Notch3/DLL4信号通路对颈部淋巴水囊瘤后淋巴管发育的影响

目的:探究Notch3/DLL4信号通路对颈部淋巴水囊瘤(CH)后淋巴管成熟发育的影响。方法:选取C57BL/6小鼠和C57BL/6背景Notch3基因敲入小鼠,将两种小鼠分为正常组(对照组)和Notch3基因敲入组(突变组)。选取F2代小鼠处死,取小鼠颈部淋巴结分别进行HE染色、Masson染色、RT-qPCR、Western blot、免疫组化检测。结果:HE及Masson染色结果显示,与对照组比,突变组小鼠的淋巴结构被显著破坏,细胞纤维化严重。RT-qPCR结果显示,与对照组比,突变组小鼠淋巴结中DLL4、Hes1和VEGFR3 mRNA表达显著下降(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比,突变组小鼠淋巴结中DLL4、Hes1和VEGFR3蛋白表达显著下降(P<0.05)。免疫组化结果显示,与对照组相比,突变组小鼠淋巴结中DLL4、Hes1、Ang2、VEGFA和VEGFR3染色较浅,蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论:Notch3/DLL4信号通路能够调控小鼠颈部CH的形成,其机制可能与淋巴管发育有关。

IL-17及其受体调控DLL4-Notch信号通路影响甲状腺乳头状癌新生血管生成

目的研究白介素-17(IL-17)/白介素-17受体(IL-17R)调控DLL4-Notch信号通路影响甲状腺乳头状癌血管生成的机制。方法建立甲状腺乳头状癌细胞(TPC-1)-内皮细胞共培养体系,检测50 ng/ml IL-17刺激剂对共培养系统中人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移、成管能力的影响。Western blot法检测共培养体系中HUVECs DLL4-Notch信号通路和血管新生蛋白表达水平。结果50 ng/ml重组人IL-17A干预可显著促进共培养体系中HUVECs的增殖、迁移和成管能力(P<0.01)。pLKO.1-EGFP-Puro-IL-17R转染的TPC-1细胞共培养HUVECs经50 ng/ml重组人IL-17A干预6 h后,细胞中DLL4、Notch、HES、HEY和血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的表达水平得到不同程度的上调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。DLL4-Notch通路抑制剂DAPT干预可显著抑制IL-17刺激剂对共培养体系细胞中HES、HEY、VEGFR-1、VEGFR-2蛋白表达增加作用(P<0.01)。结论IL-17/IL-17R可能通过DLL4-Notch信号通路促进甲状腺乳头状癌血管生成。

隔药饼灸对动脉粥样硬化兔胸主动脉VEGF-A、VEGFR-2及DLL4表达的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化兔胸主动脉血管内皮生长因子(VEGF)-A、血管内皮生长因子受体(VEGFR)-2、DLL4表达的影响,探讨其促进受损血管内皮修复的机制。方法将45只兔按随机数字表法分为正常组、模型组、隔药饼灸组、直接灸组和药饼敷贴组,每组9只。正常组采用普通饲料喂养,其余各组采用高脂饲料喂养8周制备动脉粥样硬化兔模型,造模成功后,各治疗组于“巨阙”和双侧“天枢”“丰隆”,或双侧“心俞”“肝俞”“脾俞”予相应处理,30 min/次,每日1次,连续8周。HE染色观察胸主动脉血管壁形态,Western blot检测胸主动脉组织VEGF-A、VEGFR-2、DLL4蛋白表达,ELISA检测血清VEGF含量。结果与正常组比较,模型组兔胸主动脉壁结构受损明显,胸主动脉组织VEGF-A、VEGFR-2、DLL4蛋白表达明显升高(P<0.01),血清VEGF含量明显增加(P<0.01);与模型组比较,隔药饼灸组兔胸主动脉内皮损伤好转,直接灸组和药饼敷贴组兔胸主动脉内皮病理变化有所减轻,隔药饼灸组、直接灸组和药饼敷贴组兔胸主动脉组织VEGFR-2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),直接灸组和药饼敷贴组兔胸主动脉组织DLL4蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),隔药饼灸组和药饼敷贴组兔血清VEGF含量明显减少(P<0.01)。结论隔药饼灸可能通过下调动脉粥样硬化兔胸主动脉VEGF-A、VEGFR-2、DLL4表达,降低血清VEGF含量,促进受损血管内皮修复,从而减轻动脉粥样硬化病变。

针刀干预对颈型颈椎病兔颈肌超声影像及Notch1/Dll1表达的影响

目的观察针刀干预对颈型颈椎病模型兔颈肌超声影像及肌肉组织内翅缘缺刻信号通路(notch signaling pathway,Notch)中的受体1(Notch1)及Delta样配体1(delta like ligand protein 1,Dll1)蛋白和基因表达的影响,探讨针刀干预对颈型颈椎病颈肌修复的效应机制。方法按随机数字表法将24只健康新西兰兔分为空白组、模型组和针刀组,每组各8只。除空白组外其余建立颈型颈椎病动物模型,持续8周。造模后通过颈椎侧位X线片验证是否造模成功。证实造模成功后实行针刀干预,每周1次,共4次。干预结束通过多普勒超声检查观察颈肌影像变化,采用蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR法(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测Notch1、Dll1蛋白和基因表达。结果造模后模型组和针刀组超声检查下可见局部肌肉回声增强、连续性中断,血流信号增强;干预后针刀组回声较均匀,血流信号减少。与空白组相比,模型组兔Notch1/Dll1蛋白和mRNA水平均明显升高(P<0.05);与模型组相比,针刀组Notch1/Dll1蛋白和mRNA水平明显降低(P<0.05)。结论针刀治疗能够明显下调Notch1/Dll1表达水平,促进肌肉修复,这可能是针刀治疗颈型颈椎病颈肌损伤的作用机制之一。

基于VEGF/DLL4信号研究桃红四物汤对创伤性股骨头坏死大鼠的作用及机制

目的通过观察桃红四物汤对创伤性股骨头坏死大鼠的VEGFA、DLL4蛋白表达的影响,探究其防治创伤性股骨头坏死的作用机制。方法将40只SPF级健康雄性SD大鼠,采用随机数字表分为正常组、模型组、桃红四物汤低剂量组、桃红四物汤中剂量组和桃红四物汤高剂量组,每组8只,共5组。正常组大鼠予以常规喂养加生理盐水灌胃;模型组手术造模成功后予以常规饲料喂养加生理盐水灌胃;桃红四物汤低、中、高剂量组分别予以正常喂养并分别予以桃红四物汤9 g/kg、18 g/kg、36 g/kg的标准进行灌胃。持续干预4周后,采集股骨头标本,观察股骨头组织形态学、Micro CT、股骨头血管微密度、VEGFA和DLL4蛋白表达的情况。结果Micro CT可见:桃红四物汤能有效改善创伤性股骨头坏死大鼠股骨头关节面塌陷,以中高剂量组改善明显。病理学形态可见,经桃红四物汤灌胃干预后,大鼠股骨头的骨小梁结构、局部血液供应及空骨陷窝较模型组均出现不同程度的改善,并以桃红四物汤中高剂量组为佳。股骨头微血管密度,与模型组相比,其余4组大鼠股骨头微血管密度都要高,差异有统计学意义(P<0.05);与桃红四物汤高剂量组股骨头微血管密度较低剂量组明显高,差异有统计学意义(P<0.05);其余组间比较无统计学意义(P>0.05)。VEGFA蛋白表达,与模型组比较,其余4组大鼠股骨头VEGFA蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。DLL4蛋白表达,桃红四物汤低、中、高组均具有促进股骨头DLL4蛋白表达,并随着药物浓度的提升上升;与低剂量组比较,桃红四物汤高剂量组蛋白表达明显升高,且差异有统计学意义(P<0.05);但桃红四物汤中高组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论桃红四物汤具有改善创伤性股骨头坏死大鼠股骨头的形态、促进局部血管新生,改善骨质代谢,延缓股骨头坏死的进程的作用;其分子机制可能与激活VEGF/Notch信号通路,提高VEGFA和DLL4蛋白的表达,促进股骨头局部血管新生有关。

刺山柑乙醇提取物乳膏对系统性硬皮病小鼠Notch1、DLL1和ADAM17表达的影响

目的:在系统性硬皮病(SSc)模型小鼠上研究刺山柑乙醇提取物乳膏对Notch通路中重要蛋白Notch1、DLL1和ADAM17的调控作用。方法:给予刺山柑乙醇提取物乳膏冶疗SSc模型小鼠(模型应用BALB/c小鼠皮下注射博莱霉素4 w建立)8 w。小鼠皮肤组织中Notch1 mRNA和蛋白的表达分别采用实时荧光逆转录PCR(qPCR)和免疫组化法测定,DLL1和ADAM17含量采用ELISA法测定。结果:过表达的Notch1 mRNA和蛋白可被450、900 mg·kg^(-1)刺山柑乙醇提取物乳膏抑制,DLL1和ADAM17可被900mg·kg^(-1)刺山柑乙醇提取物乳膏抑制。结论:SSc小鼠受损皮肤Notch通路中过表达的Notch1、DLL1和ADAM17可被刺山柑乙醇提取物乳膏抑制,提示其对SSc Notch通路的过度激活有一定抑制作用。

益气活血化浊解毒方对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织VEGF、Notch1、Dll4表达的影响

目的观察益气活血化浊解毒方对脑缺血再灌注损伤大鼠的治疗作用,初步探讨其保护神经血管单元的机制。方法将SPF级大鼠随机分为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组和尼莫地平组。采用线栓法制备大脑中动脉闭塞模型,各组予相应干预,3天后计算各组大鼠神经功能评分,TTC染色测定脑梗死面积,免疫组化检测大鼠脑组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth inhibitor,VEGF)蛋白表达,q-PCR检测大鼠脑组织Notch1、Dll4 mRNA表达,Western blot检测大鼠脑组织VEGF、Notch1、Dll4蛋白表达。结果(1)神经功能评分结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠神经功能缺失评分均有所降低(P<0.05);(2)脑梗死面积结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠脑梗死面积显著缩小(P<0.05);(3)免疫组化结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠脑组织VEGF蛋白表达显著增大(P<0.05);(4)q-PCR结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠脑组织Notch1、Dll4 mRNA表达明显增加(P<0.05)(5)免疫蛋白印迹法结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠脑组织VEGF、Notch1、Dll4蛋白表达增加(P<0.05)。结论益气活血化浊解毒方可以调控脑缺血再灌注损伤大鼠神经血管单元发挥神经保护作用,其机制可能与上调大鼠脑组织VEGF、Notch1、Dll4表达有关。

DLL1基因杂合变异伴癫痫发作1例

癫痫发作是脑部神经元的过度放电引起的大脑功能紊乱,属于神经内科的常见急症,在儿童和青少年中的发病率较高。一些发育迟缓、智力残疾和大脑畸形的患儿可能包含基因的缺失或突变。头颅MRI和MRA检查及基因检测对癫痫的诊断有重要价值。本文通过报道1例DLL1基因杂合变异伴癫痫发作患儿的临床表现、实验室检查及基因检测结果,供临床诊断及学习参考。

基于DLL技术和COM组件技术实现LabVIEW和MATLAB混合编程

LabVIEW和MATLAB混合编程应用日益广泛,然而大多数开发软件在客户端应用时需要同步安装MATLAB,大大限制了软件的推广应用。针对LabVIEW和MATLAB混合编程开发软件发布后独立于MATLAB运行的要求,从LabVIEW和MATLAB共同支持的数据接口技术出发,论述LabVIEW调用MATLAB计算代码的方法,比较每种接口技术的优势和缺点。通过实例实现了基于DLL(动态链接库)技术和COM(基于组件对象模型)组件技术的LabVIEW与MATLAB混合编程。成功实现了应用程序独立运行并明显改善了执行效率。

Visual Fortran基于Win32 DLL的混合编程技术

VisualFortran与VisualC++、VisualBasic、Delphi的混合编程,可将Fortran编制的数学模型融入到各种辅助决策综合信息系统中.其混合编程实现的途径为:在VisualFortran中,将执行计算的各种过程集成Win32DLL;在其它基于对象的语言中导入DLL,并对FortranDLL输出的过程实施调用.实现的关键是:在调用约定匹配的前提下,使VisualC++、VisualBasic、Delphi程序中声明的外部过程原型,与FortranDLL中的导出过程在目标过程名、参数类型及参数传递上保持一致.

VB调用VC创建的Win32 DLL函数

探讨了Visual C++创建Win32 DLL,Visual Basic其函数实施调用过程中,命名修饰,调用约定、命名约定的匹配,数据类型对应以及参数传递一致性等问题,并给出了具体的应用实例。

基于DLL技术的特洛伊木马植入新方案

研究了如何将Windows环境下的动态链接库(DLL)技术与远程线程插入技术结合起来实现特洛伊木马植入的新方案。在该方案中,提出了特洛伊木马程序DLL模块化,并且创建了独立的特洛伊木马植入应用程序,由该植入程序实现从特洛伊木马程序中分离出来的植入功能。采用该方案实现的木马植入,具有很好的隐蔽性和灵活性。

VC与MATLAB混合编程之DLL实现方法

文章首先论述了ＶＣ和 ＭＡＴＬＡＢ各自的优缺点，然后提出了 ＶＣ与 ＭＡＴＬＡＢ混合编程的几种方法，并详细阐述。了如何通过动态链接库（ＤＬＬ）实现二者的结合。重点突出了如何在 ＭＡＴＬＡＢ生成动态链接库封装开发好的算法，以及如何在ＶＣ的集成开发环境中调用ＤＬＬ。该方法充分发挥了ＶＣ与ＭＡＴＬＡＢ的优势，为科学研究和工程技术提供了更强的技术支持。

DLL4、VEGF在肺腺癌中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

背景与目的血管发生(angiogenesis)依赖于多种促进血管发生因子和抑制血管发生因子的综合交互作用调控。血管内皮生长因子(VEGF)和Notch信号传递途径(Notch signaling pathway)参与了此过程。本研究旨在探讨肺腺癌组织中Notch配体DLL4、VEGF的表达及其与肺腺癌血管生成的关系及临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测80例肺腺癌(包括细支气管肺泡癌和普通肺腺癌)石蜡切片组织中DLL4、VEGF和CD34的表达。结果DLL4、VEGF的表达与肺腺癌患者的肿瘤直径、临床分期、组织学分级、淋巴结转移密切相关,DLL4阳性表达病例中VEGF表达率明显比DLL4阴性表达病例高,DLL4、VEGF共表达时与微血管密度的相关性比DLL4单独表达更明显。DLL4的表达在普通肺腺癌中明显高于细支气管肺泡癌。结论肺腺癌的预后与血管生成明显相关,DLL4的高表达与肺腺癌转移预后密切相关。

家蚕scaffold中新微卫星标记的获得与Dll基因的遗传连锁分析

在进行家蚕遗传连锁图谱的整合过程中,需要寻找两个作图群体中都有多态的共有标记,但这种共有标记数量较少。为此,利用已有的简单重复序列(SSR)与家蚕基因组进行比对,寻找到匹配的scaffold,再采用SS-RHunter1.3搜索其中的SSR区域,排除掉原有SSR序列,选择重复次数在6～23之间的微卫星区域设计引物,用BC1群体的亲本及F1进行多态性的筛选,选择有多态性的标记用7019×(F50B×7019)BC1群体进行基因型分析。结果显示:根据原家蚕第2连锁群上SSR位点新设计的邻近的7对引物中,有6对引物在BC1群体的亲本中有多态性,选择其中2个进行遗传连锁分析,作图结果与原有相应SSR标记的作图结果基本保持一致,其中根据S0207所在scaffold上开发的NS02071和NS02072之间的图距达到6.9 cM;根据家蚕大造和C108的回交一代初步定位的D ll基因的位置与后来在其所在scaffold上所设计的临近引物D ll1和D ll2的定位一致,且这两个标记在遗传连锁图上的图距为0.0 cM,表明这两个标记在遗传图上的位置重叠。由此,在较短的DNA区域内(在遗传连锁图上表现1个位点)便有多个SSR标记可供使用,将为定位家蚕重要经济性状基因、分子辅助育种及功能基因研究等提供更多有价值的信息。

Notch信号通路配体Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中的表达

目的:探讨Notch信号通路配体Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中的表达及意义。方法:选取轻度子痫前期患者30例(轻度组)、重度子痫前期患者30例(重度组)、正常妊娠孕妇30例(对照组),采用免疫组化法检测其胎盘组织中Jagged1、Dll4的定位表达,采用荧光定量PCR技术和Western blot法分别检测胎盘组织中Jagged1、Dll4 mRNA及蛋白的表达。结果:Jagged1主要表达于血管内皮细胞和绒毛滋养层细胞,Dll4主要表达于血管内皮细胞。轻、重度组胎盘组织中Jagged1、Dll4 mRNA及蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.05),且重度组低于轻度组(P<0.05);对照组胎盘组织中Jagged1与Dll4在mRNA和蛋白水平上的表达均呈正相关(r=0.806和0.808,P<0.05),轻度组中两者表达的相关性减弱(r=0.675和0.560,P<0.05),而在重度组中未发现两者的相关性。结论:Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中表达失衡,与子痫前期的发病关系密切。

Fortran DLL组件集成到.NET平台(一)

针对新出现的.NET平台不支持Fortran语言,不能将Fortran开发的数学模型直接融入.NET平台的实际情况,提出在VisualFortran环境中将数学模型重构为动态链接库DLL,VisualStudio.NET通过平台调用来使用DLL中计算例程的方法,来集成Fortran数学模型.开发实例对典型的数学模型进行了模拟,结果表明这种方法是可行的,从而为Fortran数学模型集成到.NET平台提供了一种有效的途径.

重组人内皮抑素通过激活Dll4/Notch通路抑制大鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生

目的:观察重组人内皮抑素(rh ES)对大鼠动脉粥样硬化(AS)斑块内新生血管的抑制作用,探讨Dll4/Notch信号通路在其中的调控机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(N组)、AS组和AS+rh ES组,每组10只。N组始终喂基础饲料,其余2组采用高脂喂养、维生素D3负荷及球囊损伤动脉内膜建立大鼠AS模型。AS+rh ES组以10 mg·kg^(-1)·d^(-1)的rh ES腹腔注射4周,另2组注射等量生理盐水。采血检测各组的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-1(IL-1)和肌钙蛋白I(Tn I)等;免疫组化CD31染色观察新生血管密度;Western blot法检测主动脉内Dll4、Notch1蛋白表达。结果:与N组比较,AS组和AS+rh ES组的TC、TG、LDL-C、CRP和L-1水平均显著升高(P<0.05),但上述指标在AS组和AS+rh ES组之间差异无统计学显著性。CD31染色结果显示,AS组的新生血管表达最丰富;与AS组比较,AS+rh ES组的新生血管密度显著下降(P<0.05)。AS组的Dll4和Notch1蛋白水平显著低于N组(P<0.05);相比AS组,AS+rh ES组的Dll4和Notch1蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:rh ES能够抑制大鼠AS斑块内血管新生,Dll4/Notch通路的激活可能是rh ES抑制斑块内的血管新生的信号机制。

上皮性卵巢癌中八聚体结合转录因子4、Notch1及DLL4的表达及其临床意义

目的探讨上皮性卵巢癌(EOC)中八聚体结合转录因子4(OCT4)、Notch1及DLL4蛋白表达之间的关系及其功能意义。方法收集207例EOC术后标本和65例卵巢良性上皮性肿瘤标本,应用免疫组化学法检测EOC和卵巢良性上皮性肿瘤组织中OCT4、Notch1以及DLL4蛋白的表达情况。结果 EOC组织和卵巢良性上皮性肿瘤组织中,OCT4、Notch1和DLL4蛋白的阳性表达率分别为60.0%、61.8%、60.9%和9.2%、6.2%、0,差异均有统计学意义(P<0.05);OCT4、Notch1和DLL4的表达与EOC的组织学分化、FIGO分期、盆腔淋巴结转移有关(P<0.05);DLL4蛋白的表达分别与OCT4和Notch1的表达呈正相关关系(r值分别为0.758和0.704,P均<0.001),同时,OCT4与Notch1蛋白的表达亦呈正相关(r=0.645,P<0.001)。Kaplan-Meier生存分析表明,OCT4、Notch1和DLL4蛋白的过表达均与患者的生存率有关,3种蛋白表达阳性组患者生存率均明显低于蛋白表达阴性组患者(P<0.05)。多因素分析:OCT4、DLL4蛋白的表达和FIGO分期是影响EOC根治术后患者预后的独立因素(P<0.05)。结论OCT4、Notch1及DLL4的过表达与EOC的组织学分化程度、转移和预后等因素密切相关,联合检测这些指标可能对于EOC患者的病情进展和预后判断给予重要提示。

VEGF和DLL4在婴幼儿血管瘤组织中的表达及相关性

目的探讨VEGF及DLL4在婴幼儿血管瘤发生、发展过程中的作用机制。方法应用免疫组织化学SP法检测50例婴幼儿血管瘤(增生期26例,消退期24例)组织中VEGF,DLL4和FⅧRAg的表达水平。采用HPIAS-1000图文报告管理系统对VEGF和DLL4的表达进行定量分析。结果增生期组VEGF的表达明显高于消退期组和正常皮肤组(P<0.05),而后两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。增生期组DLL4的表达明显高于消退期组和正常皮肤组(P<0.05),而后两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 VEGF和DLL4在增生期血管瘤组织中高表达,两者的表达具有明显的一致性,共同促进血管瘤内皮细胞的增殖,在血管瘤的发生、发展过程中起了重要的促进作用。