5个绵羊品种DLK1基因多态性与生长性状的关联性分析

为挖掘与绵羊生长性状相关的分子标记基因,探究DLK1多态性与绵羊生长性能之间的关联性。以240头不同品种绵羊(甘肃高山细毛羊、蒙古羊、藏绵羊和小尾寒羊各50头,滩羊40头)为试验对象,分别测定不同品种各年龄段绵羊生长性能指标;采集绵羊血液,提取DNA,运用PCR-SSCP方法结合DNA测序技术分析不同品种绵羊DLK1基因多态性;SPSS 20.0软件分析不同基因型与各绵羊品种不同年龄段生长性能之间的相关性。结果表明,不同品种绵羊DLK1基因均具有多态性,其中共检测到2个等位基因(A和B)和3种基因型(AA、AB和BB),优势等位基因和基因型分别为B和AB;DLK1基因第5内含子30412 bp处发生G→A单个碱基突变;G30412A突变位点与绵羊1月龄和3月龄的体质量和胸围具有显著相关性(P<0.05),且BB基因型个体表型优于AA基因型个体,突变位点与绵羊体长和体高无相关性(P>0.05)。总之,不同品种绵羊DLK1基因均存在第5内含子上G30412A突变位点,该位点显著影响绵羊1,3月龄的体质量和胸围,其可作为选择甘肃地方绵羊品种生产性状的候选基因。

DLK1/GTL2印记基因甲基化状态及DLK1蛋白的表达与肿瘤

DLK1/GTL2是一对重要的连锁印记基因,位于14q32。GTL2基因是一个母源性印记基因,其转录产物为非编码RNA。DLK1基因属父源性印迹基因。编码蛋白质DLK1,其表达程度的变化与某些肿瘤有关。作者从DLK1/GTL2甲基化状态的变化和DLK1蛋白的表达两个方面与肿瘤的关系做一综述。

dlk1促进肺鳞癌细胞增殖的相关分子机理研究

背景与目的印记基因dlk1因在多种肿瘤组织中出现异常表达而受到研究者越来越多的关注,但dlk1基因与肺癌的关系尚无报道。本研究首先在肺癌组织中检测了dlk1基因的表达,并进一步利用肺癌细胞系H520对dlk1基因促进细胞增殖的分子机制进行了初步研究。方法首先,采用RT-PCR在30对非小细胞肺癌肿瘤及其配对癌旁组织中检测dlk1基因的表达。然后,克隆人源dlk1基因,转染并筛选出稳定表达dlk1基因的肺癌细胞。最后,利用CCK8法研究dlk1基因对细胞增殖能力的影响,并用Western blot技术分析细胞周期蛋白Cyclin B1的表达。结果 RT-PCR结果显示,dlk1基因在36.7%的非小细胞肺癌肿瘤组织中表达水平高于癌旁肺组织。在成功获得了稳定表达外源性dlk1基因的肺癌细胞H520-dlk1的基础上,CCK8实验及平板集落实验显示,稳定转染dlk1可以明显促进肺鳞癌细胞H520的增殖能力(P<0.05)。同时,稳定表达DLK1蛋白可以上调细胞周期蛋白Cyclin B1的表达水平(P<0.05)。结论 dlk1在非小细胞肺癌中存在异常高表达,它可以通过上调细胞周期蛋白Cyclin B1的表达,促进肺鳞癌细胞H520的增殖。提示dlk1基因的异常表达可能在肺癌的发生演进中发挥作用。

哺乳动物印记域DLK1-DIO3的研究进展

DLK1-DIO3印记域定位于人14号染色体、小鼠12号染色体及绵羊18号染色体远端,在真哺乳亚纲动物中印记保守。该印记域包含3个编码蛋白的父系表达基因Dlk1、Rtl1和Dio3以及若干大小不同的母系表达印记非编码RNA,如miRNAs、snoRNAs和大型非编码RNA Gtl2等。人和小鼠该印记域内印记基因剂量的改变将导致严重的表型异常甚至胚胎致死,暗示正常的发育需要域内印记基因的正常表达。文章重点论述了哺乳动物DLK1-DIO3印记域的印记调控机制和域内印记基因及其功能的研究进展。

DLK1在急性白血病中的表达及其在K562细胞红系分化中的作用

目的:探讨急性白血病(acute leukemia,AL)患者骨髓单个核细胞DLK1基因的表达水平及其在K562细胞红系分化中的作用。方法:采用RT-PCR对65例AL患者及34例正常骨髓对照进行DLK1mRNA水平的检测,对其中20例AL患者及13例正常骨髓用Western印迹法检测DLK1蛋白表达水平。培养K562细胞,用氯化高铁血红素(hemin)诱导其分化,观察DLK1在红系分化中的变化。结果:在AL患者和正常骨髓对照的骨髓单个核细胞中DLK1基因均存在明确表达。DLK1mRNA的表达水平AL组高于对照组,差异有统计学意义(P=0.018),但在ALL和ANLL之间DLK1mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05),且DLK1mRNA的表达水平与患者初诊时骨髓原始细胞数、外周血白细胞数及血小板数无关。对部分样品检测DLK1蛋白的表达,发现AL患者DLK1蛋白阳性表达率高于对照组,与mRNA表达趋势一致。在hemin诱导K562细胞向红系分化过程中,DLK1mRNA的表达水平逐渐下降。结论:DLK1基因可能参与了AL的发病过程,但DLK1mRNA的表达水平与AL患者某些临床特征无相关性。DLK1基因可能抑制K562细胞向红系分化。

miR-15a对肝癌HepG2细胞增殖和DLK1表达的影响

目的探讨miR-15a对肝癌中DLK1表达的调节作用和对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法常规培养肝癌细胞系HepG2,经脂质体转染miR-15a模拟物mimic和抑制物inhibitors及各自阴性对照片段NC48 h后,用RT-PCR和Western blot检测DLK1基因及蛋白的表达水平,MTT和流式细胞术(FCM)检测细胞增殖和周期情况。结果 RT-PCR和Western blot结果显示转染miR-15a mimic后DLK1的mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),而转染miR-15a inhibitors后DLK1的mRNA和蛋白表达量升高(P<0.05);MTT结果显示转染miR-15a mimic后细胞的增殖能力明显减慢(P<0.05),而转染miR-15a inhibitors后细胞增殖能力加快(P<0.05)。FCM结果显示转染miR-15a mimic后细胞抑制在G1期。结论过表达miR-15a能抑制DLK1的mRNA和蛋白表达,并抑制肝癌HepG2细胞的增殖。

2个印记的基因间lncRNAs位于牛Dlk1-Dio3印记区域

旨在鉴别牛Dlk1-Dio3印记区域内的新印记lncRNAs。本研究选取位于Meg8与Meg9基因间的2组表达序列标签(EST),通过RT-PCR克隆序列并进行分析,结果发现其具有lncRNA的特征,命名为Linc24062和Linc24063。分析Linc24062和Linc24063在牛8个组织(心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、皮下脂肪和大脑)中的表达,发现2个lncRNAs在被检测的组织中均表达。利用基于单核苷酸多态性(SNP)位点的直接测序法,通过比较杂合子牛中SNP位点处基因组PCR扩增产物与RT-PCR扩增产物的测序峰图分析Linc24062和Linc24063的印记状态,发现Linc24062和Linc24063在牛被检测组织中均为单等位基因表达,说明Linc24062和Linc24063在牛中是印记的。

双重免疫组化染色检测DLK1与PCNA在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨双重免疫染色检测DLK1蛋白与增殖细胞核抗原(PCNA)在不同分化程度肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法用双重免疫组化染色方法检测HCC组织(45例)、癌周肝硬化组织(20例)及肝局灶性结节性增生(FNH)组织(20例)中DLK1及PCNA的表达。结果 DLK1与PCNA在HCC组、肝硬化组织及FNH组织中表达率均为100%;两者阳性表达水平与HCC恶性程度呈正相关。DLK1与PCNA在癌周肝硬化组及FNH组中的表达水平均较HCC组低(P<0.05),DLK1/PCNA在FNH组中的表达水平较癌周组织低(P<0.05)。结论DLK1与PCNA的表达均与HCC的恶性程度呈正相关,同时高阳性表达DLK1与PCNA的HCC恶性程度更高,双重免疫组化染色检测DLK1与PCNA的表达更能体现肿瘤的恶性程度。

苦参碱对HepG2细胞DLK1基因表达及细胞生长的影响

目的:探讨苦参碱能否重新诱导HepG2细胞DLK1基因被印记及对细胞生长的影响。方法:RT-PCR检测不同浓度苦参碱处理HepG2细胞后DLK1基因表达水平变化;MTT、transwell和流式细胞术检测苦参碱作用后HepG2细胞的增殖、凋亡及侵袭力的变化。结果:HepG2细胞经苦参碱处理后,DLK1基因的mRNA表达量降低,细胞的增殖能力、侵袭能力均降低,细胞抑制在G1期。结论:苦参碱能有效地抑制DLK1基因的表达,且能抑制肿瘤细胞HepG2生长、增殖和侵袭能力。

DLK1在干细胞和肿瘤中的作用

DLK1是EGF家族成员之一,是一个父源表达母源沉默的印记基因产物,其表达受等位基因差异性甲基化区(DMR)的调控。Dlk1是细胞分化的重要调节基因,可抑制脂肪前体细胞向脂肪细胞分化。DLK1通过和Notch1相互作用,在Notch通路中起负调控作用。DLK1在肝干细胞中表达,提示可以作为肝干细胞分离的标记物。此外,DLK1在多种分泌性肿瘤细胞中高表达,提示DLK1可能与这些肿瘤的形成密切相关。

DLK1和GPC3在不同肝组织的表达及其临床意义

目的探讨脂肪前体细胞因子1(delta drosophila homolog-like1或delta-like1 homologue,DLK1)和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican-3,GPC3)在原发性肝细胞性肝癌(HCC)中的表达状况及其临床意义。方法分别应用免疫组化S-P法和原位杂交的方法检测HCC150例、肝硬化50例、肝炎组织50例和正常肝组织10例中DLK1和GPC3的表达。结果 DLK1和GPC3在HCC﹑肝硬化﹑肝炎和正常肝组织中的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 DLK1和GPC3的异常表达与肝癌的发展密切相关,DLK1和GPC3之间具有相关性,两者在肝癌的发生发展过程中起非常重要的作用。

DLK1和MSTN基因在绵羊妊娠中后期胎儿中的表达分析

本研究以2个骨骼肌表型差异明显的特克塞尔和乌珠穆沁绵羊为试验对象,研究DLK1和MSTN基因在不同妊娠阶段胎儿不同部位骨骼肌中表达的调控机制及早期肌肉发育规律。在绵羊妊娠第85、100、120和135天时,对胎儿的半腱肌、半膜肌、背最长肌、股四头肌和股二头肌肌肉质量进行方差分析以及对DLK1和MSTN基因在5种骨骼肌中的表达量进行研究。结果表明,妊娠85天时特克塞尔羊的半膜肌、背最长肌、股四头肌和股二头肌质量显著或极显著(P<0.05或P<0.01)高于乌珠穆沁羊;妊娠100天时,5种骨骼肌组织生长发育在品种间的差异达到最大(P<0.05或P<0.01)。实时荧光定量分析表明,随着胎儿日龄的增加,DLK1基因在半腱肌、半膜肌、背最长肌、股四头肌和股二头肌骨骼肌中的表达量有增加的趋势,同时在特克塞尔羊中的表达量高于乌珠穆沁绵羊。在妊娠120天的半腱肌和半膜肌、妊娠100和135天的背最长肌、妊娠85天股四头肌和妊娠135天的股二头肌中DLK1表达量在2个品种间差异显著(P<0.05)。MSTN的表达量在特克塞尔羊中高于乌珠穆沁羊,但整体较低。妊娠135天时背最长肌和股四头肌中MSTN基因的表达量在2个品种间差异显著(P<0.05)。结果显示,DLK1和MSTN基因在不同日龄不同肌肉组织中的差异表达可能与肌肉早期发育有关。

5-Aza-CdR抑制HepG2细胞DLK1基因表达及细胞生长

目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对DLK1基因及肝癌细胞系HepG2增殖、侵袭的影响。方法不同浓度的5-Aza-CdR及PBS作用HepG2细胞后,RT-PCR、Western blot检测DLK1基因及蛋白的表达水平;MTT、Transwell和流式细胞术检测HepG2细胞的生长、侵袭力及细胞周期的变化。结果 HepG2细胞经5-Aza-CdR处理后,DLK1 mRNA、蛋白表达量降低;MTT试验显示细胞生长速度依5-Aza-CdR浓度出现不同程度减慢;流式结果表明G1期细胞减少,S期细胞增加,出现S期阻滞;Transwell证实侵袭能力显著降低(P<0.05)。结论去甲基化药物5-Aza-CdR能有效地抑制DLK1基因的表达,从而抑制肿瘤细胞HepG2生长、增殖、侵袭能力。

原发性肝癌组织中DLK1表达及意义

目的探讨DLK1在原发性肝细胞性肝癌(HCC)发生、发展中的作用。方法分别应用免疫组化SP法和原位杂交的方法检测150例原发性肝细胞癌、50例肝硬化、50例肝炎组织中和10例意外死亡(生前体健)者肝组织中DLK1表达。结果 DLK1蛋白及DLK1 mRNA在HCC中的表达明显高于肝硬化?肝炎和正常肝组织表达(P均<0.05)。DLK1蛋白表达与肿瘤直径及临床分期有明显相关性(P均<0.05)。结论 DLK1高表达可促进HCC的发生、发展。

肝细胞癌中 DLK1、垂体瘤转化基因和血管内皮细胞生长因子的表达及其临床意义

DLK1基因（Delta drosophila homolog-like 1）属于印迹基因［1］，在肝细胞癌组织中表达明显上调，对肝癌的形成起重要作用。垂体瘤转化基因（pituitary tumor transforming gene，PT-TG）在人体正常组织如肝脏、结直肠、胰腺等组织中表达甚微，而在甲状腺癌、垂体瘤、胆管癌等有较高的表达浓度［2］。血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）与肿瘤的血管生成密切相关［3］，在多种恶性肿瘤中表达明显增加，是肿瘤靶向治疗的理想靶点［4］。本实验联合检测 DLK1， PTTG和VEGF在肝细胞癌中的表达，分析三者与肝细胞癌发生、发展的相关性。

DLK2基因在胚胎软骨发育中的表达及意义

目的:研究DLK2(delta drosophila homolog-like 2或delta like 2 homologue)在胚胎软骨发育中的表达及意义。方法:检测ATDC5细胞系正常诱导分化过程中DLK2的表达改变;建立ATDC5-DLK2慢病毒过表达细胞系,检测DLK2基因对ATDC5细胞增殖及分化的影响;通过免疫组织化学检测DLK2在C57BL/6小鼠胚胎(E11.5 d,E16.5 d,E18.5 d)和出生后(P7 d和P14 d)膝关节的时空表达,采用SPSS16.0软件包对数据进行配对t检验。结果:ATDC5细胞正常诱导分化过程中,DLK2的m RNA和蛋白水平逐渐下降;过表达DLK2后,ATDC5细胞增殖速率显著提高(P<0.05),但ATDC5细胞成软骨标志物(Col2a1、Acan、Col10a1)的m RNA水平显著下降(P<0.05);胚胎发育早期(E11.5 d),DLK2在软骨形成处开始有较弱表达,在软骨发育过程中,其表达逐渐增加,而且DLK2在未成熟和成熟的软骨细胞均有表达,关节软骨表层的DLK2表达逐渐下降(P<0.05),但深层几乎不变(P>0.05)。结论:DLK2可能是参与胚胎软骨发育过程的一个重要细胞因子。

鸡DLK1基因的生物信息学分析

DLK1基因是哺乳动物的一个印记基因,DLK1蛋白促进哺乳动物肌肉的生长发育,但抑制脂肪的生长发育。禽类不存在基因组印记现象,目前禽类DLK1基因的功能和调控机制还不清楚。本研究针对鸡等13种动物的DLK1蛋白进行了多序列比较分析、分子进化分析及糖基化分析,同时还比较了人、鼠及鸡的DLK1基因结构、基因同线性、启动子结构以及3′端非编码区结构。结果表明,尽管鸡和人DLK1基因的进化关系较远,但从mRNA拼接形式、基因结构、启动子结构等来看,与鼠相比,鸡和人的DLK1基因有较多相似之处。研究结果为下一步鸡DLK1基因的功能和调控研究提供了参考依据,同时,也为印迹基因的进化研究以及鸡的脂肪生长发育研究奠定了基础。

膜蛋白DLK1在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨DLK1蛋白及甲胎蛋白(AFP)在肝细胞癌(HCC)组织中表达的临床意义。方法用免疫组织化学法检测88例HCC患者肝癌组织和癌旁肝组织中DLK1及AFP的表达。结果88例HCC患者肝癌组织中DLK1蛋白阳性50例(56.8%),AFP阳性39例(44.3%)。其中在AFP阴性组中仍有高达25.0%的DLK1蛋白呈明显的阳性表达。DLK1在肝癌组织中的阳性率明显高于AFP。所有患者癌旁肝组织DLK1蛋白及AFP均为阴性。结论DLK1蛋白检测对HCC有重要的诊断价值,肝组织DLK1蛋白和AFP联合检测可以明显提高HCC的病理诊断率。

食管癌组织中Dlk-1蛋白的表达及其意义

目的通过对食管癌组织中Dlk-1蛋白表达的观察,探讨其临床意义。方法收集本院行食管癌根治术的食管癌标本,对食管癌及癌旁正常组织两组中Dlk-1蛋白的表达以免疫组织化学方法进行检测,并对Dlk-1蛋白表达与肿瘤分级及临床病理分期之间的相关性进行分析。结果 Dlk-1蛋白在食管癌组的表达与其在癌旁正常组织中的表达两者间存在显著的统计学差异(P<0.01)。食管癌组织中Dlk-1蛋白阳性表达与肿瘤临床病理分期呈正相关(P<0.01),与食管癌组织学分级负相关(P<0.01)。结论 Dlk-1蛋白的表达与食管癌的发生发展可能密切相关,将为食管癌的临床治疗及预后分析等提供新的思路。

Dlk-1蛋白在结肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨Dlk-1蛋白在结肠癌中的表达及临床意义。方法收集我院53例结肠癌术后病理切片,应用免疫组化的方法检测Dlk-1蛋白在结肠癌组织及19例癌旁正常组织中的表达情况。结果 Dlk-1蛋白在结肠癌组的表达(54.72%)与癌旁正常组织中的表达(0)差异有高度统计学意义(P<0.01)。结肠癌中Dlk-1蛋白的阳性表达随着肿瘤组织分化程度的降低而明显升高,随着临床分期的增高而升高。结论 Dlk-1的表达与结肠癌的发生、发展有密切相关,将为临床结肠癌的治疗及预后判断提供新的思路。