红景天注射液对帕金森病患者治疗效果及血清DJ-1/Nrf2通路相关氧化应激指标的影响

目的 探究红景天注射液对帕金森病患者治疗效果及血清DJ-1/核因子相关因子2(Nrf2)通路相关氧化应激指标的影响。方法 前瞻性选取2021年6月至2022年6月来河北北方学院附属第一医院治疗的120例帕金森病患者作为研究对象,按照随机数字表法将患者分为研究组与对照组,每组各60例。对照组患者接受常规抗帕金森病治疗,研究组患者在此基础上联用红景天注射液治疗,连续治疗4周。比较两组患者的临床疗效,治疗前、治疗后4周的氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)、DJ-1蛋白、Nrf2],治疗前、治疗后4个月的帕金森病综合症状、生活质量情况,并观察两组患者不良反应发生情况。结果 治疗后,观察组患者的治疗有效率为96.61%,明显高于对照组(83.05%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后4周,观察组患者血清SOD、GSH-Px、Nrf2水平分别为(44.27±2.19) U/mL、(44.12±6.72) U/L、(669.68±87.23) U/L,均明显高于对照组[(31.29±2.97) U/mL、(40.82±4.12) U/L、(602.09±52.31) U/L],而血清丙二醛、DJ-1蛋白水平分别为(2.27±0.86) nmol/mL、(7.08±2.19)μg/L,均明显低于对照组(3.69±1.15) nmol/mL、(10.92±1.29)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后4个月,观察组患者的UPDRS评分为(46.23±2.34)分,明显低于对照组[(63.28±1.93)分],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后4个月,观察组患者的生理功能、躯体功能、社会功能、心理状态、情感功能5个方面的评分分别为(73.12±5.22)、(78.23±2.34)、(81.23±2.13)、(88.29±3.91)、(86.39±3.23)分,均明显高于对照组[(53.13±6.48)、(59.28±4.92)、(69.24±5.91)、(71.23±2.03)、(71.13±3.25)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者不良反应发生率为8.47%,明显低于对照组(23.73%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 在常规抗帕金森病治疗基础上,采用红景天注射液治疗帕金森病可明显提高患者的临床疗效,抑制DJ-1/Nrf2通路相关氧化应激反应,改善帕金森病症状,提高患者生活质量,降低不良反应发生率。

前列腺癌组织中DJ-1蛋白和单酰甘油酯酶的表达及临床意义

目的观察前列腺癌组织中DJ-1蛋白和单酰甘油酯酶(MGLL)的表达情况,并分析两者与前列腺癌临床病理特征及预后的关系。方法收集2019年8月至2021年8月收治的112例经穿刺病理确诊为前列腺癌的患者作为研究对象。采用蛋白印迹法检测前列腺癌组织和癌旁组织中DJ-1和MGLL的表达水平,分析DJ-1、MGLL与前列腺癌临床病理特征的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估患者复发/死亡时DJ-1、MGLL的最佳截断值。术后随访至2023年8月,观察DJ-1、MGLL表达与前列腺癌患者术后2年无复发生存率的关系。结果前列腺癌组织中DJ-1和MGLL的相对表达量分别为0.70±0.09和0.22±0.06,在癌旁组织中分别为0.23±0.03和0.84±0.09,差异均有统计学意义(P<0.05)。前列腺癌组织中DJ-1、MGLL表达水平与TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与年龄、肿瘤直径和Gleason评分无关(P>0.05)。ROC曲线显示,患者复发/死亡时,DJ-1和MGLL的最佳截断值分别为0.48和0.22,112例前列腺癌患者术后均获随访,DJ-1高表达患者的术后2年无复发生存率为65.6%,低于DJ-1低表达患者的93.8%(P=0.033);MGLL低表达患者的术后2年无复发生存率为65.2%,低于MGLL高表达患者的90.0%(P=0.041)。结论前列腺癌组织中DJ-1高表达、MGLL低表达,DJ-1、MGLL表达水平与TNM分期、淋巴结转移及无复发生存时间有关。

秦川牛宰后成熟过程中蛋白质DJ-1对肉品质变化的影响机制

为探究宰后秦川牛成熟期间核酸脱甘糖酶DJ-1蛋白表达对肉品质的影响,以25月龄秦川牛背最长肌为研究对象,测定其在4℃条件下成熟0、2、4、6、8 d时的肉品质、DJ-1表达量及活性氧(reaction oxygen species,ROS)相对含量,并对DJ-1表达量与肉品质指标及ROS进行相关性分析;基于4D-非标定量(4D-label free quantification,4D-LFQ)蛋白质组学筛选DJ-1并分析相关差异蛋白。结果表明:随成熟时间的延长,pH值呈先减小后增大趋势,L^(*)值、a^(*)值、剪切力、离心损失和滴水损失呈先增大后减小趋势,b^(*)、ROS、DJ-1表达量呈上升趋势;DJ-1表达量与离心损失、L^(*)值、b^(*)值和ROS相对含量呈极显著正相关(P<0.01),与pH值呈极显著负相关(P<0.01),与剪切力呈显著负相关(P<0.05),与a^(*)值和滴水损失无显著相关性(P>0.05)。故宰后成熟期间DJ-1表达量变化与牛肉嫩度密切相关。4D-LFQ蛋白质组学鉴定出DJ-1及其功能相关的差异蛋白在细胞内通过发挥蛋白质均二聚活性并与激酶、离子通道和泛素蛋白酶等结合,同时通过蛋白酶体蛋白分解、糖酵解以及氧化应激反应对凋亡信号通路的调控等,促进宰后秦川牛肌肉结构发生变化,并经过复杂的生物化学反应引起细胞内环境改变,进而影响秦川牛的嫩度等品质。

瑞香素调控DJ-1表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的影响

目的探讨中药活性成分瑞香素调控DJ-1表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的影响。方法以子宫内膜癌Ishikawa细胞为研究对象,CCK-8法分析瑞香素对Ishikawa细胞增殖的影响,qRT-PCR检测瑞香素对Ishikawa细胞DJ-1 mRNA表达,流式细胞术检测瑞香素对Ishikawa细胞凋亡的影响。结果不同浓度瑞香素处理Ishikawa细胞后,细胞增殖抑制率较对照组明显增加,且呈现时间-浓度依赖性,瑞香素处理Ishikawa细胞48 h,抑制率IC50值为78μmol/L;与对照组相比,78μmol/L瑞香素处理Ishikawa细胞48 h,其DJ-1mRNA表达量明显降低(P<0.05),同时早期凋亡率(P<0.01)和晚期凋亡率(P<0.05)均明显升高。结论瑞香素可通过降调DJ-1的表达促进子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡,并呈剂量依赖关系。

牦牛DJ-1基因克隆、生物信息学及组织表达分析

为了研究牦牛DJ-1基因的结构及功能,为后续深入研究牦牛DJ-1基因的生物学功能提供了重要的理论依据。以美仁牦牛脂肪组织cDNA为模板,利用RT-PCR克隆牦牛DJ-1基因的编码区序列(CDS),并且利用基因序列进行生物信息学分析,预测结构域及蛋白质理化性质等,再利用RT-qPCR技术进行组织表达分析。结果表明,美仁牦牛DJ-1基因的CDS区全长570 bp,共编码189个氨基酸;牦牛DJ-1结构域预测显示,在DJ-1氨基酸序列的29—168位中有1个含有Pfam的PfpI结构域;通过对DJ-1蛋白结构和功能进行预测,结果显示,无跨膜结构且无信号肽区域,分子质量20.03531 ku,原子总数2870,理论等电点6.84,不稳定系数28.37,表示为稳定的蛋白质;脂肪系数101.11,总平均亲水系数-0.004,为亲水蛋白,共有11个磷酸化位点;同时,亚细胞定位预测结果表明,美仁牦牛DJ-1蛋白主要分布于细胞质和线粒体中,系统进化树表明,美仁牦牛与野牦牛和欧洲牛亲缘关系最近,与北极狐和宽吻海牛亲缘关系最远;RT-qPCR结果表明,在成年美仁牦牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肌肉、脂肪和睾丸组织中均有所表达,在心脏组织和肌肉组织中表达水平最高,在肝脏和睾丸组织中表达水平最低。

非小细胞肺癌患者血清中DJ-1、sMICA的表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌患者血清中DJ-1、sMICA的表达及临床意义。方法选取非小细胞肺癌患者202例纳入观察组,同时期选取肺部良性病变患者40例纳入A组,并选取健康体检者30名纳入B组。根据观察组预后状态分为生存组(n=190)和死亡组(n=12)。采用酶联免疫吸附法检测血清DJ-1、sMICA水平,统计3组血清DJ-1、sMICA水平。分析观察组患者血清DJ-1、sMICA水平与临床病理特征的关系,COX回归分析患者预后影响因素。结果3组血清DJ-1、sMICA水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);组间比较,观察组血清DJ-1、sMICA水平均高于A组和B组(P<0.05),A组和B组差异无统计学意义(P>0.05)。NSCLC患者TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的血清DJ-1、sMICA水平均高于Ⅰ~Ⅱ期,有淋巴结转移患者血清DJ-1、sMICA水平均高于无淋巴结转移患者,P<0.05;死亡组血清DJ-1、sMICA水平高于生存组,P<0.05。血清DJ-1水平上升、sMICA水平上升、淋巴结转移、Ⅲ~Ⅳ期均为影响患者预后的危险因素(P<0.05)。结论非小细胞肺癌患者血清中DJ-1、sMICA的表达水平与临床病理特征密切相关,血清DJ-1水平上升、sMICA水平上升、淋巴结转移和Ⅲ~Ⅳ期是非小细胞肺癌患者预后的危险因素。

二烯丙基二硫增强DJ-1过表达人胃癌SGC7901细胞对5-FU的敏感性

目的 探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)是否增强DJ-1(protein/nucleic acid deglycase,蛋白/核酸去糖化酶)过表达人胃癌SGC7901细胞对5-FU(5-fluorouracil, 5-氟尿嘧啶)的敏感性。方法 实验分为Control组、DADS组、VCR(Vincristine,长春新碱)组、VCR+DADS组、DJ-1组、DJ-1+DADS组;MTT检测DADS对5-FU抑制细胞增殖的影响;流式细胞术检测DADS对细胞凋亡的影响;qRT-PCR、Western blot、免疫荧光检测DADS对耐药相关基因表达的影响。结果 DADS增强5-FU对VCR耐药细胞和DJ-1过表达细胞增殖的抑制作用;DADS诱导VCR耐药细胞凋亡;DADS下调DJ-1表达、诱导DJ-1过表达细胞凋亡;过表达DJ-1上调P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)、Bcl-2、XIAP(X连锁凋亡抑制蛋白),下调caspase-3表达;DADS降低DJ-1过表达细胞和VCR耐药细胞P-gp、Bcl-2、XIAP,升高caspase-3表达。结论 DADS能增强DJ-1过表达细胞对5-FU的敏感性,与其拮抗DJ-1介导的P-gp、Bcl-2、XIAP上调、caspase-3下调有关。

南蛇藤提取物通过DJ-1/PTEN/FAK轴抑制非小细胞肺癌侵袭转移

目的研究南蛇藤提取物(Celastrus orbiculatus Thunb.Extract,COE)抑制非小细胞肺癌侵袭转移的具体机制。方法通过CCK-8法测定COE抑制H1299细胞的生物活性,并依此选取低毒浓度进行细胞侵袭转移的功能研究。使用伤口愈合实验和高内涵成像追踪细胞轨迹对细胞运动功能进行测定。通过Western bolt实验进行分子层面的研究,探究COE抑制肺癌侵袭转移的具体分子机制。实验的分组采用剂量梯度进行设置,分别为Control组(0.05%DMSO),COE组:20,40,80μg/mL。结果COE以剂量依赖的形式明显抑制了H1299的细胞活性。伤口愈合实验结果显示,COE显著抑制了H1299细胞的迁徙能力,统计分析显示差异有显著统计学意义。高内涵成像实时动态追踪细胞轨迹显示,80μg/mL浓度的COE显著抑制了H1299细胞的迁徙能力,表现在运动速度的降低和均方位移量的下降。Western bolt实验结果表明,COE通过DJ-1/PTEN/FAK轴抑制非小细胞侵袭转移。蛋白质印迹的归一化分析均具有统计学意义。结论南蛇藤提取物能在低细胞毒浓度下通过DJ-1/PTEN/FAK轴抑制非小细胞侵袭转移。

DJ-1/Nrf2在精索静脉曲张相关性弱精症生精细胞氧化应激中的表达及意义

目的:考察蛋白DJ-1(DJ-1)/稳定核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)在精索静脉曲张相关性弱精症患者生精细胞氧化应激中的表达及意义。方法:收集本院2021年12月-2023年12月收治的120例确诊为精索静脉曲张相关性弱精症的男性患者临床资料,60例为新诊断患者纳入新诊断病例组,60例为接受维生素C联合维生素E治疗3个月的患者纳入病例治疗组;同期婚前健康检查健康男性40例为对照组。检测3组精液生精细胞形态、精液生精细胞的DJ-1、Nrf2蛋白及mRNA,外周血氧化应激[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)]、DJ-1、Nrf2。结果:3组年龄、体质指数、精液体积及精子尾部畸形率均无差异(P>0.05);对照组、病例治疗组、新诊断病例组精子正常形态依次降低,精子头畸形率、体畸形率、头体环合畸形率依次增高,生精细胞DJ-1(0.35±0.11、0.71±0.16、0.89±0.12)、Nrf2蛋白(0.31±0.09、0.62±0.14、0.78±0.13)及mRNA均依次增高,血清MDA、DJ-1、Nrf2依次增高,SOD、GSH-Px依次降低(均P<0.05)。结论:激活DJ-1/Nrf2通路有助于增强精索静脉曲张相关性弱精症生精细胞的抗氧化能力,保护细胞免受由氧化应激引起的损伤,DJ-1/Nrf2通路或是精索静脉曲张相关性弱精症的治疗的潜在分子靶点。

siRNA抑制DJ-1基因表达对肺鳞癌SK-MES-1细胞生物学行为的影响

目的:采用RNA干扰技术下调DJ-1基因在肺鳞癌细胞SK-MES-1中的表达,探讨DJ-1表达下调对SK-MES-1细胞生物学行为的影响,以期探讨DJ-1基因的功能。方法:构建靶向DJ-1基因siRNA慢病毒载体(重组慢病毒中有绿色荧光蛋白真核表达框),感染SK-MES-1细胞(DJ-1siRNA组),并设立慢病毒载体对照组(Control-siRNA组)及空白对照组。荧光显微镜下观察并计算感染效率,Western印迹检测各组细胞中DJ-1蛋白表达水平,M法检测细胞增殖能力,流式细胞术测定细胞周期,Transwell小室实验检测细胞体外迁移侵袭能力。结果:与Control-siRNA组及空白对照组比较,DJ-1 siRNA组的DJ-1蛋白表达受到抑制、细胞增殖能力明显减弱(P<0.01)、G1/G2期细胞数增多和S期细胞数减少表明细胞周期受阻、细胞体外迁移和侵袭能力显著减弱(P<0.01)。结论:DJ-1基因具有促进肺鳞癌细胞SK-MES-1细胞的增殖和体外迁移侵袭的作用。

以DJ-1蛋白为靶点治疗肝纤维化的研究进展

肝纤维化是肝硬化演变过程中的一个重要阶段,其病理学特征主要是细胞外基质在肝内过量沉积,活化的肝星状细胞是肝纤维化的病理中心环节。许多细胞因子和信号通路已被证实参与肝纤维化或肝星状细胞的激活过程,但其中很多靶点在肝纤维化中的作用尚没有完全定论。近年来,已有研究提出DJ-1蛋白将成为治疗肝纤维化潜在的分子靶点,DJ-1可通过调控肝细胞内氧自由基水平、肝Kupffer细胞氧自由基水平、炎症细胞和吞噬细胞浸润等延缓肝纤维化的进程。该文从肝纤维化与氧化应激的关系、DJ-1蛋白的概述、DJ-1在治疗肝纤维化中的作用机制等方面综述了DJ-1蛋白在治疗肝纤维化中的作用及研究进展,并分析其作为治疗肝纤维化新靶点的利弊及应用前景。

肿瘤标志物DJ-1、NSE、CYFRA21-1和CEA联合检测在肺癌诊断中的应用价值

目的探讨肿瘤标志物DJ-1蛋白(DJ-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段21-1(CYFRA21-1)及癌胚抗原(CEA)在肺癌患者血清中的水平以及在肺癌诊断中的价值。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清DJ-1蛋白,采用电化学发光法(ECLIA)检测血清NSE、CYFRA21-1和CEA水平,比较分析肺癌组、肺部良性疾病组和健康对照组的各60例病例。结果肺癌组的4种血清肿瘤标志物水平均高于肺部良性疾病组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01);肺癌病理类型中鳞癌中有较高的DJ-1和CYFRA21-1水平,腺癌中有较高的CEA水平,而小细胞癌中有较高的NSE水平;以上4种肿瘤标志物联合检测肺癌的诊断价值最高,灵敏度为85%,特异度为78.3%,约登指数达到0.63。结论 DJ-1、NSE、CYFRA21-1及CEA联合检测对肺癌的诊断有一定的价值,可以作为高危人群初步筛查的指标。

瘀血痹含药血清通过DJ-1/GPX4抑制心肌细胞铁死亡的作用机制

目的探讨瘀血痹含药血清对心肌HL-1细胞铁死亡的影响及对DJ-1/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路的作用机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、瘀血痹含药血清低剂量组(0.1 g/kg)、中剂量组(0.2 g/kg)、高剂量组(0.4 g/kg),正常组生理盐水灌胃,并制备含药血清。HL-1心肌细胞分为:正常组,模型组,瘀血痹含药血清低、中、高剂量组。各组细胞按相应剂量药物处理并培养24 h后,检测各组HL-1细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平,Western Blot法检测各组HL-1细胞DJ-1、p53、GPX4和重组人铁蛋白重链(FTH1)蛋白表达水平,RT-PCR检测各组HL-1细胞心房钠尿肽(ANP)和B型利钠肽(BNP mRNA)水平。结果与正常组比较,模型组HL-1细胞ROS、MDA、ANP和BNP mRNA以及p53蛋白表达显著升高(P<0.01),T-SOD、GSH、DJ-1、GPX4和FTH1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,瘀血痹含药血清低、中、高剂量组HL-1细胞ROS、MDA,ANP和BNP mRNA以及p53蛋白表达显著降低(P<0.01),T-SOD、GSH、DJ-1、GPX4和FTH1蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论瘀血痹含药可能通过激活DJ-1/GPX4信号通路抑制心肌细胞铁死亡,改善心肌肥大,具有抗心力衰竭的作用。

DJ-1蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨DJ-1蛋白在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法收集2011年1月至2014年12月140例胃癌组织、54例癌旁组织以及64例正常胃黏膜组织,采用免疫组化法检测上述组织中DJ-1蛋白的表达,分析其表达与胃癌临床病理特征和总生存时间(OS)的关系。结果DJ-1蛋白在胃癌组织中的高表达率为92.1%(129/140),高于正常胃黏膜组织的17.2%(11/64)和癌旁组织的59.3%(32/54),差异有统计学意义(P<0.01);DJ-1在癌旁组织中的高表达率高于正常胃黏膜组织(P<0.01)。DJ-1蛋白表达与胃癌的TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),有淋巴结转移和TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的胃癌组织中DJ-1表达水平明显升高;其表达与性别、年龄和分化程度无关(P>0.05)。全组胃癌患者的中位OS为34.9(95%CI:23.8~46.8)个月;DJ-1高表达患者的中位OS为32.3(95%CI:21.4~42.5)个月,劣于DJ-1低表达患者的52.3(95%CI:44.2~59.3)个月,差异有统计学意义(P=0.0022)。结论DJ-1蛋白与胃癌的发生、淋巴结转移、TNM分期和预后有关,可能成为胃癌诊断与预后的标志物。

卵巢癌患者血清HK10、DJ-1的表达及意义

目的探讨卵巢癌患者血清人激肽释放酶10(HK-10)、DJ-1蛋白的表达及意义。方法选取97例卵巢癌患者(卵巢癌组),并于同期收集85例良性卵巢肿瘤患者(良性卵巢肿瘤组)和50例其他良性妇科疾病患者(对照组),采用酶联免疫吸附法检测各组血清HK-10、DJ-1水平,分析其与卵巢癌患者临床病理特征的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)评估血清HK-10、DJ-1对卵巢癌的诊断价值。结果卵巢癌组、良性卵巢肿瘤组血清HK-10、DJ-1水平高于对照组,且卵巢癌组高于良性卵巢肿瘤组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。国际妇产科联盟分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤细胞低分化、有淋巴结转移的卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平高于Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移者(P均<0.05)。Pearson积矩相关分析结果显示,卵巢癌患者血清HK-10与DJ-1呈正相关(r=0.728,P<0.05)。血清HK-10、DJ-1联合检测诊断卵巢癌的AUC为0.944(95%CI:0.889~0.992),灵敏度、特异度分别为0.93、0.97,准确度为0.96。结论卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平升高,并与癌细胞的侵袭转移密切相关;二者联合检测有助于卵巢癌的早期诊断。

DJ-1在甲状腺癌中的表达及意义

目的探讨癌基因DJ-1在甲状腺癌中的表达效应及其意义。方法采用免疫组织化学方法 (SABC法)检测74例甲状腺癌和10例正常甲状腺组织中DJ-1蛋白的表达,分析DJ-1蛋白在正常甲状腺组织与甲状腺癌之间的表达差异,以及4种甲状腺癌病理类型间的表达差异。结果 DJ-1在正常甲状腺组织中未见表达,而在甲状腺癌中呈显著表达(94.6%);33例乳头状癌中DJ-1全部呈阳性表达(100.0%),19例滤泡癌中有17例呈阳性表达(89.5%),13例髓样癌中有12例呈阳性表达(92.3%),9例未分化癌中有8例呈阳性表达(88.9%)。DJ-1表达水平在甲状腺癌不同病理类型间比较未见统计学差异(P>0.05)。结论癌基因DJ-1特异性表达于甲状腺癌组织中,可能参与甲状腺癌的发生,但与其发展及预后无关。

DJ-1蛋白在喉鳞状细胞癌与Hep-2细胞系表达

【目的】探讨DJ-1基因在喉鳞状细胞癌组织及Hep-2细胞系中的表达特征。【方法】采用间接免疫荧光方法,检测15例喉鳞状细胞癌手术切除癌组织、癌旁组织、正常黏膜标本和Hep-2细胞系的DJ-1蛋白。【结果】喉鳞状细胞癌组织与Hep-2细胞系中DJ-1蛋白均有表达;DJ-1蛋白在喉鳞状细胞癌组织的表达水平分别高于癌旁组织、正常黏膜组织,差异有统计学意义(F=8.098,P=0.002);低分化喉癌较高分化喉癌的DJ-1水平增高,差异有统计学意义(t=3.099,P=0.008);喉癌的临床分期和年龄与DJ-1蛋白的表达没有相关性(t=0.476,P=0.642;t=0.019,P=0.985)。【结论】喉鳞状细胞癌组织及Hep-2细胞系中均有DJ-1蛋白的表达,喉鳞癌组织内的表达高于癌旁组织和黏膜组织;DJ-1基因在喉鳞状细胞癌组织中的表达可能提示它参与了喉癌的发生发展的有关过程,为基因治疗提供了理论基础。

DJ-1拮抗ROS介导Beclin-1上调在缺氧复氧HL-1心肌细胞中的作用

目的探讨DJ-1拮抗氧化应激诱导过度自噬在缺血再灌注心肌损伤中的保护机制。方法以慢病毒为shRNA DJ-1载体感染心肌HL-1细胞系构建缺氧复氧损伤模型。Western blot检测shRNA DJ-1沉默效率和LC3、Beclin-1和DJ-1蛋白表达,流式细胞术AnnexinⅤ和PI染色分别检测凋亡和坏死,MDC和DCFH-DA染色分别检测细胞内自噬体和氧自由基(ROS)水平,激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬体数量变化。结果 1)慢病毒为shRNADJ-1载体感染心肌HL-1细胞后DJ-1表达水平下调;2)缺氧复氧显著上调ROS,而shDJ-1加剧缺氧复氧ROS水平上调,NAC可以有效下调细胞内ROS水平;3)Western blot检测LC3、Beclin-1自噬标志蛋白和MDC染色细胞内自噬体结果均认为缺氧复氧促进自噬,而shDJ-1加剧缺氧复氧导致的自噬上调,NAC抑制自噬上调;4)流式细胞术检测显示shDJ-1增加缺氧复氧凋亡,NAC可以减少心肌细胞凋亡。结论 DJ-1拮抗ROS介导Beclin-1上调参与保护缺血再灌注心肌。

DJ-1基因L10P突变导致氧化应激和线粒体功能障碍（英文）

目的:探讨DJ-1基因L10P突变对细胞线粒体功能的影响。方法:应用流式细胞仪、分光光度计、电镜等技术对稳定表达空载体、野生型DJ-1蛋白、L10P突变型DJ-1蛋白的HEK293单克隆细胞株的生长活力、活性氧、膜电位、线粒体复合体酶I活性及线粒体形态进行分析。结果:与空载体组相比较,L10P突变型DJ-1组细胞内活性氧增高,细胞活力、膜电位、线粒体复合体I活性降低,线粒体含量减少(P<0.05),出现线粒体肿胀,甚至线粒体空泡变性,特别是在鱼藤酮的诱导下更明显;野生型DJ-1组细胞内活性氧均较低,细胞活力、膜电位、线粒体复合体I活性均较高(P<0.05),特别是在鱼藤酮的诱导下更明显。结论:L10P突变后使野生型DJ-1蛋白的抗氧化应激能力丧失,并对线粒体的正常功能存在影响。

突变DJ-1转基因小鼠模型的建立

目的探讨DJ-1L166P突变基因在帕金森病发生中的作用。方法构建pcDNA3.1-myc-his-DJ-1L166P真核表达载体,利用显微注射方法将DJ-1L166P基因片段(约3.9kb)导入BDF1小鼠受精卵雄原核并移植到同期受孕的ICR假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织DNA进行聚合酶链反应和Southern blot检测,对Southern blot鉴定阳性的转基因小鼠进行逆转录聚合酶链反应和Western blot检测。结果共产生20只子代小鼠,1号和7号为DJ-1L166P转基因阳性小鼠。1号转基因小鼠大脑、小脑、肝、肺、肾、睾丸有不同程度的DJ-1mRNA表达,均高于正常对照小鼠,但只有大脑中DJ-1mRNA的表达水平显著高于正常对照小鼠(P<0.05);7号转基因小鼠只有肝、肺组织中有DJ-1mRNA表达,也高于正常对照小鼠,但差异无统计学意义。只有1号小鼠大脑有His标签蛋白的表达。结论成功获得1只DJ-1L166P基因突变转基因小鼠模型,为课题的下一步实验研究打下良好的基础。