LncRNA DLEU7-AS1通过调控膜突蛋白MSN的表达促进胃癌细胞增殖与迁移的作用机制

背景与目的:越来越多的研究表明长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要作用,然而大多数lncRNA在胃癌中的作用和机制尚不明确。LncRNA DLEU7-AS1在胃癌中的作用和机制的研究鲜见报道。本文旨在研究DLEU7-AS1对胃癌恶性表型的影响并初步探讨其分子机制。方法:采用癌症基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析DLEU7-AS1在胃癌组织中的表达及其对胃癌患者生存期的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)验证DLEU7-AS1在胃癌组织及胃癌细胞系中的表达情况。采用5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,DAC)和曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)处理胃癌细胞株,分析表观遗传学调控对DLEU7-AS1表达的影响。采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)下调HGC-27、AGS细胞株中DLEU7-AS1的表达,采用重组质粒上调MGC-803和MKN-45中DLEU7-AS1的表达,采用RTFQPCR验证效果;采细胞计数试剂盒(cellcountingkit-8,CCK-8)细胞增殖毒性实验、transwell小室迁移实验、平板克隆形成实验以及流式细胞术研究DLEU7-AS1对胃癌细胞增殖、迁移及凋亡和细胞周期的影响;采用RNA测序技术(RNAsequencing,RNA-seq)分析沉默DLEU7-AS1后的下游信号转导通路的变化,并采用RTFQ-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)进行验证;采用RNA免疫共沉淀实验(co-immunoprecipitation,RIP)探讨DLEU7-AS1对下游信号分子的调控机制。结果:TCGA数据库分析及RTFQ-PCR检测均证明DLEU7-AS1在胃癌中表达升高。DLEU7-AS1的表达与胃癌患者生存期呈负相关。DAC和TSA处理胃癌细胞株后,DLEU7-AS1表达上调,说明其表达受表观遗传学调控。沉默DLEU7-AS1抑制胃癌细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡;过表达DLEU7-AS1促进胃癌细胞增殖、迁移,抑制细胞凋亡。RNA-seq结果表明,DLEU7-AS1表达下调后会导致膜突蛋白(moesin,MSN)表达量的显著降低,RTFQ-PCR及Western blot的结果验证了这一结论。Rescue实验结果进一步证实,过表达MSN可部分回复干扰DLEU7-AS1对胃癌细胞增殖和迁移的抑制作用,提示MSN可能作为DLEU7-AS1下游效应分子。DLEU7-AS1主要定位在细胞核中,DLEU7-AS1与P300结合以及MSN启动子附近的H3K27的高度富集。结论:LncRNA DLEU7-AS1在胃癌中高表达并且其表达与胃癌患者生存期呈负相关,DLEU7-AS1可能通过招募P300调控MSN的转录进而促进胃癌的增殖和迁移等恶性表型。

长链非编码RNA DLEU7-AS1在肾细胞癌中的表达和临床意义

目的探讨长链非编码RNA DLEU7-AS1在肾细胞癌组织中的表达及临床意义。方法选取112例肾细胞癌组织标本和94例对应癌旁正常组织标本,抽取112例患者和50例正常健康志愿者的血清样本。采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测DLEU7-AS1的表达,分析DLEU7-AS1表达与肾细胞癌的临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析DLEU7-AS1的诊断效能。通过TCGA数据库分析DLEU7-AS1跟肾细胞癌预后的关系。Kaplan-meier法绘制生存曲线。结果采用TCGA数据库中523例肾肿瘤组织样本和72例正常组织样本进行分析,DLEU7-AS1在肿瘤中显著上调(P<0.05)。qPCR结果显示,肾癌组织中DLUE7-AS1表达量为4.16±1.91,高于癌旁组织的1.56±0.81,差异有统计学意义(P<0.05)。DLEU7-AS1表达与组织学分级、TNM分期、T分期、M分期有关(P<0.05)。ROC诊断肾细胞癌的曲线下面积(AUC)为0.856(95%CI:0.783~0.929;P<0.01),灵敏度和特异度分别为87.65%和82%。TCGA数据库显示,DLEU7-AS1低表达组患者较高表达组患者无病生存期显著延长(P=0.039),总生存期显著延长(P=0.041)。本院病历显示,高表达组患者比较,低表达组患者无进展生存期(P<0.05)和总生存期(P<0.05)都延长。结论DLEU7-AS1在肾细胞癌中高表达,可以作为肾细胞癌的新型诊断和预后生物标志物。