白血病分化相关基因dif14的原核表达

目的 :构建 pGEX dif14原核表达载体 ,在大肠杆菌中表达dif14蛋白片段以获得其抗原 .方法 :采用N末端融合谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)的 pGEX 4T 1载体 ,根据dif14基因开放读框N端 5 2氨基酸序列设计引物PCR扩增并购建原核表达载体 ,测序证实 .在大肠杆菌DH5α中进行表达 .结果 :测序证实dif14原核表达载体构建正确 ,含 pGEX dif14表达质粒的大肠杆菌经异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导后能够表达约Mr35× 10 3 的融合蛋白 .结论 :成功地构建了原核表达质粒 pGEX dif14 ,并在大肠杆菌得到表达 。

DIF14/LMBR1蛋白的分子进化分析

目的 利用生物信息学方法分析 DIF14 / L MBR1蛋白的分子进化情况并分析其同源蛋白的保守区。方法 利用BL AST同源比较分析寻找 Gen Bank中与 DIF14 / L MBR1高度同源的蛋白序列并下载 ,应用 Clustal X软件对蛋白序列进行多序列对齐 ,绘制进化树 ,利用 SAM- T99软件分析多个序列之间的保守区。 TMpred软件对下载的各种同源的蛋白序列进行跨膜区预测。结果 DIF14 / L MBR1蛋白在各种真核生物中存在高度保守的同源蛋白 ,大部分蛋白属于九次跨膜蛋白 ,各蛋白之间的氨基酸一致性与生物亲缘关系的远近有密切关系 ,人 DIF14 / L MBR1与lipocalin- interacting membrane receptor基因可能有相同的祖先基因 ,但两者功能有所不同。结论 DIF14 / L MBR1蛋白是真核生物中高度保守的基因 ,属于九次跨膜蛋白 ,但在细胞内具体执行的生物学功能有待进一步研究。