活性氧在δ-榄香烯诱导人结肠腺癌DLD-1细胞凋亡中的作用研究

目的探讨δ-榄香烯诱导人结肠腺癌DLD-1细胞凋亡的机制以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)在δ-榄香烯诱导人结肠腺癌细胞DLD-1凋亡中的作用。方法采用MTT法考察了δ-榄香烯对人结肠腺癌DLD-1细胞和人正常肝胚胎WRL-68细胞增殖的影响;采用氯甲基二氯荧光素二乙酸酯(CM-H2DCFDA)定量检测凋亡过程中ROS的变化;流式细胞术JC-1标记检测凋亡细胞中线粒体膜电位(Δφm)的影响。结果δ-榄香烯明显抑制DLD-1细胞的增殖,对WRL-68细胞的细胞毒作用不明显。200μM的δ-榄香烯作用DLD-1细胞1小时、3小时和6小时所引起的ROS含量的增加,分别接近空白对照组的7.8倍、18.2倍和21.8倍;这种作用可以被谷胱甘肽(glu-tathione,GSH)(ROS的清除剂)显著性抑制,即加入GSH后δ-榄香烯对ROS生成率(3.46%)与空白对照(2.11%)相比无显著性差异。流式细胞仪检测结果表明,线粒体膜电位(Dφm)的降低呈时间依赖性,6小时、12小时、24小时线粒体膜电位降低量分别是空白组的(2.24±0.12)倍,(2.85±0.33)倍,(5.11±0.24)倍。结论Δφm的降低表明δ-榄香烯的抗肿瘤作用是以诱导肿瘤细胞凋亡的方式产生的,且其凋亡过程提示可能与ROS的生成增加相关。

龙葵生物碱对结肠癌DLD-1细胞增殖及凋亡的影响

目的:考察龙葵生物碱对结肠癌DLD-1细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用CCK8实验、AO-EB双染色法和流式细胞仪检测法,考察龙葵生物碱对结肠癌DLD-1细胞增殖及凋亡的影响。结果:CCK-8实验显示龙葵生物碱对DLD-1细胞增殖具有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为0.94 mg/mL;AO-EB双染色荧光显色法实验显示不同浓度的龙葵生物碱均能诱导DLD-1细胞凋亡;流式细胞法实验结果显示不同浓度的龙葵生物碱均呈现诱导细胞凋亡的作用。结论:龙葵生物碱在一定程度上对DLD-1细胞增殖呈抑制作用,同时可诱导细胞凋亡。

δ-榄香烯通过线粒体途径诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的研究

目的探讨δ-榄香烯诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的作用及其机制。方法采用MTT法考察了δ-榄香烯对肿瘤细胞增殖的影响;ELISA法定量检测细胞DNA片段化;Annexin-VFITC/PI流式细胞术检测细胞PS外翻的影响;用Westernblot分析药物对蛋白质表达的影响。结果δ-榄香烯明显抑制DLD-1细胞的增殖。DNA核小体的检测、细胞PS外翻证实δ-榄香烯的抗肿瘤作用是以诱导肿瘤细胞凋亡的方式产生的;Bax蛋白转入线粒体内,细胞色素C的释放以及凋亡因子AIF从线粒体释放入胞质,δ-榄香烯激活caspase信号通路,引起pro-caspase-3蛋白水解为caspase-3,进一步发生PARP底物的断裂。结论δ-榄香烯通过线粒体途径诱导DLD-1细胞发生凋亡。

硒结合蛋白1通过抑制超氧化物歧化酶增强奥沙利铂的细胞毒作用

目的:探讨人硒结合蛋白1(SBP1)在结直肠癌DLD-1细胞中的表达水平对超氧化物歧化酶(SOD)的影响及其引起的DLD-1细胞对奥沙利铂的敏感性变化,揭示SBP1的部分抗肿瘤作用机制。方法:MTS法检测不同浓度奥沙利铂处理SBP1siRNA或SOD1siRNA转染细胞后的细胞存活率,CuZn/Mn-SOD活性检测试剂盒检测SBP1siRNA转染对DLD-1细胞SOD酶活性的影响;实时荧光定量PCR检测下调SBP1后,SOD1和SOD2mRNA水平的变化;Western blot法检测下调SBP1或SOD1后DLD-1细胞内SBP1、SOD1及SOD2蛋白水平的变化;超氧化物阴离子荧光探针DHE染色法检测抗肿瘤药物引起的细胞内超氧化物阴离子的水平。结果:下调SBP1后,奥沙利铂对DLD-1细胞的毒性作用[半数毒性浓度IC50为(36.7±1.6)μmol/L]相比对照组[IC50为(17.5±0.8)μmol/L]明显减小(P<0.05);同时下调SBP1和SOD1后,奥沙利铂对DLD-1细胞的毒性作用[IC50为(16.8±1.0)μmol/L]相比对照组[IC50为(17.3±1.2)μmol/L]无明显变化(P>0.05);下调SBP1分别在转录水平、蛋白水平及酶活性水平上调了SOD,并减少了由奥沙利铂引起的DLD-1细胞内产生的超氧阴离子。结论:下调SBP1能上调SOD的水平,进而减小了奥沙利铂对DLD-1细胞的毒性作用,故SBP1能通过抑制SOD增强奥沙利铂对DLD-1细胞的毒性作用。