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牛DKK2基因pcDNA3.1表达载体的构建 被引量:2
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作者 陶虎 熊琪 +5 位作者 李晓峰 索效军 张年 杨前平 刘洋 陈明新 《湖北农业科学》 2015年第22期5751-5753,5760,共4页
DKK2基因是Wnt信号通路的关键抑制因子,在胚胎发育、颗粒细胞生成等过程中发挥重要作用。扩增了牛DKK2基因CDS序列,构建了DKK2基因pc DNA3.1真核表达载体;为进一步验证载体在细胞内的表达效果,将表达质粒瞬时转染CHO细胞,利用q RT-PCR和... DKK2基因是Wnt信号通路的关键抑制因子,在胚胎发育、颗粒细胞生成等过程中发挥重要作用。扩增了牛DKK2基因CDS序列,构建了DKK2基因pc DNA3.1真核表达载体;为进一步验证载体在细胞内的表达效果,将表达质粒瞬时转染CHO细胞,利用q RT-PCR和Western blot检测DKK2的表达情况。结果表明,在CHO细胞中转染DKK2基因的真核表达载体质粒,其m RNA和蛋白质表达量均显著上升,表明已成功构建了DKK2基因表达载体,为下一步开展DKK2基因功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 dkk2基因 pcDNA3.1表达载体 细胞转染 基因超表达
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FTO减少DKK2的m^(6)A修饰和促进DKK2表达而减少心肌纤维化 被引量:1
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作者 李溪 王坤荣 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期807-813,共7页
目的探讨肥胖相关蛋白(FTO)在心肌纤维化过程中与dickkopf2(DKK2)的N~6甲基腺苷(m^(6)A)修饰、表达水平间的关系。方法心肌成纤维细胞分为对照组、AngⅡ处理组、AngⅡ+EV组(空载体和阴性siRNA转染后用AngⅡ处理)、AngⅡ+FTO-O组(FTO过... 目的探讨肥胖相关蛋白(FTO)在心肌纤维化过程中与dickkopf2(DKK2)的N~6甲基腺苷(m^(6)A)修饰、表达水平间的关系。方法心肌成纤维细胞分为对照组、AngⅡ处理组、AngⅡ+EV组(空载体和阴性siRNA转染后用AngⅡ处理)、AngⅡ+FTO-O组(FTO过表达载体转染后用AngⅡ处理)和AngⅡ+FTO-O+DKK2 siRNA组(FTO过表达载体和DKK2 siRNA共转染后用AngⅡ处理);小鼠按对照组(假手术组)、AMI组(构建急性心肌梗死模型)、AMI+EV组(AMI小鼠腹腔注射含空载体的纳米颗粒)和AMI+FTO-O组(AMI小鼠腹腔注射含FTO过表达载体的纳米颗粒)进行处理。用荧光定量PCR和Western blotting检测FTO、DKK2的表达,RNA结合蛋白免疫沉淀检测DKK2的m^(6)A修饰水平,CCK-8检测细胞存活力,评估AMI小鼠的心功能,HE和Masson染色检测小鼠心脏病理变化。结果AngⅡ抑制FTO的表达,进而增强DKK2的m^(6)A修饰水平而下调DKK2的表达(P<0.05);AngⅡ促进细胞存活和增强α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的表达(P<0.05);FTO过表达能显著阻断AngⅡ的上述调控作用(P<0.05),不过DKK2 siRNA能拮抗FTO过表达对AngⅡ的影响作用。FTO和DKK2在AMI小鼠中的表达下调,且DKK2的m^(6)A修饰水平增加(P<0.05);FTO过表达时,FTO和DKK2在AMI小鼠中的表达显著恢复,DKK2的m^(6)A修饰水平明显减少(P<0.05),且心肌纤维化水平降低,心脏病理变化明显有所改善。结论FTO可通过减少DKK2的m^(6)A修饰水平而促进DKK2的表达,进而抑制心肌纤维化进展,表明FTO/DKK2通路是调控心肌纤维化的关键通路。 展开更多
关键词 急性心肌梗死 心肌纤维化 肥胖相关蛋白(FTO) N~6甲基腺苷(m^(6)A) dkk2
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下调DKK2表达对小鼠子宫内膜基质细胞增殖和凋亡的影响
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作者 纪红军 胡进 +2 位作者 肖成 牛亚茹 徐银学 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期138-144,共7页
[目的]本试验旨在研究RNA干扰Dickkopf-2基因(DKK2)表达对小鼠子宫内膜基质细胞增殖和凋亡的影响。[方法]设计并合成3条针对DKK2基因的siRNA,在转染试剂LipofectamineTM2000介导下转染小鼠子宫内膜基质细胞,用RT-q PCR法检测转染前、后D... [目的]本试验旨在研究RNA干扰Dickkopf-2基因(DKK2)表达对小鼠子宫内膜基质细胞增殖和凋亡的影响。[方法]设计并合成3条针对DKK2基因的siRNA,在转染试剂LipofectamineTM2000介导下转染小鼠子宫内膜基质细胞,用RT-q PCR法检测转染前、后DKK2基因的表达量,筛选干扰效率最高的1条siRNA。用该siRNA转染小鼠子宫内膜基质细胞24 h,利用Caspase3活性和Annexin-V FITC/PI双染法检测干扰DKK2基因对细胞凋亡的影响;用CCK8细胞计数法检测该siRNA干扰DKK2基因不同时间对小鼠子宫内膜基质细胞增殖的影响。[结果]3条siRNA均能有效抑制DKK2基因的表达,RT-q PCR结果显示DKK2基因表达水平显著降低(siRNA2,P<0.05;siRNA1、siRNA3,P<0.01);CCK8法结果显示siRNA干扰DKK2后对小鼠子宫内膜基质细胞有明显的抑制作用(24 h、48 h,P<0.05);Caspase3活性检测和Annexin-V FITC/PI双染法结果显示,siRNA1转染小鼠子宫内膜基质细胞24 h后,Caspase3活性明显增加(P<0.01),细胞凋亡率明显增加(P<0.01),凋亡率为18.48%。[结论]利用RNA干扰技术沉默DKK2基因的表达可以明显抑制小鼠子宫内膜基质细胞的增殖并促进凋亡。 展开更多
关键词 dkk2基因 SIRNA干扰 基质细胞 凋亡
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DKK2基因质粒的构建及其在敖汉细毛羊成纤维细胞中表达量的研究
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作者 王雷 刘猛 +2 位作者 荣恒 柳楠 贺建宁 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2022年第5期131-136,共6页
本研究旨在探究DKK2基因过表达后在敖汉细毛羊成纤维细胞中的表达量变化。采集40日龄敖汉细毛羊胎羊皮肤组织作为实验样品,首先参照GenBank中绵羊的DKK2基因序列信息进行引物设计,通过PCR反应对DKK2基因进行扩增,并与pGM-T载体进行连接... 本研究旨在探究DKK2基因过表达后在敖汉细毛羊成纤维细胞中的表达量变化。采集40日龄敖汉细毛羊胎羊皮肤组织作为实验样品,首先参照GenBank中绵羊的DKK2基因序列信息进行引物设计,通过PCR反应对DKK2基因进行扩增,并与pGM-T载体进行连接反应,构建了pGM-T-DKK2重组质粒;将克隆载体转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,进行目的片段的克隆;鉴定正确后构建pcDNA3.1-DKK2重组质粒;并将pcDNA3.1-DKK2重组质粒转染敖汉细毛羊成纤维细胞,检测过表达载体对成纤维细胞DKK2基因的表达水平变化。酶切、测序鉴定结果显示,成功构建了pcDNA3.1-DKK2过表达载体,并且转染敖汉细毛羊成纤维细胞后DKK2基因实验组的表达量极显著高于对照组;Western Blot实验结果显示,实验组的蛋白表达水平极显著高于对照组。本实验成功构建了pcDNA3.1-DKK2过表达载体,并成功转染了敖汉细毛羊成纤维细胞,为进一步研究DKK2基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 敖汉细毛羊 dkk2基因 过表达 成纤维细胞
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DKK2基因启动子甲基化及高危HPV感染在宫颈癌中的临床意义
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作者 张娴 武玉 张艳 《现代医药卫生》 2022年第16期2730-2734,共5页
目的探讨DKK2基因启动子甲基化及高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染在宫颈癌中的临床意义。方法收集2016年5月至2017年11月该院确诊的79例宫颈癌患者(宫颈癌组)及63例宫颈癌前病变患者(癌前病变组)组织标本,其中高级别鳞状上皮内病变(HSIL... 目的探讨DKK2基因启动子甲基化及高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染在宫颈癌中的临床意义。方法收集2016年5月至2017年11月该院确诊的79例宫颈癌患者(宫颈癌组)及63例宫颈癌前病变患者(癌前病变组)组织标本,其中高级别鳞状上皮内病变(HSIL)38例,低级别鳞状上皮内病变(LSIL)25例。同时选取29例子宫平滑肌瘤行子宫全切的患者作为对照组。比较3组患者DKK2基因启动子甲基化及HR-HPV感染情况。结果癌前病变组中HSIL患者DKK2基因启动子甲基化率与宫颈癌组、对照组患者及癌前病变组中LSIL患者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3组患者HR-HPV感染率及感染者DKK2基因启动子甲基化率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组中,HPV16/18阳性患者DKK2基因启动子甲基化率高于非HPV16/18阳性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。癌前病变组中,HPV16/18阳性患者DKK2基因启动子甲基化率高于非HPV16/18阳性患者,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论DKK2常因其启动子高甲基化而失活,与宫颈癌的发生发展相关,可能是一种潜在的宫颈癌分子标志物。 展开更多
关键词 宫颈癌 癌前病变 dkk2甲基化 高危型人乳头瘤病毒
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膀胱癌病灶内癌基因DKK2、SPOCK1表达量的变化及其与癌细胞增殖、侵袭的相关性 被引量:3
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作者 拓志勇 魏秀丽 夏勇 《海南医学院学报》 CAS 2019年第3期169-172,共4页
目的:研究膀胱癌病灶内癌基因Dickkopf 2(DKK2)、sparc/osteonectin,cwcv and kazal-likedomains proteoglycan 1(SPOCK1)表达量的变化及其与癌细胞增殖、侵袭的相关性。方法:收集我院手术切除的膀胱癌病灶及癌旁病灶,采用试剂盒测定DKK... 目的:研究膀胱癌病灶内癌基因Dickkopf 2(DKK2)、sparc/osteonectin,cwcv and kazal-likedomains proteoglycan 1(SPOCK1)表达量的变化及其与癌细胞增殖、侵袭的相关性。方法:收集我院手术切除的膀胱癌病灶及癌旁病灶,采用试剂盒测定DKK2、SPOCK1及增殖基因、侵袭基因的mRNA表达量。结果:膀胱癌病灶内DKK2、细胞增殖抑制基因(HSG)、p16、细胞粘附分子-1(CADM1)、金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP2)、TIMP4的mRNA表达量明显低于癌旁病灶,SPOCK1、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、c-myc、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)的mRNA表达量明显高于癌旁病灶;DKK2与β-catenin、CyclinD1、c-myc、Vimentin、MMP2呈负相关,与HSG、p16、CADM1、TIMP2、TIMP4呈正相关;SPOCK1与β-catenin、CyclinD1、c-myc、Vimentin、MMP2呈正相关,与HSG、p16、CADM1、TIMP2、TIMP4呈负相关。结论:膀胱癌病灶内癌基因DKK2的低表达、SPOCK1的高表达与增殖、侵袭基因的变化有关,可能参与病灶的生长。 展开更多
关键词 膀胱癌 dkk2 SPOCK1 增殖 侵袭
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miR-218调控DKK2在结核感染机制中的初步研究 被引量:1
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作者 李引钰 尚孟乔 +3 位作者 胡雪姣 赵珍珍 彭武 应斌武 《检验医学与临床》 CAS 2017年第23期3449-3452,共4页
目的探讨miR-218调控DKK2参与结核感染的分子机制。方法选择62例结核病患者(结核组)和64例健康体检者(对照组)作为研究对象,采用逆转录-荧光定量PCR检测miR-218及其靶基因DKK2的表达水平;在结核感染细胞模型中,分别在6、12、24h检测miR-... 目的探讨miR-218调控DKK2参与结核感染的分子机制。方法选择62例结核病患者(结核组)和64例健康体检者(对照组)作为研究对象,采用逆转录-荧光定量PCR检测miR-218及其靶基因DKK2的表达水平;在结核感染细胞模型中,分别在6、12、24h检测miR-218、DKK2及肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6的表达水平。结果与对照组比较,miR-218在结核组的表达显著下调(P<0.05),DKK2明显上调(P<0.05)。在结核感染细胞模型中,6h时miR-218的表达显著下降而DKK2表达明显升高(P<0.05);随时间延长两者的表达水平与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);在24h时TNF-α表达增高(P<0.05),IL-6出现表达下调(P<0.05)。结论结核分枝杆菌可能通过诱导宿主miR-218表达下调,靶向抑制DKK2作用减弱,Wnt通路活性降低,进而打破免疫调节平衡促进结核病的发生。 展开更多
关键词 结核病 MIR-218 dkk2 基因诊断 分子机制
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弓形虫微线体蛋白6,7,8与宿主Spata3,Dkk2蛋白相互作用的研究 被引量:1
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作者 刘卿 李法财 +3 位作者 杨文彬 刘国华 赵权 朱兴全 《经济动物学报》 CAS 2017年第2期68-74,共7页
为了研究弓形虫微线体蛋白6(MIC6)、7(MIC7)及8(MIC8)是否与宿主精子生成相关蛋白3(Spata3)和Dickkopf相关蛋白2(Dkk2)互作,首先从弓形虫RH虫株cDNA中扩增了弓形虫MIC6、MIC7及MIC8基因,并从小鼠cDNA中扩增了Spata3和Dkk2基因。然后分... 为了研究弓形虫微线体蛋白6(MIC6)、7(MIC7)及8(MIC8)是否与宿主精子生成相关蛋白3(Spata3)和Dickkopf相关蛋白2(Dkk2)互作,首先从弓形虫RH虫株cDNA中扩增了弓形虫MIC6、MIC7及MIC8基因,并从小鼠cDNA中扩增了Spata3和Dkk2基因。然后分别构建pGADT7-MIC6、pGADT7-MIC7和pGADT7-MIC8捕获载体及pGBKT7-Spata3和pGBKT-Dkk2诱饵载体。利用Clon Tech公司的MatchmakerTM Gold Yeast Two-Hybrid系统,将诱饵载体分别转化Y2HGold酵母菌,将捕获载体分别转化Y187酵母菌,最后通过酵母点对点验证分析弓形虫MIC6、MIC7和MIC8蛋白是否与宿主Spata3和Dkk2蛋白互作。结果表明:在酵母双杂交系统里MIC7和MIC8蛋白分别能够与宿主Spata3和Dkk2蛋白互作,而MIC6不能够与宿主Spata3和Dkk2蛋白互作。 展开更多
关键词 弓形虫 微线体蛋白 蛋白互作 Spata3 dkk2
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猪DKK2基因的多态性与母猪产仔数性状的关联分析 被引量:2
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作者 周佳伟 乔木 +4 位作者 吴俊静 王孝忠 刘贵生 梅书棋 彭先文 《湖北农业科学》 2020年第20期138-140,共3页
母猪的繁殖性状是猪重要经济性状之一,但由于其遗传力低,导致母猪繁殖性状常规选择进展缓慢。通过SANGER测序的方法检测DKK2基因内SNP位点,并与产仔数性状进行关联分析。结果表明,在DKK2基因第二内含子存在一个新SNP位点,根据SNP命名方... 母猪的繁殖性状是猪重要经济性状之一,但由于其遗传力低,导致母猪繁殖性状常规选择进展缓慢。通过SANGER测序的方法检测DKK2基因内SNP位点,并与产仔数性状进行关联分析。结果表明,在DKK2基因第二内含子存在一个新SNP位点,根据SNP命名方法将其命名为8:g.114967878A>G,且该SNP位点与产活仔数性状显著相关。猪DKK2基因的新SNP位点8:g.114967878A>G对猪的产活仔数性状存在潜在的调控作用。 展开更多
关键词 dkk2 SNP 产仔数
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乙型肝炎病毒X蛋白抑制肝癌细胞系中DKK2的表达 被引量:2
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作者 王晓艳 杜虹 +1 位作者 王伟 权会琴 《基础医学与临床》 CSCD 2020年第10期1348-1352,共5页
目的分析不同肝癌细胞系中乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对DKK2表达水平的影响及其可能机制。方法应用编码乙型肝炎病毒X蛋白的腺病毒(Ad-HBx)感染HepG2和SMMC7721细胞,利用免疫荧光技术和PCR技术检测X基因的表达、Western blot检测DKK2的蛋... 目的分析不同肝癌细胞系中乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对DKK2表达水平的影响及其可能机制。方法应用编码乙型肝炎病毒X蛋白的腺病毒(Ad-HBx)感染HepG2和SMMC7721细胞,利用免疫荧光技术和PCR技术检测X基因的表达、Western blot检测DKK2的蛋白表达水平;应用甲基化转移酶抑制剂(DAC)处理细胞,利用Western blot检测DKK2、Dnmt1、Dnmt3a和Dnmt3b的表达;通过沉默甲基化转移酶,利用Western blot检测DKK2的表达。结果Ad-HBx感染HepG2和SMMC7721细胞后,HBx mRNA相对表达倍数分别上调61.12倍和50.24倍(P<0.05),DKK2的蛋白表达水平分别下调1.61倍(P<0.05)和3.33倍(P<0.05),Dnmt1和Dnmt3a蛋白表达水平显著升高;相较于Ad-HBx感染组,DAC处理后DKK2蛋白表达水平上调2.27倍(P<0.05),Dnmt3a蛋白水平显著下调,Dnmt1和Dnmt3b蛋白水平无显著变化;沉默Dnmt1和Dnmt3a后,DKK2蛋白表达水平显著上调。结论HBx通过上调Dnmt1及Dnmt3a发挥甲基化作用来抑制DKK2的表达,进而激活Wnt/β-catenin信号通路,参与HBV相关肝癌的发生。 展开更多
关键词 肝癌 乙型肝炎病毒X蛋白 dkk2 WNT/Β-CATENIN 甲基化转移酶
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抑癌基因DKK2抑制儿童肾母细胞瘤细胞增殖的机制研究 被引量:2
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作者 袁桂霞 李岩 +2 位作者 冯婉琪 夏小娟 李旭 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2019年第1期14-20,共7页
目的探讨WNT信号通路调控因子DKK2在儿童肾母细胞瘤细胞和组织中的表达,及对儿童肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法通过RT-PCR、qRT-PCR和免疫蛋白印迹实验分析DKK2在儿童肾母细胞瘤细胞系和组织中的相对表... 目的探讨WNT信号通路调控因子DKK2在儿童肾母细胞瘤细胞和组织中的表达,及对儿童肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法通过RT-PCR、qRT-PCR和免疫蛋白印迹实验分析DKK2在儿童肾母细胞瘤细胞系和组织中的相对表达;将DKK2过表达的SK-NEP-1细胞设定为实验组(DKK2组),空白对照质粒组设定为对照组(Vector组),分别转染pc DNA3. 1(+)-Flag-DKK2质粒(实验组)和pc DNA3. 1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)至SK-NEP-1细胞系,RT-PCR和免疫蛋白印迹实验验证DKK2的过表达;通过CCK-8实验和细胞克隆实验分析DKK2对细胞增殖的影响;流式细胞周期和凋亡实验验证DKK2过表达对细胞增殖的作用机制;裸鼠成瘤实验验证DKK2体外对细胞增殖的影响;通过qRT-PCR、WB及免疫组化分析DKK2对细胞增殖抑制的作用机制。结果与正常肾上皮组织相比,DKK2 mRNA在儿童肾母细胞瘤细胞和组织中的中表达明显下调,差异具有统计学意义(P <0. 001);与对照组相比(100%),转染后24、48、72 h实验组细胞活性受到明显的抑制(P <0. 05),同时实验组细胞克隆形成明显受到抑制(31. 11±2. 14)%(P <0. 05);流式细胞实验发现,与对照组相比,实验组细胞明显阻滞于G1期(P <0. 001),实验组中细胞凋亡率明显升高(P <0. 001);与对照组相比,过表达DKK2后裸鼠肿瘤和体积大小明显降低(P <0. 001);过表达DKK2后,active-β-catenin及下游的基因受到了明显抑制。结论 DKK2在人皮肤肾母细胞瘤组织中表达下调,可能通过拮抗Wnt/β-catenin信号通路参与肾母细胞瘤的机制。 展开更多
关键词 儿童肾母细胞瘤 dkk2 抑癌基因 细胞增殖 WNT/Β-CATENIN
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Changes of oncogene DKK2 and SPOCK1 expression in bladder cancer lesions and their correlation with cancer cell proliferation and invasion
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作者 Zhi-Yong Tuo Xiu-Li Wei Yong Xia 《Journal of Hainan Medical University》 2019年第3期9-12,共4页
Objective: To investigate the changes of oncogene Dickkopf 2 (DKK2) and sparc/osteonectin, cwcv and kazal-like domains proteoglycan 1 (SPOCK1) expression in bladder cancer lesions and their correlation with cancer cel... Objective: To investigate the changes of oncogene Dickkopf 2 (DKK2) and sparc/osteonectin, cwcv and kazal-like domains proteoglycan 1 (SPOCK1) expression in bladder cancer lesions and their correlation with cancer cell proliferation and invasion. Methods: The bladder cancer lesions and paracancerous lesions surgically removed in our hospital between March 2016 and March 2018 were collected, and kits were used to measure the mRNA expression levels of DKK2, SPOCK1, proliferation genes and invasion genes. Results: DKK2, hyperplasia suppressor gene (HSG), p16, cell adhesion molecule-1 (CADM1), tissue inhibitor of matrix metalloproteinase 2 (TIMP2) and TIMP4 mRNA expression in bladder cancer lesions were significantly lower than those in paracancerous lesions while SPOCK1, β-catenin, CyclinD1, c-myc, Vimentin and matrix metalloproteinase 2 (MMP2) mRNA expression were significantly higher than those in paracancerous lesions;DKK2 was negatively correlated with β-catenin, CyclinD1, c-myc, Vimentin and MMP2, and positively correlated with HSG, p16, CADM1, TIMP2 and TIMP4;SPOCK1 was positively correlated with β-catenin, CyclinD1, c-myc, Vimentin and MMP2, and negatively correlated with HSG, p16, CADM1, TIMP2 and TIMP4. Conclusion: The low expression of oncogene DKK2 and the high expression of SPOCK1 in bladder cancer lesions are related to the changes of proliferation and invasion genes and may be involved in the growth of lesions. 展开更多
关键词 BLADDER cancer dkk2 SPOCK1 PROLIFERATION INVASION
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Dkk2基因对雌性小鼠卵泡发育过程的功能探究
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作者 谈峰 陈高贵 +6 位作者 陈亚茹 陈大可 彭先文 苗义良 梅书棋 周佳伟 李凤娥 《中国畜牧杂志》 CAS 2024年第11期144-153,共10页
卵巢颗粒细胞的生长对哺乳动物卵泡发育至关重要,本研究旨在探究Dkk2对雌性小鼠卵泡发育的影响,并对其潜在的调控机制进行分析。运用Crispr-cas9的方法构建Dkk2基因敲除C57BL/6小鼠,通过免疫荧光、免疫组化和蛋白免疫印迹等实验探究了D... 卵巢颗粒细胞的生长对哺乳动物卵泡发育至关重要,本研究旨在探究Dkk2对雌性小鼠卵泡发育的影响,并对其潜在的调控机制进行分析。运用Crispr-cas9的方法构建Dkk2基因敲除C57BL/6小鼠,通过免疫荧光、免疫组化和蛋白免疫印迹等实验探究了Dkk2基因敲除对小鼠卵泡发育的影响及其作用机制。结果显示:相比野生型小鼠,Dkk2基因敲除小鼠的产仔数和原始卵泡显著减少,卵泡闭锁显著升高;抑制Dkk2的表达会显著促进小鼠卵巢颗粒细胞凋亡,抑制细胞增殖;对8周龄Dkk2基因敲除小鼠的卵巢组织进行转录组测序发现,Dkk2可能通过Wnt信号通路调控卵巢颗粒细胞的增殖和凋亡。本研究揭示了Dkk2在小鼠卵泡发育过程中的作用,可为哺乳动物繁殖性状的遗传改良提供新的靶基因。 展开更多
关键词 dkk2 Wnt 卵巢颗粒细胞凋亡 卵泡发育 产仔数 小鼠
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抑癌基因DKK2增强非小细胞肺癌大分割放疗敏感性的研究
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作者 王灿 谢悦 +5 位作者 陶丹 王雨晴 谢林 刘德清 刁庆春 李晶 《中华内分泌外科杂志》 CAS 2023年第5期613-618,共6页
目的探讨Dickkopf相关蛋白2(dickkopf2,DKK2)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的表达、甲基化、预后,及与NSCLC大分割放疗敏感性的相关性和潜在作用机制。方法采用qPCR、在线数据库、Kaplan-Meier生存曲线检测DKK2在NS... 目的探讨Dickkopf相关蛋白2(dickkopf2,DKK2)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的表达、甲基化、预后,及与NSCLC大分割放疗敏感性的相关性和潜在作用机制。方法采用qPCR、在线数据库、Kaplan-Meier生存曲线检测DKK2在NSCLC样本的表达、甲基化及预后。以A549细胞为研究对象,通过克隆形成实验、免疫蛋白印迹实验等细胞生物学方法评价DKK2增强NSCLC大分割放疗敏感性的作用。结果DKK2在NSCLC样本的表达显著低于正常肺组织[(0.00042±0.00010)vs(0.00065±0.00020),P<0.001],与分级分期无明显相关性。甲基化数据库分析显示:与正常肺组织相比,DKK2在NSCLC中高甲基化,其甲基化与表达程负相关(P=0.034),DKK2的甲基化程度越高,mRNA表达越低。NSCLC患者大分割放疗敏感性为53.3%;与放疗敏感组相比,DKK2 mRNA表达在放疗抗拒组中明显下调[(0.00064±0.00020)vs(0.00043±0.00020),P<0.001],差异有统计学意义;放疗敏感组的无进展生存期(progression free survival,PFS)优于放疗抗拒组(中位PFS:21.4个月vs 4.6个月)。DKK2过表达后,使用4 Gy X-ray照射能抑制A549细胞增殖;Western blot示过表达DKK2的A549细胞株,4 Gy X-ray照射后DNA损伤标记γ-H2AX明显升高[(1.00±0.24)vs(3.22±0.41),P<0.001],差异有统计学意义。结论DKK2在NSCLC中因甲基化缺失而表达下调,可能是预测NSCLC大分割放疗敏感性的重要靶点。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 Dickkopf相关蛋白2 抑癌基因 大分割放疗
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抑癌基因DKK2过表达对人膀胱癌细胞增殖和迁移的抑制作用及其机制探讨 被引量:6
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作者 邓舜天 王开振 +6 位作者 苟晓燕 曹新丽 游方凝 唐能源 赵苹利 王晓磊 李琦晖 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1162-1171,共10页
目的 :分析dickkopf 2(DKK2)基因在人膀胱癌细胞系及膀胱癌组织中的表达水平,以及DKK2过表达对人膀胱癌细胞增殖与迁移的影响,并初步探讨其作用机制。方法:通过RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测人膀胱癌细胞系及组织中DKK 2... 目的 :分析dickkopf 2(DKK2)基因在人膀胱癌细胞系及膀胱癌组织中的表达水平,以及DKK2过表达对人膀胱癌细胞增殖与迁移的影响,并初步探讨其作用机制。方法:通过RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测人膀胱癌细胞系及组织中DKK 2基因的相对表达水平。选用DKK2低表达的膀胱癌细胞系T24,进行DKK2过表达质粒转染后,采用RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证DKK2过表达效果;然后采用CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell小室法和FCM法分别检测DKK2过表达对细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭及细胞周期的影响;进一步采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测DKK2过表达后膀胱癌细胞中增殖和迁移相关分子表达水平的变化。结果:人膀胱癌细胞系5637、T24、SW780、J82、HT-1197和HT-1376中DKK2 mRNA及蛋白表达水平均明显低于正常膀胱上皮细胞SVHUC-1(P值均<0.01);同时与正常膀胱组织及配对的癌旁组织相比,膀胱癌组织中DKK2 mRNA及蛋白的表达均明显下调(P值均<0.001)。DKK2过表达质粒转染后,膀胱癌T24细胞中DKK2 mRNA及蛋白的表达水平明显上调,而细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均受到明显抑制(P值均<0.05),同时细胞周期被阻滞于G0/G1期(P<0.001)。而且DKK2过表达的膀胱癌T24细胞中,p21和E-cadherin表达水平明显升高(P值均<0.001),cyclin D1、vimentin和N-cadherin表达水平明显降低(P值均<0.001)。结论:DKK2在人膀胱癌细胞及组织中低表达。DKK 2可能作为一个潜在的抑癌基因,参与膀胱癌进展。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 WNT信号通路 基因表达调控 细胞增殖 细胞运动 dkk2基因
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抑癌基因DKK2在乳腺癌细胞中的表达及作用机制 被引量:1
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作者 李春红 穆俊豪 +2 位作者 邵辩非 范江霞 黄小兰 《中华内分泌外科杂志》 CAS 2018年第4期313-317,共5页
目的研究抑癌基因DKK2在乳腺癌细胞中的表达及作用机制。方法通过逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测正常乳腺组织及乳腺癌(MDA-MB-231、MCF7)细胞中DKK2基因表达情况。通过转染D... 目的研究抑癌基因DKK2在乳腺癌细胞中的表达及作用机制。方法通过逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测正常乳腺组织及乳腺癌(MDA-MB-231、MCF7)细胞中DKK2基因表达情况。通过转染DKK2质粒,让两株乳腺癌细胞稳定表达DKK2后。转染前细胞做为对照组加Vector标记,转染后细胞株作为实验组加DKK2标记。进一步通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Western-blot分析DKK2、Notch信号通路及其相关因子的表达。并通过细胞功能实验(克隆形成、流式细胞凋亡实验、Transwell实验)检测细胞增殖、凋亡、迁移能力。结果DKK2在乳腺正常组织中高表达,而在乳腺癌细胞中(MDA-MB-231、MCF7)不表达。MDA-MB-231细胞转染前凋亡数为(2.57±1.18),转染后凋亡数为(49.53±8.27),转染后MDA-MB-231细胞相对转染前克隆形成率为20.44%,差异均具有统计学意义(P〈0.005)。转染后的MCF7/DKK2细胞相对转染前的MCF/Vector细胞克隆形成率为15.21%,差异有统计学意义(P〈0.005)。MB231/DKK2组细胞凋亡数为(49.53±8.27),MB231/Vector组细胞凋亡数为(2.57±1.18),差异具有统计学意义(P〈0.005)。MB231/DKK2组迁移细胞数为(112.0±8.1),MB231/Vector组细胞迁移细胞数为(178.0±12.0),差异具有统计学意义(P〈0.005)。以MB231/Vector组细胞Notch 1的mRNA表达记为1,MB231/DKK2组细胞Notch 1的mRNA表达为0.025 0,差异具有统计学意义(P〈0.01)。MB231/Vector组细胞JAG1的mRNA表达记为1,MB231/DKK2组细胞JAG1的mRNA表达为0.289 1,差异具有统计学意义(P〈0.005)。结论转染不表达DKK2的这两株乳腺癌细胞株,使其过表达DKK2后可促进细胞凋亡来抑制其增殖,且细胞迁移受到抑制。说明DKK2可通过失活Notch信号通路来发挥抑癌作用。DKK2作为抑癌基因,可能成为乳腺癌早期诊断及治疗的靶基因之一。 展开更多
关键词 乳腺癌 dkk2 NOTCH信号通路
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miR-21抑制物对A549细胞球增殖的影响及机制 被引量:3
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作者 胡欣春 魏益平 +2 位作者 喻东亮 彭金华 徐建军 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期2456-2459,共4页
目的研究miR-21抑制物在A549细胞球增殖的作用及其相关机制。方法在无血清培养基中培养A549细胞球,形成细胞球后进行CD133+CD44+表达检测。实验分为A549细胞球组:未经处理;IHN组:miR-21抑制物转染A549细胞球组;IHN-NC组:miR-21抑制物阴... 目的研究miR-21抑制物在A549细胞球增殖的作用及其相关机制。方法在无血清培养基中培养A549细胞球,形成细胞球后进行CD133+CD44+表达检测。实验分为A549细胞球组:未经处理;IHN组:miR-21抑制物转染A549细胞球组;IHN-NC组:miR-21抑制物阴性对照物转染A549细胞球组。Western印迹检测A549细胞和A549细胞球中DKK2、β-catenin蛋白以及QPCR检测miR-21在两种细胞中的表达;合成miR-21抑制物和阴性对照,分别转染A549细胞球48 h后,应用QPCR检测转染前后miR-21的表达变化,以及使用Western印迹分析DKK2、β-catenin蛋白的表达变化,利用噻唑蓝(MTT)检测12、24、48 h细胞的增殖能力。结果流式细胞术检测A549细胞球中CD133+CD44+阳性率为65.800%;IHN组miR-21的表达以及β-catenin蛋白的表达较A549细胞球组和IHN-NC组显著下调(P<0.05),而DKK2蛋白表达显著升高(P<0.05);MTT结果示IHN组和IHN-NC组在12、24、48 h时抑制率显著高于A549 sphere组(P<0.05),IHN组在24、48 h时相点抑制率明显高于IHN-NC组(P<0.05)。结论miR-21抑制物可有效抑制A549 sphere的增殖,其可能成为治疗肺癌的潜在靶点。 展开更多
关键词 MIR-21 抑制物 肺癌 dkk2
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宫颈癌患者癌组织Dickkopf相关蛋白2基因甲基化情况与临床病理特征的关系
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作者 张娴 张艳 武玉 《中文科技期刊数据库(文摘版)医药卫生》 2022年第5期5-8,共4页
探讨宫颈癌组织中Dickkopf相关蛋白2(DKK2)基因启动子甲基化率及其与临床病理参数的相关性。方法:选取聊城市人民医院2016年5月至2017年11月收治的79例宫颈癌患者,63例宫颈癌前病变患者,其中低级别上皮内病变(LISL)患者25例,高级别上皮... 探讨宫颈癌组织中Dickkopf相关蛋白2(DKK2)基因启动子甲基化率及其与临床病理参数的相关性。方法:选取聊城市人民医院2016年5月至2017年11月收治的79例宫颈癌患者,63例宫颈癌前病变患者,其中低级别上皮内病变(LISL)患者25例,高级别上皮内病变(HISL)患者38例,并以29例因子宫平滑肌瘤行子宫切除术的患者作为对照组。采用甲基特异性聚合酶链反应法(MSP)检测宫颈组织中DKK2基因甲基化表达水平。结果:宫颈癌组织中DKK2甲基化率明显高于HISL(χ2=8.346,P<0.05)。HISL中DKK2甲基化率显著高于正常宫颈标本(x2=7.934,P<0.01)和LISL标本(χ2=4.375,P<0.05)。宫颈癌中DKK2甲基化阳性率随着淋巴结转移而升高,有无淋巴结转移患者的DKK2甲基化率(76.5%vs45.2%,x2=5.239,P<0.05)差异具有显著性,不同病理类型、分期、分化程度与DKK2甲基化无显著相关性(P>0.05)。结论:DKK2基因可能是宫颈癌发生的潜在分子生物标志物,检测DKK2基因启动子甲基化状态可为宫颈癌的防治提供参考。 展开更多
关键词 宫颈癌 dkk2基因 DNA甲基化 分子标志物
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重组DKK1及pCMV-HA2/DKK1重组质粒对宫颈癌细胞体外增殖作用的影响 被引量:6
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作者 陆奎英 崔素芬 +4 位作者 徐亮 张玲玲 丁永玲 覃文新 包广宇 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期898-901,共4页
目的观察人重组DKK1和pCMV-HA2/DKK1重组质粒对体外培养宫颈癌细胞株Hela细胞增殖的影响。方法体外培养Hela细胞,非放射性细胞增殖(MTS)法检测重组DKK1、抗DKK1抗体和人源DKK1真核表达质粒pCMV-HA2/DKK1对Hela细胞增殖作用的影响,wester... 目的观察人重组DKK1和pCMV-HA2/DKK1重组质粒对体外培养宫颈癌细胞株Hela细胞增殖的影响。方法体外培养Hela细胞,非放射性细胞增殖(MTS)法检测重组DKK1、抗DKK1抗体和人源DKK1真核表达质粒pCMV-HA2/DKK1对Hela细胞增殖作用的影响,western blot及ELISA法检测转染pCMV-HA2/DKK1重组质粒后Hela细胞中DKK1蛋白的表达情况。结果与对照组相比,10,50 ng/mL的DKK1对Hela细胞有明显抑制作用(F分别为162.31,184.65,P均<0.01);抗DKK1抗体对Hela细胞的增殖影响无统计学意义(P均>0.05);pCMV-HA2/DKK1重组质粒转染Hela细胞后对细胞增殖有明显抑制作用,加入抗DKK1抗体不能完全拮抗pCMV-HA2/DKK1对Hela细胞的抑制作用;pCMV-HA2/DKK1重组质粒转染Hela细胞后可检测到DKK1蛋白表达,经western blot证实为DKK1蛋白(Mr约为38 000),ELISA法结果表明,DKK1蛋白的分泌量随培养时间的延长而增加,第5天时达峰值(19.82 mg/L)。结论重组DKK1和人源DKK1真核表达质粒pCMV-HA2/DKK1可抑制Hela细胞的增殖,抗DKK1抗体可部分抵抗DKK1的抑制作用,提示DKK1在宫颈癌肿瘤发生中对肿瘤细胞具有抑制作用。 展开更多
关键词 重组DKK1 真核表达质粒 pCMV-HA2/DKK1 HELA细胞 细胞增殖
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