长链非编码RNA DLEU1在骨肉瘤中的预后价值分析及机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNAs,LncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因1(deleted in lymphocytic leukemia 1,DLEU1)在骨肉瘤中的预后价值及机制。方法:回顾性收集2012年1月至2014年12月期间骨科收治的86例骨肉瘤根治术患者组织标本和临床资料,逆转录荧光定量PCR(quantitative reverse transcription-PCR,q RT-PCR)法检测癌组织中LncRNA DLEU1表达,并分成LncRNA DLEU1高低表达两组。将骨肉瘤细胞系HOS分成两组,即下调表达组(si-DLEU1组)及阴性对照组(si-NC),经Lipofectamine^(TM)3000分别转染LncRNA DLEU1 siRNA及阴性对照序列,卡方检验分析LncRNA DLEU1表达与骨肉瘤临床病理因素的关系,Kaplan-Meier法比较LncRNA DLEU1高低表达组骨肉瘤患者总生存率的差异,单因素和多因素分析影响骨肉瘤总生存率的风险因素。Transwell实验测定和比较两组侵袭细胞数。结果:LncRNA DLEU1在癌组织中表达量高于癌旁组织(P<0.001),人骨肉瘤细胞系(MG-63、U-2 OS及HOS)中LncRNA DLEU1表达量高于人成骨细胞系hFOB 1.19(P<0.001)。LncRNA DLEU1表达与Enneking分期(P<0.001)、远处转移(P=0.016)和组织学分级(P=0.028)显著相关。LncRNA DLEU1高表达组1年总生存率低于低表达组(60.5%vs 90.7%,P<0.001)。LncRNA DLEU1高表达组5年总生存率低于低表达组(11.6%vs 32.6%,P<0.001)。Enneking分期、肿瘤大小、远处转移、组织学分级及LncRNA DLEU1表达是影响总生存率的单因素,多因素分析示LncRNA DLEU1高表达[HR=1.948,95%CI(1.141,3.641),P=0.012]及远处转移[HR=4.108,95%CI(2.169,7.780),P<0.001]为影响骨肉瘤患者总生存率的独立风险因子。si-DLEU1组侵袭细胞数显著少于si-NC组,(139±13)vs(357±31),P<0.001。结论:LncRNA DLEU1高表达是影响骨肉瘤患者预后的分子标志物,下调LncRNA DLEU1可抑制骨肉瘤细胞侵袭。

DLEU1通过调控p38/JNK信号通路促进高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖和血管重塑的实验研究

目的:探讨淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)促进高血压大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和血管重塑的机制及相关信号通路。方法:将12只DLEU1转基因大鼠(DTRs)随机分为DTRs组、p38组、JNK组,每组4只,分别经腹腔注射二甲基亚砜溶液、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂SB203580、JNK抑制剂SP600125,并以Wistar大鼠(4只)为对照组,采用苏木精-伊红(HE)染色确定主动脉、心脏和肾脏的形态结构。通过转染DLEU1过表达质粒,构建DLEU1过表达的VSMCs,同时给予SB203580、SP600125干预,通过溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)实验、细胞周期及迁移实验比较不同干预细胞的生物活性的差异。结果:DTR组大鼠血管腔面积显著减小、中膜增厚,肾组织中可见小动脉增生,血管壁和肾小球增厚,p38及JNK抑制剂可减轻DLEU1介导的血管中膜增厚的效应,增加中膜/管腔面积比,肾脏小动脉的病理改变也有所改善。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测显示,转染过表达DLEU1质粒后,VSMCs中DLEU1的相对表达量显著提高(P<0.05),表明细胞模型构建成功。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测发现,磷酸化p38和JNK蛋白的表达上调。DLEU1过表达导致细胞增殖率显著增加。经p38和JNK抑制剂处理后,细胞增殖率均有所下降(P<0.05)。p38和JNK抑制剂可显著阻断细胞周期,处理后,G0/G1期细胞比例均有所上升。过表达DLEU1可显著提高细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的蛋白表达水平,而阻断p38和JNK可部分消除DLEU1对MMP-2和MMP-9蛋白表达的促进作用。Western Blot检测显示,DLEU1过表达细胞骨桥蛋白(OPN)蛋白表达水平明显上调,平滑肌22α(SM-22α)蛋白表达显著下调,经p38抑制剂和JNK抑制剂干预后,OPN蛋白表达水平明显降低,SM-22α蛋白表达水平上调。结论:高血压时DLEU1介导的VSMCs增殖和表型改变需要p38/JNK通路介导。

长链非编码DLEU1靶向miR-7的表达通过BCR信号通路调控儿童白血病细胞的生物学行为

目的:研究长链非编码DLEU1调控儿童白血病细胞生物学行为的作用及其机制。方法:qPCR检测不同白血病细胞中DLEU1的表达情况;双荧光素酶报告基因检测DLEU1与miR-7的相互作用;划痕愈合实验检测过表达DLEU1后白血病细胞迁移能力的变化;Transwell侵袭实验检测过表达DLEU1后白血病细胞侵袭能力的变化;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测过表达DLEU1后miR-7对白血病细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测过表达DLEU1后BCR信号通路蛋白的表达情况。结果:在白血病细胞KG-1中DLEU1表达水平最低;DLEU1能与miR-7的3'UTR特异性结合;过表达DLEU1可以抑制白血病细胞侵袭和迁移能力;过表达DLEU1后,过表达miR-7可以促进白血病细胞侵袭和迁移能力;过表达DLEU1后BCR通路蛋白表达相应下调。结论:DLEU1可以靶向调节miR-7通过BCR信号通路调控白血病细胞的侵袭和迁移能力。

生物信息学预测lncRNA DLEU1的功能及其在膀胱癌中调控ncRNA代谢途径的作用

为了探讨淋巴细胞白血病缺失基因1 (deleted in lymphocytic leukemia 1, DLEU1)的功能及其在膀胱癌发展进程中相关联的基因及信号通路,采用Atlas of Genetics and Cytogenetics in Oncology and Haematology、Dcode、NCBI、GWAS Catalog、Targetvalidation、FireBrowse、Wanderer、GEPIA、Multi Experiment Matrix和LinkedOmics等综合分析DLEU1基因的功能。结果显示:DLEU1基因定位于人13q14.2～q14.3且高度保守;该基因广泛表达于人体多种正常组织,并与身高、原发性胆汁性肝硬化等生物学表型相关;在膀胱癌等多种肿瘤中广泛高表达,且其高表达与膀胱癌总体生存率和无病生存率的显著降低相关。此外,基因信号通路富集分析结果显示,在膀胱癌等多种肿瘤中DLEU1均与ncRNA代谢途径密切相关。以上结果提示, DLEU1可能是膀胱癌潜在的癌基因和治疗靶点,其主要通过调节ncRNA代谢途径参与膀胱癌的进程。

食管鳞癌中LncRNA DLEU1的表达及对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的研究长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达,及其对肿瘤细胞增殖和迁移的影响。方法收集58例手术切除的ESCC及其相应癌旁组织,RT-qPCR检测ESCC组织和细胞中DLEU1的表达水平。Log rank Test法分析ESCC组织中DLEU1的表达与患者临床病理特征的关系。Kaplan-Meier法分析DLEU1表达与ESCC患者生存的相关性。多变量Cox回归模型评估DLEU1对ESCC患者预后的影响。采用CCK-8和划痕愈合实验检测DLEU1对Eca9706细胞增殖和迁移的影响。结果ESCC组织中DLEU1高表达(P<0.01),其高表达与ESCC患者肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移呈显著相关性(均P<0.05)。DLEU1高表达与ESCC患者预后不良呈负相关(P<0.01),且是影响ESCC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。与对照组相比,体外敲低DLEU1的表达可显著抑制Eca9706细胞的增殖和迁移能力(P<0.01)。结论DLEU1在ESCC组织中高表达,是影响ESCC患者预后的独立危险因素,且具有促进肿瘤细胞增殖和迁移的能力。

非小细胞肺癌中lncRNA DLEU1的表达对肿瘤细胞转移的影响

目的:研究长片段非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因1(deleted in lymphocytic leukemia1,DLEU1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达模式和临床意义,并进一步评估其对肿瘤转移的影响。方法:42例NSCLC患者配对的癌组织和癌旁组织于2008年1月至2012年12月在中南大学湘雅三医院经手术切除获得。采用实时定量聚合酶链反应检测NSCLC组织和细胞中DLEU1的表达特征。运用统计学方法分析DLEU1的表达与NSCLC患者临床病理特征及生存时间的关系。通过体外伤口愈合和细胞侵袭试验分析DLEU1对NSCLC细胞迁移及侵袭的影响。运用蛋白质印迹法检测DLEU1对NSCLC细胞上皮间质转化(EMT)的标志物(E-钙粘蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白)表达量的影响。结果:42例NSCLC样本中,DLEU1的表达在35例中表现出上调(83.33%),而在7例中表现出下调(16.67%)。DLEU1在NSCLC癌组织的表达量是癌旁组织的2.11倍(P<0.05)。DLEU1在4种NSCLC细胞系(A549、H1299、SPCA1和H358)的表达量均高于正常肺16HBE上皮细胞,其中,A549细胞中DLEU1表达量最高(P<0.05)。高表达的DLEU1与淋巴结转移呈正相关(P<0.05),但与其他参数无显著相关性,包括患者性别、年龄、吸烟史、原发肿瘤大小、组织学分级和TNM分期。与低DLEU1表达组患者相比,高表达组患者生存时间显著缩短(P<0.05)。与对照组相比,体外干扰DLEU1的表达可显著抑制A549和SPCA1细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。与对照组相比,体外干扰DLEU1可显著增加A549细胞中E-钙黏蛋白表达量,而降低N-钙黏蛋白和波形蛋白表达量(P<0.05)。结论:DLEU1在NSCLC组织和细胞系中表达上调,并与患者淋巴结转移和生存时间相关,且具有通过EMT促进肿瘤细胞迁移和侵袭的功能,表明DLEU1可能作为NSCLC的潜在治疗靶点。

IL-29通过调控lncRNA DLEU1/miR-149-5p通路影响结肠癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨白介素-29(IL-29)对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法IL-29诱导SW480细胞,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,qRT-PCR检测lncRNA DLEU1和miR-149-5p表达,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。双荧光素酶实验验证lncRNA DLEU1和miR-149-5p靶向关系。转染DLEU1小干扰RNA或miR-149-5p模拟物至SW480细胞,上述相同方法观察抑制DLEU1表达或过表达miR-149-5p对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结果IL-29、抑制DLEU1表达或过表达miR-149-5p均可降低SW480细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达(P<0.05),提高细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达(P<0.05)。IL-29可降低SW480细胞DLEU1表达(P<0.05),促进miR-149-5p表达(P<0.05)。DLEU1靶向负调控miR-149-5p表达。过表达DLEU1可逆转IL-29对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结论IL-29可能通过调控DLEU1/miR-149-5p通路抑制结肠癌细胞增殖,并诱导其凋亡。

结肠癌组织LncRNA DLEU1、LncRNA NONHSAT017458的表达与临床病理特征与预后的关系

目的:探讨结肠癌组织中长链非编码核糖核酸(LncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)、LncRNA NONHSAT017458表达与临床病理特征以及预后的关系。方法:选取2020年3月至2022年12月我院收治的136例结肠癌患者,取手术切除的癌组织和癌旁组织(距离癌旁5 cm以上)检测LncRNA DLEU1、LncRNA NONHSAT017458表达。比较不同病理特征结肠癌组织中LncRNA DLEU1、LncRNA NONHSAT017458表达差异,Kaplan-Meier生存曲线分析不同LncRNA DLEU1、LncRNA NONHSAT017458表达结肠癌患者生存率,Log-Rank检验生存率差异,单因素和多因素Cox风险比例回归分析影响结肠癌患者生存的因素。结果:癌组织LncRNA DLEU1、LncRNA NONHSAT017458表达均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤直径≥4室cm、低分化、T3-4、N1-2的癌组织LncRNA DLEU1、LncRNA NONHSAT017458表达高于肿瘤直径<4 cm、中和高分化、T1-2、N0中LncRNA DLEU1、LncRNA NONHSAT017458表达,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA DLEU1、LncRNA NONHSAT017458高表达结肠癌患者3年总生存(OS)率、3年无进展生存(PFS)低于LncRNA DLEU1、LncRNA NONHSAT017458低表达结肠癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示高T分期、高N分期,高LncRNA DLEU1表达、高LncRNA NONHSAT017458表达是结肠癌患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论:结肠癌组织中LncRNA DLEU1、LncRNA NONHSAT017458表达上调,高水平表达与结肠癌高T、N分期、低分化有关,可导致患者不良结局。

生存相关DLEU1与HPV感染阳性宫颈癌关系研究

目的 探讨淋巴细胞白血病中lncRNA缺失型1(DLEU1)是否与人乳头瘤病毒(HPV)感染相关以及DLEU1在HPV阳性(HPV+)宫颈癌(CC)患者中的临床价值。方法 选择2016年1月~2017年12月接受治疗的CC患者128例作为宫颈癌组,同期行子宫切除术的子宫肌瘤患者99例作为对照组,通过受试者工作特征分析评估DLEU1从对照中筛选CC患者的能力以及区分不同HPV感染状态个体的能力,利用Kaplan-Meier生存分析和Cox回归分析评估DLEU1与CC患者生存预后的关系。结果 DLEU1表达在CC组织和细胞系中显著上调,特别是在HPV+的组织和细胞系中。DLEU1在区分CC患者以及区分HPV+和HPV阴性(HPV-)CC患者方面具有较高的诊断价值,并对HPV+对照具有一定的筛选能力。结论 DLEU1与CC患者HPV感染相关,与总CC患者和HPV+CC患者的生存预后相关,并可独立预测CC患者的预后,DLEU1可作为HPV+CC患者的诊断和预后生物标志物。

LncRNA DLEU1靶向miR-624-3p介导甲状腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因1(deleted in lymphocytic leukemia1,DLEU1)对甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等过程的影响,以及其作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1与甲状腺癌细胞SW579、TPC-1、C64中DLEU1、微小RNA-624-3p(miR-624-3p)的表达水平。分别将si-con(si-con组)、si-DLEU1(si-DLEU1组)、miR-con(miR-con组)、miR-624-3p mimics(miR-624-3p组)、si-DLEU1与anti-miR-con(si-DLEU1+anti-miR-con组)、si-DLEU1与anti-miR-624-3p(si-DLEU1+anti-miR-624-3p组)转染至TPC-1细胞,将未经转染的细胞作为NC组;检测各组细胞活力、细胞凋亡率以及细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶验证DLEU1与miR-624-3p的靶向关系;Western blot检测Ki-67、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP2)、Cleaved caspase-3、Wnt、β-catenin表达量。结果与Nthy-ori 3-1组DLEU1相比,甲状腺癌细胞SW579、C643、TPC-1中DLEU1表达水平明显升高,miR-624-3p表达水平明显降低,差异具有统计学意义(F值分别为207.87和68.45,P值均<0.05);与NC组、si-con组相比,si-DLEU1组细胞活力显著下降,迁移细胞数与侵袭细胞数显著下降,Ki-67、MMP-2、Wnt、β-catenin蛋白相对表达量显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase-3蛋白相对表达量显著升高,差异具有统计学意义(F值分别为52.93、354.43、193.75、101.74、86.80、141.66、122.14、307.83、78.49,P值均<0.05);与NC组、miR-con组相比,miR-624-3p组细胞活力显著下降,迁移细胞数与侵袭细胞数显著下降,Ki-67、MMP-2、Wnt、β-catenin蛋白相对表达量显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase-3蛋白相对表达量显著升高,差异具有统计学意义(F值分别为49.63、296.45、220.53、220.82、215.75、65.23、251.20、302.58、348.28,P值均<0.05);miR-624-3p过表达能显著降低DLEU1野生型质粒的荧光素酶活性(t=9.55,P<0.05);与si-DLEU1+anti-miR-con组相比,si-DLEU1+anti-miR-624-3p组细胞活力显著升高,迁移细胞数与侵袭细胞数显著增多,Ki-67、MMP-2、Wnt、β-catenin蛋白相对表达量显著升高,细胞凋亡率显著降低,Cleaved caspase-3蛋白相对表达量显著降低,差异具有统计学意义(t值分别为9.93,15.29、20.18、6.79、4.23、8.02、9.57、11.34、8.67,P值均<0.05)。结论LncRNA DLEU1靶向miR-624-3p促进甲状腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,抑制细胞凋亡,其作用机制可能与信号通路Wnt/β-catenin的活化有关。

LncRNA DLEU7-AS1通过调控膜突蛋白MSN的表达促进胃癌细胞增殖与迁移的作用机制

背景与目的:越来越多的研究表明长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要作用,然而大多数lncRNA在胃癌中的作用和机制尚不明确。LncRNA DLEU7-AS1在胃癌中的作用和机制的研究鲜见报道。本文旨在研究DLEU7-AS1对胃癌恶性表型的影响并初步探讨其分子机制。方法:采用癌症基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析DLEU7-AS1在胃癌组织中的表达及其对胃癌患者生存期的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)验证DLEU7-AS1在胃癌组织及胃癌细胞系中的表达情况。采用5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,DAC)和曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)处理胃癌细胞株,分析表观遗传学调控对DLEU7-AS1表达的影响。采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)下调HGC-27、AGS细胞株中DLEU7-AS1的表达,采用重组质粒上调MGC-803和MKN-45中DLEU7-AS1的表达,采用RTFQPCR验证效果;采细胞计数试剂盒(cellcountingkit-8,CCK-8)细胞增殖毒性实验、transwell小室迁移实验、平板克隆形成实验以及流式细胞术研究DLEU7-AS1对胃癌细胞增殖、迁移及凋亡和细胞周期的影响;采用RNA测序技术(RNAsequencing,RNA-seq)分析沉默DLEU7-AS1后的下游信号转导通路的变化,并采用RTFQ-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)进行验证;采用RNA免疫共沉淀实验(co-immunoprecipitation,RIP)探讨DLEU7-AS1对下游信号分子的调控机制。结果:TCGA数据库分析及RTFQ-PCR检测均证明DLEU7-AS1在胃癌中表达升高。DLEU7-AS1的表达与胃癌患者生存期呈负相关。DAC和TSA处理胃癌细胞株后,DLEU7-AS1表达上调,说明其表达受表观遗传学调控。沉默DLEU7-AS1抑制胃癌细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡;过表达DLEU7-AS1促进胃癌细胞增殖、迁移,抑制细胞凋亡。RNA-seq结果表明,DLEU7-AS1表达下调后会导致膜突蛋白(moesin,MSN)表达量的显著降低,RTFQ-PCR及Western blot的结果验证了这一结论。Rescue实验结果进一步证实,过表达MSN可部分回复干扰DLEU7-AS1对胃癌细胞增殖和迁移的抑制作用,提示MSN可能作为DLEU7-AS1下游效应分子。DLEU7-AS1主要定位在细胞核中,DLEU7-AS1与P300结合以及MSN启动子附近的H3K27的高度富集。结论:LncRNA DLEU7-AS1在胃癌中高表达并且其表达与胃癌患者生存期呈负相关,DLEU7-AS1可能通过招募P300调控MSN的转录进而促进胃癌的增殖和迁移等恶性表型。

长链非编码RNA DLEU7-AS1在肾细胞癌中的表达和临床意义

目的探讨长链非编码RNA DLEU7-AS1在肾细胞癌组织中的表达及临床意义。方法选取112例肾细胞癌组织标本和94例对应癌旁正常组织标本,抽取112例患者和50例正常健康志愿者的血清样本。采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测DLEU7-AS1的表达,分析DLEU7-AS1表达与肾细胞癌的临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析DLEU7-AS1的诊断效能。通过TCGA数据库分析DLEU7-AS1跟肾细胞癌预后的关系。Kaplan-meier法绘制生存曲线。结果采用TCGA数据库中523例肾肿瘤组织样本和72例正常组织样本进行分析,DLEU7-AS1在肿瘤中显著上调(P<0.05)。qPCR结果显示,肾癌组织中DLUE7-AS1表达量为4.16±1.91,高于癌旁组织的1.56±0.81,差异有统计学意义(P<0.05)。DLEU7-AS1表达与组织学分级、TNM分期、T分期、M分期有关(P<0.05)。ROC诊断肾细胞癌的曲线下面积(AUC)为0.856(95%CI:0.783~0.929;P<0.01),灵敏度和特异度分别为87.65%和82%。TCGA数据库显示,DLEU7-AS1低表达组患者较高表达组患者无病生存期显著延长(P=0.039),总生存期显著延长(P=0.041)。本院病历显示,高表达组患者比较,低表达组患者无进展生存期(P<0.05)和总生存期(P<0.05)都延长。结论DLEU7-AS1在肾细胞癌中高表达,可以作为肾细胞癌的新型诊断和预后生物标志物。

宫颈癌发生发展相关的LncRNA筛选及功能研究

目的筛选宫颈癌中具有临床意义的长链非编码RNA(LncRNA),并研究此LncRNA在宫颈癌发生发展中的生物学功能和机制。方法通过临床数据库GEPIA找到在宫颈癌中高表达的基因,并进一步根据临床预后相关性(高表达预后差原则)筛选到具有临床意义的LncRNA;通过siRNA介导敲低此LncRNA的表达,利用细胞增殖实验和克隆形成实验验证此LncRNA在宫颈癌发生发展中的重要性;探究此LncRNA的核质定位,最后通过分析与此LncRNA共表达基因参与的信号通路,探索此LncRNA在宫颈癌中发挥功能的潜在分子机制。结果通过GEPIA数据库共筛选到78个宫颈癌中高表达且具有显著临床预后相关性的基因,共有3个LncRNA,而DLEU1在宫颈癌中显著高表达(P<0.05),且高表达的患者具有不良预后(P=0.0023);通过两条siRNA敲低DLEU1在宫颈癌细胞中的表达(P<0.001、P=0.001),显著抑制宫颈癌细胞的增殖(P<0.05)和克隆形成;DLEU1定位于细胞核中,调控致癌因子MYC的显著低表达(P<0.001、P=0.002)。结论DLEU1可能通过高表达正调控MYC的高表达,从而促进宫颈癌细胞生长。

长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因1与卵巢癌细胞紫杉醇耐药的相关性研究

目的 探讨lncRNA DLEU1对卵巢癌紫杉醇耐药细胞的影响及作用机制。方法 分别对卵巢癌紫杉醇耐药细胞SKOV3/TAX转染siRNA,过表达质粒及阴性对照(negative control,NC)序列,设为DLEU1-siR组,DLEU1(+)组及NC组,未经转染的细胞设为对照组。qRT-PCR法验证lncRNA DLEU1转染情况;MTS法检测lncRNA DLEU1对SKOV3/TAX细胞紫杉醇耐药性的影响;流式细胞仪和Traswell实验检测lncRNA DLEU1对SKOV3/TAX细胞凋亡及侵袭能力的影响;双荧光素酶报告分析lncRNA DLEU1与miR-149的靶向关系,并经qRT-PCR和免疫印迹法证实lncRNA DLEU1对miR-149基因及PI3K/AKT通路蛋白的影响。结果 与对照组和NC组相比,DLEU1-siR组SKOV3/TAX细胞紫杉醇抑制率显著升高,DLEU1(+)组抑制率显著下降,差异均具有统计学意义(P <0.05)。DLEU1-siR组细胞凋亡率为16.8%,明显高于对照组(5.9%)和NC组(6.9%);DLEU1(+)组细胞凋亡率为3.4%,明显低于对照组和NC组,差异均有统计学意义(P <0.05)。DLEU1-siR组细胞侵袭穿膜数为(85±8)个,明显少于对照组(135±16)个和NC组(129±12)个;DLEU1(+)组细胞侵袭穿膜数为(189±15)个,明显多于对照组和NC组,差异均具有统计学意义(P <0.05)。LncRNA DLEU1与miR-149之间存在靶向结合位点,两者呈负向调控。与对照组和NC组相比,DLEU1-siR组磷酸-PI3K和磷酸-AKT蛋白表达显著下降,DLEU1(+)组两蛋白表达量显著上升,差异均具有统计学意义(P <0.05)。结论 LncRNA DLEU1过表达增强了SKOV3/TAX细胞对紫杉醇的耐药性,其作用机制可能与lncRNA DLEU1靶向结合miR-149调控PI3K/AKT通路有关。