贲门腺癌中SFRP1、DKK3基因启动子区甲基化状态的联合分析

目的研究贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中Wnt通路拮抗基因分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)和DKK3(Dickkopf3)基因的甲基化状态,探讨其与贲门腺癌发生的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测89例贲门腺癌及相应正常黏膜组织中SFRP1和DKK3基因的甲基化状态,并分析与临床病理参数间的关系。结果89例贲门腺癌组织中SFRP1和DKK3基因发生甲基化的分别有77例(86.5%)和16例(20.0%),而正常黏膜组织中仅有15例(13.9%)发生了SFRP1基因的甲基化,未发现有DKK3基因的甲基化现象,癌组织中两基因的甲基化率均明显高于正常黏膜组织(P<0.05);SFRP1基因的高甲基化与肿瘤组织的淋巴结转移相关,而与肿瘤的浸润深度、临床分期及病理分级无关,DKK3基因的甲基化与各临床病理指标均无关(P>0.05);联合分析SFRP1和DKK3基因,在贲门腺癌组织中两基因共同发生甲基化的有12例,其共同甲基化率与肿瘤的淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05)。结论贲门腺癌中SFRP1和DKK3基因的高甲基化状态可能是引起贲门腺癌发生的分子机制之一;SFRP1、DKK3基因甲基化的联合检测对于贲门腺癌的预后评估有一定的参考价值。

急性髓系白血病儿童DKK3基因启动子高甲基化的临床价值

目的检测急性髓系白血病(AML)患儿骨髓DKK3基因启动子甲基化情况并研究其临床意义。方法选择急性髓系白血病患儿(AML组)80例和血液系统良性疾病患儿(CON组)40例为研究对象,采用甲基化特异性PCR检测两组患儿骨髓DKK3基因启动子甲基化并比较其差异,分析AML组患儿不同临床病理因素中DKK3基因启动子甲基化的差异,对比DKK3基因启动子甲基化与未甲基化患儿3年生存率及总生存时间的差异。检测髓系白血病细胞株DKK3基因启动子甲基化状态。结果 AML组患儿骨髓DKK3基因启动子甲基化率高于CON组(P﹤0.05);AML组患儿骨髓DKK3基因启动子甲基化在性别、年龄、初诊发热、外周血白细胞(WBC)、外周血红细胞(RBC)、外周血血小板(PLT)和FAB分型方面比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05),在骨髓原始细胞比例、核型类型和诱导化疗疗效方面比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);随访3年,AML组DKK3基因启动子甲基化患儿的生存率和生存时间均较DKK3基因启动子未甲基化患儿低(P﹤0.05);HL-60、KG-1和K562白血病细胞株DKK3基因启动子均处于甲基化状态。结论急性髓系白血病患儿骨髓DKK3基因启动子处于高甲基化状态,在病情及预后评估中具有一定价值。

DKK3基因在心力衰竭家兔心脏中的表达改变研究

目的：通过增加家兔心脏前后负荷制作心衰模型，研究DKK3（ dickkopf 3）基因在心衰家兔心脏中表达改变，初步探讨DKK3在心力衰竭家兔中的作用。方法取20只日本大耳白兔随机分为对照组和心衰组。心衰组家兔通过刺破家兔主动脉瓣造成反流，2周后缩窄腹主动脉；对照组仅行假手术。2月后测量心脏结构及功能，行HE和PSR染色评价家兔心肌细胞大小及胶原重构，免疫组化检测DKK3的改变。结果与对照组相比，心衰组家兔射血分数显著下降，心脏重量增加，心肌细胞增大，胶原增多， DKK3含量明显减少。结论在心力衰竭时， DKK3表达降低，加深了心脏重构的程度。

DKK3、CDKN2A基因甲基化及mRNA表达与AML的相关性研究进展

AML是最常见的血液系统恶性肿瘤之一,其发病率呈逐年递增态势,AML的发病原因可能与Wnt受体信号转导通路中DKK3基因、抑癌基因CDKN2A基因甲基化及mRNA异常表达相关,DKK3基因与CDKN2A基因在AML患者中呈普遍高甲基化状态,本文通过分析AML各时期目的基因甲基化的定量检测及mRNA表达情况,探究其与AML初发及缓解后病情的相关性,进而了解其在AML进展中的作用。

DKK3及CDKN2A基因甲基化在急性髓系白血病患者中的分析

目的:探讨目的基因DKK3及CDKN2A在急性髓系白血病患者中各时期的甲基化水平,以及DNA甲基化在急性髓系白血病患者发生及发展的作用。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)检测例AML患者初发时,完全缓解时及复发时DKK3,CDKN2A基因甲基化水平。另追踪16例AML患者各时期DKK3,CDKN2A基因甲基化水平。结果:对照组中DKK3及CDKN2A基因甲基化检出率分别为8.3%(1/12),0%(0/12);初发组50例AML患者中DKK3及CDKN2A基因甲基化检出率分别为88.0%(44/50),58.0%(29/50),与对照组比较具有统计学差异(P<0.001)。缓解组31例AML患者中DKK3及CDKN2A基因甲基化检出率分别为25.8%(8/31),9.7%(3/31),与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。复发组16例AML患者中DKK3及CDKN2A基因甲基化检出率分别为75.0%(12/16),56.3%(9/16),与对照组比较具有统计学差异(P<0.001)。在各FAB分型中,DKK3及CDKN2A基因甲基化检出率均无统计学差异(P>0.05)。追踪16例患者中,DKK3基因甲基化初发组与缓解组具有统计学差异(P<0.0001),缓解组与复发组间具有统计学差异(P<0.0001),缓解组与复发组间具有统计学差异(P<0.05),初发组与复发组间无统计学差异(P>0.05)。CDKN2A基因相对表达量,初发组与缓解组存在统计学差异(P<0.0001),初发组与复发组存在统计学差异(P<0.05)。结论:DKK3、CDKN2A基因甲基化在急性髓系白血病患者的发展过程及预后监测中具有重要的临床意义。

诱导痰DKK3基因甲基化在非小细胞肺癌病情及预后评估中的价值

目的:检测诱导痰DKK3基因甲基化并探讨其在非小细胞肺癌(NSCLC)病情及预后评估中的临床价值。方法:选择山东省临沭县人民医院2015年1月至2017年12月诊治的80例NSCLC患者作为观察组,另选择同期50例肺部良性疾病患者(肺炎、支气管扩张及慢性阻塞性肺疾病)作为对照组,MSP法检测肺癌细胞和肺正常上皮细胞DKK3基因甲基化,分析DKK3基因甲基化与临床影响因素的关系,比较DKK3基因甲基化与未甲基化NSCLC患者预后的差异。结果:观察组诱导痰DKK3基因甲基化率显著高于对照组[81.3%(65/80)比2.0%(1/50)],差异有统计学意义(P<0.05)。肺癌细胞系中DKK3基因处于甲基化状态,而正常人肺上皮细胞BEAS-2B细胞中DKK3基因处于未甲基化状态。观察组患者诱导痰DKK3基因甲基化与胸腔积液、分化程度、肿瘤最大径、淋巴结转移、远处转移和TNM分期存在相关性(P<0.05)。观察组DKK3基因甲基化患者R0切除率、3年生存率及总生有期(OS)均显著低于DKK3基因未甲基化患者[53.8%(35/65)比15/15、28.1%比37.9%、(1.8±0.3)年比(2.1±0.6)年],差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NSCLC患者诱导痰DKK3基因甲基化率显著升高,且与患者预后相关。诱导痰DKK3基因甲基化检测可为NSCLC病情及预后评估提供客观科学证据。

慢病毒介导的DKK3过表达对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响

目的:探讨慢病毒介导的DKK3过表达对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响。方法:体外分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞,将细胞分成对照(control)组、阴性对照慢病毒感染(vector)组和pcDNA3.1-DKK3慢病毒感染(DKK3)组,RT-qPCR和Western blot检测过表达效果,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中激活型caspase-9(cleaved caspase-9)、Ⅱ型胶原(COL II)、Ⅰ型胶原(COL I)和激活型caspase-3(cleaved caspase-3)及胞质、线粒体中细胞色素C(cytochrome C)蛋白表达变化。结果:pcDNA3.1-DKK3感染后增生性瘢痕成纤维细胞中DKK3 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。DKK3组增生性瘢痕成纤维细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白水平升高,COL II和COL I蛋白水平降低,与vector细胞比较,胞质中cytochrome C蛋白水平升高,线粒体中cytochrome C蛋白水平降低(P<0.05)。结论:慢病毒介导的DKK3过表达能够诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡,并减少细胞合成胶原蛋白。

LINC00665通过靶向miR-708-5p/DKK3抑制食管癌细胞的增殖及侵袭

目的探讨LINC00665在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织及细胞中的表达,并探讨其异常表达对ESCC细胞增殖、侵袭能力的影响及可能的分子机制。方法采用qRT-PCR法检测LINC00665及miR-708-5p的表达情况;采用MTS、Transwell侵袭实验检测LINC00665异常表达对ESCC细胞增殖及侵袭能力的影响。采用双荧光素酶报告基因检测LINC00665与miR-708-5p的相互作用及miR-708-5p对靶基因的调控作用。结果ESCC组织中LINC00665表达量(3.834±2.016)明显低于癌旁正常组织(7.973±2.752)(P<0.01)。LINC00665表达与ESCC淋巴结转移、浸润深度及TNM分期密切相关(P均<0.05)。LINC00665过表达明显抑制TE13细胞的增殖及侵袭能力(P均<0.05)。LINC00665过表达降低TE13细胞中miR-708-5p的表达及报告基因的荧光素酶活性(P均<0.05);miR-708-5p mimics可降低DKK3基因表达及含DKK33’UTR区结合位点片段的报告基因质粒的荧光素酶活性(P均<0.05);同时,miR-708-5p过表达可抵消TE13细胞中由LINC00665过表达诱导的DKK3基因表达上调和荧光素酶活性的上调(P均<0.05)。结论LINC00665可通过竞争结合miR-708-5p靶向调控DKK3基因表达,进而抑制ESCC细胞的增殖及侵袭能力。LINC00665有望成为ESCC患者分子靶向治疗的潜在靶点及预后评估的新型分子标志物。