DL-丁胱亚磺酰亚胺导致结肠癌细胞铁死亡的作用研究

目的:研究DL-丁胱亚磺酰亚胺(DL-BSO)导致结肠癌细胞发生铁死亡的作用机制。方法:(1)采用梯度浓度的DL-BSO干预人结肠癌HCT-116和SW480细胞,CCK-8法检测细胞活力的改变。(2)采用实验浓度的DL-BSO干预2种细胞,分为对照组和实验组,Transwell和划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测目的蛋白表达水平。(3)用necrostatin-1(Nec-1)和ferrostatin-1(Fer-1)预处理2种细胞,再用实验浓度的DL-BSO进行干预,分为对照组、DL-BSO组、抑制剂组和DL-BSO联合抑制剂组,CCK-8法检测细胞活力,以铁离子比色法试剂盒检测铁离子浓度,以谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测GSH浓度,以Western blot法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和胱氨酸/谷氨酸反向转运体(xCT)表达水平,以脂质过氧化传感器C11-BODIPY-591荧光显影和流式细胞术检测活性氧(ROS)水平。结果:DL-BSO干预后,HCT-116和SW480细胞活力均显著减弱,DL-BSO的最适浓度和处理时间分别为300μmol/L和36 h。DL-BSO处理使HCT-116和SW480细胞横向及纵向迁移能力均减弱,铁死亡关键蛋白GPX4和xCT表达下调,ROS水平和铁离子浓度升高,GSH浓度降低。DL-BSO的作用不受Nec-1的回调,但受到Fer-1的回调。结论:DL-BSO能通过铁死亡途径导致结肠癌细胞发生死亡,并减弱细胞的侵袭和迁移能力。

丁胱亚磺酰亚胺排空组织谷胱甘肽对大鼠心肌谷胱甘肽系统的影响

目的 :观察采用谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂———丁胱亚磺酰亚胺 (BSO)排空大鼠心肌谷胱甘肽 (GSH)是否影响大鼠心肌组织GSH的稳态 ,以及是否对GSH代谢相关酶活性及mRNA表达产生影响。方法 :采用长时间力竭运动、注射BSO排空GSH两种实验模型 ,比较对照组与注射BSO组SD大鼠心肌在静息状态和长时间力竭运动后GSH状态及其代谢变化。结果 :注射BSO 8天后 ,大鼠心脏GSH含量分别为对照组的 6 % ,且GSH的下降伴随着氧化型谷胱甘肽 (GSSG)的下降 ,GSH/GSSG的比值无显著变化。GSH排空导致GSH代谢酶活性发生适应性变化 ,注射BSO后心肌中谷胱甘肽过氧化物酶 (GPX)活性与对照组相比显著下降 (P <0 .0 0 1)。注射BSO组与对照组相比 ,心肌谷氨酰转肽酶 (GGT)活性显著增加 (P <0 .0 5 )。注射BSO力竭组与注射BSO组相比 ,心肌GGT活性显著增加 (P <0 .0 0 1) ,心肌注射BSO抑制γ -谷氨酰半胱酸合成酶 (GCS)活性 ,注射BSO力竭组大鼠心肌GCSmRNA表达量高于注射BSO组 ,表明极度排空谷胱甘肽后 ,GCSmR NA表达量的增加可能是机体产生的应激反应。

丁胱亚磺酰亚胺对Acc-2移植瘤放射增敏的实验研究

目的在体内研究放射增敏剂丁胱亚磺酰亚胺（ｂｕｔｈｉｏｎｉｎｅｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ，ＢＳＯ）对Ａｃｃ－２移植瘤的放射增敏作用。方法以Ａｃｃ－２移植瘤为模型，实验设对照组、ＢＳＯ组、单放组和ＢＳＯ＋放射组。ＢＳＯ药物剂量为５ｍｍｏｌ／ｋｇ，放射剂量为１０Ｇｙ。结果各组与对照组比较，ＢＳＯ组抑瘤率为８．５％、单放组为１２．６％，ＢＳＯ＋放射组为４５．３７％。结论ＢＳＯ对Ａｃｃ－２移植瘤有放射增敏作用。

丁胱亚磺酰亚胺联合放射线对食管癌细胞株TE-1的增敏效应

目的研究丁胱亚磺酰亚胺(buthionine sulfoximine,BSO)联合放射线对食管癌细胞株TE-1放射增敏的影响。方法四甲基偶氮唑蓝比色实验(MTT法)观察BSO及放射线对细胞增殖的抑制作用及BSO对食管癌细胞株TE-1的放射增敏作用。流式细胞法观察BSO、放射线对细胞凋亡及细胞周期的影响。反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chine reaction,RT-PCR)、Western blot法观察BSO对锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)mRNA及蛋白表达的影响。结果 BSO能抑制食管癌TE-1细胞的增殖,具有明显的量效和时效关系;BSO对食管癌TE-1细胞有明显的放射增敏作用;BSO与放射线联合作用于TE-1细胞后,G2/M期细胞比例及凋亡率明显增加,MnSOD mRNA及蛋白表达下降。结论 BSO可能通过影响TE-1细胞周期,降低MnSOD mR-NA及蛋白的表达,从而抑制食管癌细胞增殖、诱导凋亡来增强放射线对食管癌细胞的杀伤作用。

丁胱亚磺酰亚胺增强DAAO/D-Ala系统杀伤K562e细胞作用的研究

目的:研究了丁胱亚磺酰亚胺(BSO)增强D-氨基酸氧化酶(DAAO)/D-丙氨酸(D-Ala)自杀基因系统在白血病基因治疗中的作用。方法:应用逆转录病毒转染技术获得稳定表达DAAO的高致瘤性K562e单克隆细胞K_(DIGC),用PCR、原位杂交对DAAO基因修饰的K_(DfGC)进行鉴定。应用MTT法检测D-Ala对BSO预处理过的K_(DfGC)细胞的杀伤作用。结果:PCR和原位杂交分析证明DAAO基因已整合至细胞基因组中,并在mRNA水平上表达。D-Ala作用24h,K_(DfGC)细胞的半数抑制浓度(C_(50))为10.21mmol/L,K_(DfGC)+BSO的IC_(50)为7.92mmol/L,两者的95％可信区间不重叠。结论:BSO可增强DAAO/D-Ala系统杀伤K652e细胞作用。

丁胱亚磺酰亚胺对胶质瘤细胞GSH的修饰作用

利用体外培养的胶质瘤细胞株及裸小鼠移植瘤模型,研究了巯基修饰剂BSO对其GSH含量的影响.结果表明,无论是离体还是整体用药,BSO均能降低胶质瘤细胞的GSH含量.

DL型丁胱亚磺酰亚胺对大鼠C_6神经胶质瘤细胞放射增敏效应研究

目的 研究有氧及乏氧状态下DL型丁胱亚磺酰亚胺(DL BSO)对大鼠C6神经胶质瘤细胞的放射增敏效应。方法 以60 Coγ射线为放射源 ,分有氧和乏氧状态下单纯照射组、加药照射组。采用细胞克隆形成方法观察DL BSO对神经胶质瘤细胞的放射增敏效应。结果 有氧状态下 ,DL BSO的放射增敏作用和药物作用时间有关。 0 1mmol·L-1DL BSO用药 2、6、12h ,未能观察到放射增敏作用 ,放射增敏作用仅在用药后 2 4、4 8h出现。乏氧状态下 ,0 1mmol·L-1DL BSO用药后 ,各时间点 (2～ 4 8h)均可见放射增敏效应。有氧、乏氧状态下不同浓度DL BSO的放射增敏作用和药物浓度有关。结论 DL BSO对有氧及乏氧状态下的大鼠C6神经胶质瘤细胞均有放射增敏作用。离体状态下 ,DL BSO主要表现出乏氧增敏作用 ,并呈现一定的时间、浓度依赖关系。

增敏化合物丁胱亚磺酰亚胺对Acc-2细胞的药物毒性

目的研究新型增敏化合物丁俄亚磺筑亚胶（buthioninesulfoximine，BSO）对ACC-2细胞药物毒性。方法采用克隆形成法研究在有氧状态和手氧状态下，BSO对ACC-2细胞的药物毒性，在实验中BSO的药物剂量分别是200、100、50、40、20μmol／L。结果在有氧和乏氧状态下，BSO对Acc-2细胞的半数抑制剂量分别为12μmol／L和80μmol／L。结论BSO的药物毒性较小，BSO在乏氧状态对Acc-2细胞的药物毒性强于有氧状态下对Acc-2细胞的药物毒性，

丁胱亚磺酰亚胺对A cc 2细胞的放射增敏效应研究

目的 研究新型放射增敏剂丁胱亚磺酰亚胺（ｂｕｔｈｉｏｎｅ ｓｕｌｆｏｘｉｍ ｉｎ， Ｂ Ｓ Ｏ）对 Ａｃｃ２ 细胞的放射增敏效应。方法 采用克隆形成法，首先观察了 Ｂ Ｓ Ｏ 在乏氧状态和有氧状态下对 Ａｃｃ２ 细胞的药物毒性，然后研究了 Ｂ Ｓ Ｏ 在乏氧和有氧状态下对 Ａｃｃ２ 细胞的放射增敏效应。结果 Ｂ Ｓ Ｏ 在乏氧状态和有氧状态时，其半数抑制剂量分别为８０μｍ ｏｌ／ Ｌ、１２０μｍ ｏｌ／ Ｌ。当 Ｂ Ｓ Ｏ 在 Ｉ Ｄ２０、 Ｉ Ｄ１０ 的药物剂量时，在乏氧状态下，其 Ｓ Ｅ Ｒ 值分别为１５２１ 和１２６３，在有氧状态下其 Ｓ Ｅ Ｒ 值分别为１２９６ 和１１５３。结论 Ｂ Ｓ Ｏ 对 Ａｃｃ２ 细胞有放射增敏作用， Ｂ Ｓ Ｏ 在乏氧状态下的增敏效应比有氧状态下的放射增敏效应强。

丁胱亚磺酰亚胺对脑胶质细胞瘤GSH作用的研究

目的研究巯基修饰剂了胱亚磺酰亚胺（BSO）对脑胶质细胞瘤GSH含量的修饰作用。方法利用Tietze还原酶法观察BSO对体外培养的脑胶质细胞瘤细胞株及裸小鼠移植瘤模型脑胶质细胞瘤细胞GSH的作用。结果经BSO作用后脑胶质细胞瘤细胞株GSH含量最低为对照4．50％；实体瘤最低为6．74％。结论无论是离体还是整体用药，BSO均能降低脑胶质细胞瘤细胞的GSH含量。

丁胱亚磺酰亚胺对正常肝细胞的毒性作用及其机制探讨

目的探讨丁胱亚磺酰亚胺(BSO)对人胚正常肝细胞株L-02的毒性及其机制。方法 (1)用0、10、25、50、100和200μmol/L的BSO孵育L-02细胞48 h,用MTT法测算细胞存活率。(2)用0、10、25、50、100、200μmol/L的BSO培养L-02细胞48 h,用DTNB法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)水平。(3)用200μmol/L的BSO培养L-02细胞0、2、12、24、36、48 h,用Western blotting法测算细胞p38磷酸化水平。(4)用200μmol/L的BSO培养L-02细胞0、2、6、12、24、48 h,用荧光探针H2DCFDA法测算细胞活性氧簇(ROS)水平。(5)L-02细胞分为对照组、BSO组、SB203580组和BSO+SB203580组。对照组不加任何药物;BSO组加入终浓度为200μmol/L的BSO;SB203580组加入终浓度为20μmol/L的SB203580;BSO+SB203580组先加入终浓度为20μmol/L的SB203580孵育15 min后加入终浓度为200μmol/L的BSO。24 h后采用MTT法测算各组细胞存活率,采用荧光探针H2DCFDA法检测ROS水平。结果 (1)从50μmol/L开始,BSO可以剂量相关性地降低L-02细胞的存活率(P均<0.05)。(2)BSO可剂量相关性地降低L-02细胞GSH含量,BSO浓度为25μmol/L时达到最低值。(3)BSO呈时间依赖性增加L-02细胞内p38磷酸化水平(P均<0.05)。(4)加入BSO后L-02细胞ROS水平均较对照组提高(P均<0.05),培养24 h时达到高峰。(5)BSO组L-02细胞ROS水平高于对照组(P<0.05),细胞存活率低于对照组(P<0.05);SB203580组L-02细胞ROS水平和细胞存活率与对照组相比P均>0.05;BSO+SB203580组L-02细胞ROS水平低于BSO组(P<0.05),细胞存活率高于BSO组(P<0.05)。结论 BSO对人正常肝细胞具有毒性作用,其机制可能是通过促进p38磷酸化和ROS生成,降低GSH水平实现的。

N-正丁基-苯甲酰-2-磺酰内亚胺促渗效果的研究

N-正丁基-苯甲酰-2-磺酰内亚胺是一种新型促渗剂，具有毒性小促渗效果好等特点．用=4％N-正丁基-苯甲酰-2-磺酰内亚胺处理小鼠皮肤可使皮肤给药的小檗碱血药浓度大幅度提高（生物利用度可提高11．56倍）．目前国内外常用的促渗剂氮酮只能提高生物利用度3.86倍，N-正丁基-苯甲酰-2-磺酰内亚胺的促渗效果是氮酮的2．99倍．在进行N-正丁基-苯甲酰-2-磺酰内亚胺和红细胞作用的实验时，也观察到可以引起细胞溶血，且存在时间效应和剂量效应．

N-正丁基-苯甲酰-2-磺酰内亚胺对细胞膜流动性影响的研究

利用荧光偏振度法和激光拉曼光谱法研究了Ｎ－正丁基－苯甲酸－２－磺酰内亚胺对细胞膜流动性的影响，荧光探针偏振结果显示，它可提高红细胞膜的微粘度，并且存在剂量依赖关系；激光拉曼光谱的结果显示，它可提高Ｉ２８９０／Ｉ２８５０和Ｉ１１３０／Ｉ１０８７比值，使磷脂分子的有序性升高．荧光探针偏振和激光拉曼光谱的结果均显示Ｎ－正丁基－苯甲酰－２－横酰内亚胺可以降低红细胞膜的流动性．其促渗机理可能是Ｎ－正丁基－苯甲酸－２－横卧内亚胺降低了角质细胞间脂质的流动性，使脂质出现局部破坏和损伤，造成皮肤屏障功能下降，从而使通透性提高．

新型立体位阻的叔丁基芳基N-磺酰亚胺的合成

以芳基溴和氯代叔丁烷为原料,经格氏反应得到相应叔丁基芳基酮。接着在四氯化钛、三乙胺存在下,与磺酰胺加成得到了10个新型的叔丁基芳基N-磺酰亚胺化合物,其结构经~1HNMR、^(13)CNMR、ESI-MS、IR和熔点等表征。并通过单晶X-射线衍射确定代表化合物的绝对构型为Z构型。该产物可以应用于生物活性物质的合成中。

三氟甲基取代叔丁基亚磺酰亚胺的不对称aza-Morita-Baylis-Hillman反应

三氟甲基取代的N-叔丁基亚磺酰亚胺和α,β-不饱和羰基化合物在三乙烯二胺(DABCO)和Ti(O^(i)Pr)_(4)共催化下反应,实现了底物诱导的不对称aza-Morita-Baylis-Hillman反应,以高产率(49%~97%),高非对映选择性(dr>99/1)合成了一系列N-叔丁基亚磺酰基-α-甲亚基-β-三氟甲基-β-氨基酸酯产物。该产物经脱保护、关环可进一步转化为光学纯的α-甲亚基-β-三氟甲基-β-内酰胺类化合物,产物结构经^(1)H NMR、^(13)C NMR和HR-MS确证。

以Peterson烯基化反应合成α,β-不饱和手性亚胺酯

发展了一种以Peterson烯基化反应合成一系列α,β-不饱和N-叔丁基亚磺酰基手性亚胺酯的方法。以α-三甲基硅基-N-叔丁基亚磺酰亚胺酯为底物,KHMDS为碱,再对醛进行亲核加成,诱发硅基C→O的1,3迁移,经过顺式消除,以71%-96%的分离产率得到一系列立体专一的E式α,β-不饱和N-叔丁基亚磺酰亚胺酯化合物。该方法无论对芳香醛、杂环芳香醛、α,β-不饱和醛还是易烯醇化的脂肪醛都有很好的反应性,对芳环上的给电子基和吸电子基都具有很好的兼容性。大部分反应都可以放大到克级水平,且通过将双键氢化,可得到一系列烷基化的带手性助剂的亚胺酯类化合物。

丁胱亚磺酰亚胺对胶质瘤细胞谷光甘肽及放射增敏作用的实验研究

研究巯基修饰剂ＢＳＯ对胶质瘤细胞ＧＳＨ含量的修饰作用和放射增敏作用。方法利用Ｔｉｅｔｚｅ还原酶法观察ＢＳＯ对体外培养的胶质瘤细胞株及裸小鼠移植瘤模型胶质瘤细胞ＧＳＨ的作用。利用ＭＴＴ法观察ＢＳＯ对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。结果经ＢＳＯ作用后胶质瘤细胞的ＧＳＨ含量显著下降，放射敏感性增加。结论无论是离体还是整体用药，ＢＳＯ均能降低胶质瘤细胞的ＧＳＨ含量。ＢＳＯ对胶质瘤细胞有放射增敏作用。

丁胱亚磺酰亚胺对胶质瘤细胞GSH修饰作用的实验研究

利用体外培养的胶质瘤细胞株及裸小鼠移植瘤模型,研究了巯基修饰剂丁胱亚磺酰亚胺(BSO)对其谷胱甘肽(GSH)含量的影响。结果表明:无论是离体还是整体用药,BSO均能降低胶质瘤细胞的GSH含量。

谷胱甘肽含量同肿瘤辐射敏感性的相关性研究

实验从细胞和动物水平研究射线对肿瘤细胞中谷胱苷肽(GSH)合成的影响,分析GSH含量同肿瘤辐射敏感性的相关性;;评价GSH合成抑制剂-丁胱亚磺酰亚胺(BSO)的辐射增敏效果,探讨以外周血单核细胞中GSH含量监测肿瘤患者对射线敏感性的可行性。实验结果表明,射线可以引起肿瘤细胞中GSH含量的升高,抑制肿瘤组织中GSH的合成,可以显著增强肿瘤细胞对射线的敏感性,外周血单核细胞和肿瘤中GSH含量变化一致且与肿瘤细胞对射线的敏感性相关。

谷胱甘肽及其酶系与黄磷毒作用关系研究

黄磷急性染毒可使肝脏GSH含量降低,染毒60小时后肝GSR明显抑制,肝GST在染毒早期有诱导倾向,24小时后转为抑制。OTC预处理可明显增加肝GSH含量,缓解黄磷所致的肝GSH降低和血清γ-GT的升高。BSO预处理能明显减少肝GSH含量,加剧黄磷所致的肝GSH降低及血清γ-GT的升高。黄磷亚急性染毒对肝GSH及其代谢酶系影响甚微。