DJ-1癌基因在肾间质纤维化中表达的实验研究

目的观察DJ-1癌基因在肾纤维化过程中表达水平、细胞内定位及高表达DJ-1基因对人肾小管上皮细胞E钙黏蛋白（E—cadherin）、波形蛋白（vimentin）蛋白表达和β连环素（β-catenin）酪氨酸磷酸化水平的影响。方法体外实验以人肾小管上皮细胞为研究对象，10μg／LTGF-β1刺激72h诱导人肾小管上皮细胞转分化；Western印迹法检测正常组和TGF—β1干预组细胞内E—cadherin、vimentin和DJ-1蛋白表达；RT—PCR法检测两组细胞内DJ-1 mRNA表达水平；应用激光共聚焦显微镜观察DJ-1在细胞内的定位。体内实验以SD大鼠为研究对象，5／6肾切除法制作慢性肾纤维化模型；常规检测BUN和Scr水平；Masson染色检测肾组织纤维化水平；免疫组化法检测肾组织内DJ-1蛋白的表达和分布。脂质体法介导含野生型DJ-1基因的重组真核表达质粒pEGFP—N1-DJ-1或空载体转染人肾小管上皮细胞，倒置荧光显微镜和Western印迹法鉴定转染效率后，Western印迹法检测正常组、pEGFP—N1-DJ-1转染组和空载体转染组细胞内E—cadherin、vimentin蛋白的表达及各组β—catenin酪氨酸磷酸化水平。结果正常组细胞表达E—cadherin和DJ-1，几乎不表达vimentin；TGF—β1干预组细胞表达vimentin，表达较少E—cadherin，DJ-1 mRNA和蛋白表达均较正常组细胞显著增多（P〈0．05）。DJ-1在正常细胞内大多分布在细胞质，部分分布在细胞核；在转分化细胞内胞质和胞核内表达均有增加，且胞核内增加更显著。假手术组大鼠肾功能正常，肾组织内未见纤维组织，DJ-1主要表达于肾小管，肾小球内几乎没有表达。模型组大鼠肾功能不全，肾组织内可见明显纤维化结构，肾小管内DJ-1表达明显增加。pEGFP—N1-DJ-1转染组较正常组和空载体转染组细胞内DJ-1和vimentin蛋白表达明显增加且β-catenin酪氨酸磷酸化水平升高，而E—cadherin蛋白表达减少。结论DJ-1基因高表达可能促进了肾间质纤维化。

DJ-1和HSP27在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的差异表达

目的:研究垂体腺瘤中癌基因蛋白DJ-1、热休克蛋白27(HSP27)的表达是否与侵袭性相关。方法:采用Western印迹法检测侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤各20例组织中DJ-1和HSP27蛋白的表达,并分析DJ-1和HSP27蛋白水平与侵袭性的关系。结果:20例侵袭性垂体腺瘤中DJ-1和HSP27蛋白表达的强阳性率分别为70%(14/20)和80%(16/20),20例非侵袭性垂体腺瘤中DJ-1和HSP27蛋白表达的强阳性率均为10%(2/20),侵袭性垂体腺瘤明显高于非侵袭性垂体腺瘤(P<0.05)。DJ-1和HSP27的表达水平与垂体腺瘤侵袭性之间均呈正相关(分别r=0.350,P<0.05;r=0.400,P<0.05)。结论:DJ-1和HSP27在侵袭性垂体腺瘤中的异常表达可能在侵袭性垂体腺瘤的形成和发展中发挥重要作用,与垂体腺瘤的侵袭性密切相关。