TNM晚期(P=0.021)、疾病复发(P=0.001)和患者死亡(P=0.014)显著影响DHRS9表达。Kaplan-Meier分析结果显示,DHRS9表达下调预示患者无病生存期(P=0.003)和疾病特异性生存时间(P=0.021)较短。Cox多变量分析表明,DHRS9表达下调是结直肠癌患者疾病预后不良的独立预后标志物。此外,联合采用DHRS9表达检测和TNM分期对患者预后进行判断更加准确。结论:DHRS9表达下调与结直肠癌患者肿瘤发展密切相关,可以作为结直肠癌患者疾病临床预后标志物。

DHR123流式细胞分析在慢性肉芽肿病诊断中的应用

目的探讨二氢罗丹明流式细胞分析(DHR123 FC)方法在慢性肉芽肿病(CGD)诊断中的应用。方法选取在我院就诊、经临床和基因突变分析确诊为CGD的4例患儿。采用DHR123 FC分析血液中中性粒细胞群分布,评估DHR123 FC诊断的敏感性。结果病例1和2 CYBB基因突变分析分别为925G>A/E309K,731G>A/C244Y,均为已报道突变,临床表型为变异型;DHR123 FC显示中性粒细胞轻度移位,刺激指数约为10(正常为>40)。病例3为X-CGD女性携带者发病;CYBB基因突变分析为杂合的1212 del G;DHR123 FC显示有2.3%中性粒细胞正常移位,刺激指数为258.67;97.7%中性粒细胞无移位,刺激指数约为1。病例4为经典CGD患者,中性粒细胞无移位,刺激指数为1;干细胞移植后DHR123FC显示80.02%中性粒细胞正常移位,刺激指数为127.8。结论变异型CGD中性粒细胞轻度移位,刺激指数明显低于正常。DHR123 FC分析敏感性高,可用于变异型CGD及X-CGD女性携带者发病的诊断及干细胞移植后植入情况的监测。

基质金属蛋白酶-2在DHR心脏中表达的意义及波生坦的影响

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在脱氧皮质酮-盐型高血压大鼠(DHR)心脏微小血管重塑中作用及其可能的调节机制。方法30只雄性SD大鼠,切除左侧肾脏后一周,随机等分为3组。其中,一组为对照组,饮自来水;另两组分别为模型组和波生坦组,开始予脱氧皮质酮(DOCA)(50mg.kg-1.week-1)皮下注射,连续5周。5周末处死动物,按相应的要求留取血液和心脏标本,分别行血浆ET-1浓度、微小血管密度及MMP-2/TIMP-2蛋白和基因表达的检测。结果在DHR左心室心内膜下心肌中存在微小动脉密度增加和毛细血管密度减少,MMP-2的mRNA和MMP-2/TIMP-2的蛋白表达上调;波生坦能抑制血压升高,减轻微小血管损害,下调MMP-2/TIMP-2的mRNA和蛋白表达,MMP-2的表达同微小血管密度间具有良好的相关性。结论在DHR心脏中存在微小血管病变,MMP-2/TIMP-2表达可能参与微小血管病变的病理机制,内皮素-1可能是通过调节MMP-2/TIMP-2表达参与微小血管病变。

DHRS4反义RNA结合蛋白的高通量检测与分析

目的 DHRS4是细胞内NADP(H)依赖性视黄醇脱氢/还原酶家族成员4的编码基因。与人类DHRS4基因以头对头形式存在的反义转录本AS1DHRS4,可以调控DHRS4基因的转录。本研究高通量检测分析DHRS4反义RNA结合的蛋白以探讨DHRS4反义转录本调控正义基因表达的作用机制。方法采用甲醛交联细胞内的核酸-蛋白复合物,然后通过生物素标记的奇数组和偶数组寡核苷酸作为探针pull-down AS1DHRS4结合的蛋白,LCMS/MS鉴定后数据库比对分析DHRS4反义RNA结合的蛋白。结果奇数组和偶数组探针pull-down后分别鉴定得到650种和508种蛋白,两组探针检测的共同蛋白434种。大部分蛋白为结合蛋白并与RNA的加工和修饰相关。结论 DHRS4反义RNA结合的蛋白的检测和分析为今后进一步研究反义RNA功能和机制提供了线索和基础。

DHRS4基因簇缺失型神经母细胞瘤细胞株的克隆和鉴定

目的单克隆培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y-细胞株,并鉴定其在基因水平缺失DHRS4基因簇,包括DHRS4、DHRS4L2和DHRS4L1的基因序列。方法有限稀释法培养实验室偶得的低表达DHRS4基因的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,相差显微镜观察细胞的生长和增殖,PCR、RT-PCR检测DHRS4、DHRS4L2和DHRS4L1基因的DNA和RNA含量,Westernblotting检测DHRS4蛋白的表达。结果筛选得到单克隆神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,在DNA、RNA和蛋白水平均未检测到DHRS4基因簇的DNA序列及表达产物。结论经过克隆低表达DHRS4基因簇的SH-SY5Y细胞,得到纯系的DHRS4基因簇缺失的SH-SY5Y-细胞株,该细胞对于进一步研究DHRS4基因簇的功能和表达调控都是难得的细胞模型。

DHRS4基因在猪骨骼肌中的表达及其与生长性状的关联分析

为探讨猪DHRS 4基因在骨骼肌中的表达及其与生长性状的相关性,本研究分析了DHRS 4基因在长白猪出生后30、180和300 d不同类型骨骼肌中的表达,并在蓝思白猪资源群体中筛选DHRS 4基因的多态性位点,进一步通过Sequenom SNP分型技术对DHRS 4基因进行基因分型,分析了DHRS 4基因多态性位点与猪生长性状(料重比、平均日增重和平均背膘厚)的相关性。结果显示,DHRS 4基因在30、180和300 d长白猪的胸肌、腿肌和背肌中均有表达,在胸肌和腿肌中,DHRS 4基因在30 d的表达显著或极显著高于180和300 d(P<0.05;P<0.01),而在背肌的不同发育时期中,其表达水平没有显著差异(P>0.05)。此外,本研究在蓝思白猪资源群体中找到了3个位于DHRS 4基因上的单核苷酸多态性位点:rs334250151、rs342446613和rs326982309。关联分析结果表明,rs334250151位点与料重比呈显著相关,该位点AA基因型个体的料重比显著低于TT基因型个体(P<0.05)。研究揭示,DHRS 4基因可能参与猪的骨骼肌发育,rs334250151位点可以作为一个新的分子标记应用于猪生长性状的遗传改良中。

正常肝和肝癌细胞中DHRS4L2基因选择性剪接亚型的克隆及其表达调控研究

目的:鉴定正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞Hep-G2中DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型,并探讨其表达调控机制。方法:应用RT-PCR,3′RACE和生物信息学方法发现并鉴定DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型;去甲基化药物5-aza-dC处理HL-7702和Hep-G2细胞,通过RT-PCR和real-time PCR方法检测DHRS4L2的表达情况。结果:发现了2个新的DHRS4L2剪接亚型DHRS4L2A和DHRS4L2A3,2个新亚型均出现了新的第1个外显子,命名为Ea,前者缺失外显子1,后者缺失外显子1和3;在正常肝细胞中去甲基化后含DHRS4L2外显子1的转录产物比处理前明显增加,在肝癌细胞中则比处理前减少。结论:获得2个新的DHRS4L2剪接亚型,并发现DHRS4L2的表达和甲基化调控相关,且甲基化的调控作用在正常肝与肝癌细胞之间存在差异,其机制尚待进一步探讨。

DHRS2蛋白对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响

目的研究DHRS2蛋白对肠癌耐药细胞敏感性影响及其机制。方法利用串联质谱标签法(TMT)对结直肠癌耐药细胞系HCT116/OXA与其亲本进行差异蛋白筛选;CCK-C法检测结直肠癌耐药细胞株HCT116/OXA对奥沙利钳敏感性及沉默DHRS2蛋白对其耐药性影响;蛋白质印迹法验证差异表达蛋白以及检测沉默DHRS2蛋白后对相关信号通路蛋白调节作用。结果耐药细胞株HCT116/OXA中DHRS2蛋白水平明显高于亲本细胞株(P<0.001);沉默DHRS2蛋白可增加HCT116/OXA对奥沙利钳的敏感性;同时下调P53蛋白和切除修复交叉互补基1(ERCC1)蛋白的表达。此外,干扰P53蛋白后,ERCC1蛋白表达也明显减少。结论沉默DHRS2蛋白可部分恢复结直肠癌耐药细胞株HCT116/OXA对化疗药物敏感性,其机制可能为通过下调P53蛋白进而抑制ERCC1蛋白表达引起。

DHRS7对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响及其在乳腺癌组织中的表达

目的:探究DHRS7基因过表达和DHRS7特异性短发夹RNA(shRNA)重组质粒对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响及DHRS7与乳腺癌浸润癌的关系,阐明DHRS7在乳腺癌发生、发展中的作用。方法:利用RT-PCR技术将DHRS7基因全长克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)质粒中,构建pcDNA3.1-DHRS7重组真核表达质粒。实验分为pcDNA3.1-DHRS7组、阴性对照组(pcDNA3.1组)、空白对照组和DHRS7-shRNA-pGenesil组,用Fugene HD转染试剂将各种质粒转染MCF-7细胞,采用RT-PCR和Westernblotting法检测各组MCF-7细胞中DHRS7的表达情况,流式细胞术分析细胞周期变化,免疫组织化学SP法检测乳腺原位癌和乳腺浸润癌组织中DHRS7蛋白的表达情况。结果:成功构建pcDNA3.1-DHRS7重组表达质粒。PCR和Western blotting结果显示,pcRNA-DHRS7组蛋白的表达量高于空白对照组(P<0.05),DHRS7-shRNA-pGenesil组蛋白的表达量低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术显示,DHRS7表达上调使MCF-7细胞S期细胞增多(P<0.05),DHRS7的表达下调使处于G2期的细胞增多(P<0.05)。免疫组织化学染色显示,DHRS7蛋白在原位癌中高表达,阳性表达率为100%(37/37);在乳腺浸润癌的表达明显降低,阳性率为18.9%(7/37),两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:DHRS7基因参与了MCF-7细胞细胞周期的调控过程,可以抑制细胞增殖,DHRS7蛋白的表达丢失可能促进乳腺癌浸润。

小鼠DHRS4基因原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备

目的:构建小鼠pDESTTM17/DHRS4重组载体,制备小鼠抗DHRS4多克隆抗体。方法:应用RT-PCR从小鼠肝组织扩增DHRS4的开放阅读框序列,测序确认后将其编码区构建到载体pDONRTM201上,再通过LR置换反应再将其置换到载体pDESTTM17上,测序后转化到E.coliBL21-AI工程菌中,并经阿拉伯糖诱导表达出抗DHRS4融合蛋白。以小鼠融合蛋白作为免疫原免疫大白兔,制备小鼠抗DHRS4多克隆抗体。结果:成功构建小鼠DHRS4重组载体;转化重组质粒的E.coliBL21-AI经阿拉伯糖诱导4 h后高效表达DHRS4融合蛋白;Western bolt实验结果显示制备的多克隆抗体可特异性检测小鼠肝组织DHRS4相应蛋白的表达。结论:成功构建小鼠pDESTTM17/DHRS4原核表达载体和获得小鼠抗DHRS4多克隆抗体。

基质金属蛋白酶-2在DHR心脏中的表达及麝香保心丸的影响

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在脱氧皮质酮-盐型高血压大鼠(DHR)心脏微小血管重塑中的作用及麝香保心丸对其的影响。方法18只雄性SD大鼠切除左侧肾脏后1周,随机等分为三组。建立DOCA-HDR模型,5周后检测心脏血管密度以及MMP-2因子的表达量。结果在DHR左心室心内膜下心肌中存在微小动脉密度增加和毛细血管密度减少,MMP-2mRNA和MMP-2/TIMP-2的蛋白表达上调;麝香保心丸不能抑制血压升高,但能减轻微小血管损害,下调MMP-2mRNA和蛋白表达,MMP-2的表达同微小血管密度间具有良好的相关性。结论DHR心脏中存在微小血管病变,MMP-2/TIMP-2表达可能参与微小血管病变的病理过程,麝香保心丸可能通过调节MMP-2表达产生对DOCA-高血压大鼠心脏的微小血管损害的保护作用。

数字化转型背景下高科技企业DHR人才画像及培养策略研究

随着数字经济的快速发展,高科技企业面临着数字化转型的压力,将大数据技术、云计算、人工智能技术运用到企业人力资源管理是数字化人力资源(DHR)的典型特征。以数字化转型为背景,对高科技企业DHR人才进行了人才画像,并对高校DHR人才及高科技企业在职DHR人才培养提出了建议,以期提升人才培养质量,促进企业的可持续发展。

大数据背景下人力资源管理专业DHR人才培养策略研究

高校人力资源管理专业人才培养与大数据背景下企业DHR人才的需求存在巨大的差距。本文初步定位大数据背景下企业对DHR人才素质的要求,从高校人力资源管理专业人才培养目标、课程体系、实践教学和师资队伍四个方面来探讨大数据背景下高校人力资源管理专业DHR人才培养的策略,解决大数据时代企业DHR人才需求与人力资源管理专业人才培养不匹配的问题。

基于DHR系统的堤坝防渗墙检测研究

沿堤坝修建防渗墙工程不仅可以保护堤坝的安全,而且可以提高大坝抗洪救灾的能力。根据相关理论设计了双排列高密度四极法(DHR-4P)与双排列高密度二极法(DHR-2P)的DHR观测系统,并利用该系统对大凌河防渗墙试验段、完整段与隐患段进行了数据采集与分析,发现设计的观测系统可以反映地层中防渗墙存在的部位与墙体深度,并且发现墙体隐患的准确位置,为堤坝防渗墙的实际应用提供了理论依据。