益气活血化浊解毒方对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织VEGF、Notch1、Dll4表达的影响

目的观察益气活血化浊解毒方对脑缺血再灌注损伤大鼠的治疗作用,初步探讨其保护神经血管单元的机制。方法将SPF级大鼠随机分为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组和尼莫地平组。采用线栓法制备大脑中动脉闭塞模型,各组予相应干预,3天后计算各组大鼠神经功能评分,TTC染色测定脑梗死面积,免疫组化检测大鼠脑组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth inhibitor,VEGF)蛋白表达,q-PCR检测大鼠脑组织Notch1、Dll4 mRNA表达,Western blot检测大鼠脑组织VEGF、Notch1、Dll4蛋白表达。结果(1)神经功能评分结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠神经功能缺失评分均有所降低(P<0.05);(2)脑梗死面积结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠脑梗死面积显著缩小(P<0.05);(3)免疫组化结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠脑组织VEGF蛋白表达显著增大(P<0.05);(4)q-PCR结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠脑组织Notch1、Dll4 mRNA表达明显增加(P<0.05)(5)免疫蛋白印迹法结果显示:中药低、中、高剂量组及尼莫地平组较模型组大鼠脑组织VEGF、Notch1、Dll4蛋白表达增加(P<0.05)。结论益气活血化浊解毒方可以调控脑缺血再灌注损伤大鼠神经血管单元发挥神经保护作用,其机制可能与上调大鼠脑组织VEGF、Notch1、Dll4表达有关。

Notch信号通路配体Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中的表达

目的:探讨Notch信号通路配体Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中的表达及意义。方法:选取轻度子痫前期患者30例(轻度组)、重度子痫前期患者30例(重度组)、正常妊娠孕妇30例(对照组),采用免疫组化法检测其胎盘组织中Jagged1、Dll4的定位表达,采用荧光定量PCR技术和Western blot法分别检测胎盘组织中Jagged1、Dll4 mRNA及蛋白的表达。结果:Jagged1主要表达于血管内皮细胞和绒毛滋养层细胞,Dll4主要表达于血管内皮细胞。轻、重度组胎盘组织中Jagged1、Dll4 mRNA及蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.05),且重度组低于轻度组(P<0.05);对照组胎盘组织中Jagged1与Dll4在mRNA和蛋白水平上的表达均呈正相关(r=0.806和0.808,P<0.05),轻度组中两者表达的相关性减弱(r=0.675和0.560,P<0.05),而在重度组中未发现两者的相关性。结论:Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中表达失衡,与子痫前期的发病关系密切。

上皮性卵巢癌中八聚体结合转录因子4、Notch1及DLL4的表达及其临床意义

目的探讨上皮性卵巢癌(EOC)中八聚体结合转录因子4(OCT4)、Notch1及DLL4蛋白表达之间的关系及其功能意义。方法收集207例EOC术后标本和65例卵巢良性上皮性肿瘤标本,应用免疫组化学法检测EOC和卵巢良性上皮性肿瘤组织中OCT4、Notch1以及DLL4蛋白的表达情况。结果 EOC组织和卵巢良性上皮性肿瘤组织中,OCT4、Notch1和DLL4蛋白的阳性表达率分别为60.0%、61.8%、60.9%和9.2%、6.2%、0,差异均有统计学意义(P<0.05);OCT4、Notch1和DLL4的表达与EOC的组织学分化、FIGO分期、盆腔淋巴结转移有关(P<0.05);DLL4蛋白的表达分别与OCT4和Notch1的表达呈正相关关系(r值分别为0.758和0.704,P均<0.001),同时,OCT4与Notch1蛋白的表达亦呈正相关(r=0.645,P<0.001)。Kaplan-Meier生存分析表明,OCT4、Notch1和DLL4蛋白的过表达均与患者的生存率有关,3种蛋白表达阳性组患者生存率均明显低于蛋白表达阴性组患者(P<0.05)。多因素分析:OCT4、DLL4蛋白的表达和FIGO分期是影响EOC根治术后患者预后的独立因素(P<0.05)。结论OCT4、Notch1及DLL4的过表达与EOC的组织学分化程度、转移和预后等因素密切相关,联合检测这些指标可能对于EOC患者的病情进展和预后判断给予重要提示。

DLL4/Notch1配体过表达抑制K562细胞生长机制研究

本研究旨在探讨Notch1信号通路的配体delta-like ligand 4(DLL4)基因过表达对K562细胞增殖的影响及其可能的作用机制。采用脂质体介导将含配体DLL4基因的质粒pBudCE4.1-DLL4转染K562细胞,通过RTPCR和Western blot检测转染48 h后DLL4基因的mRNA及蛋白表达,同样检测转染后Notch1受体胞内区(NICD)、下游靶基因Hes1的mRNA及蛋白表达;通过Western blot检测与Notch信号通路相关的细胞转录因子YY1、原癌基因C-MYC及抑癌基因Rb蛋白的表达水平;用CCK-8法检测转染后细胞的增殖情况;用流式细胞术检测转染质粒48 h后各组细胞的凋亡情况。结果表明,DLL4基因转染后的K562细胞中DLL4、NICD及下游靶基因Hes1的mRNA及蛋白表达量比对照组明显增多(P<0.05),说明DLL4的过表达激活了Notch1信号通路;Western blot方法检测显示,DLL4的转染增加了细胞转录因子YY1、原癌基因C-MYC及抑癌基因Rb蛋白的表达,从而抑制了K562细胞的生长,诱导细胞周期停滞于G1期及细胞凋亡的增加。结论:外源性DLL4基因过表达可有效活化K562细胞内Notch1信号通路,可能通过YY1、C-MYC及Rb等Notch信号通路相关基因的高表达诱导K562细胞的生长减慢及细胞凋亡。

胃癌中Notch1、DLL4和HES1的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的通过检测Notch信号系统中的Notch1、DLL4和HES1蛋白在胃癌组织中的表达,分析它们与患者临床病理特征及生存期之间的关系,探索胃癌发生发展的机制。方法将胃癌、癌旁组织制作组织芯片,采用免疫组化法检测Notch1、DLL4和HES1的表达,随访患者,分析它们的表达与患者临床病理特征及生存期之间的关系。结果 Notch1在胃癌、癌旁及对照组中的表达阳性率分别为48.30%、25.00%和16.67%,三者间差异有统计学意义(P<0.05);Notch1的表达阳性率在有淋巴结转移组中为41.3%,显著低于无淋巴结转移组(61.28%,P<0.05);在其他病理特征间Notch1表达差异均无统计学意义(P>0.05)。DLL4在胃癌、癌旁和对照组中的表达阳性率分别为55.94%、45.7%和56.67%,三者间差异无统计学意义(P>0.05);在不同病理特征间DLL4的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。HES1在胃癌、癌旁和对照组中的表达阳性率分别为36.64%、34.40%和33.3%,三者间差异无统计学意义(P>0.05);HES1在低分化胃癌中的表达阳性率为51.43%,高于高/中分化组(31.25%,P<0.05);在其他病理特征间HES1的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。Notch1、DLL4和HES1阳性组和阴性组生存期之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论胃癌组织中Notch1呈高表达,可作为胃癌诊断和治疗的靶点;Notch1的表达与胃癌淋巴结转移呈负相关;HES1在低分化胃癌中表达升高,可能是胃癌分化程度的一个标志物。

小细胞肺癌中VEGF、Dll4及Notch1的表达及相关性研究

目的:探讨小细胞肺癌肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、Dll4及Notch1的表达水平及相互关系,寻找SCLC靶向治疗的新靶点。方法:采用免疫组化法测量45例SCLC肿瘤组织中VEGF、Dll4及Notch1蛋白的表达水平,并选取20例癌旁正常组织作对照组。结果:VEGF、Dll4在SCLC肿瘤组织中的阳性率均明显高于癌旁正常组织(P<0.01),Notch1在两组中的表达差异无统计学意义(P>0.05);在SCLC肿瘤组织中VEGF与Dll4的表达呈高度正相关(rs=0.867,P<0.01),Notch1与VEGF的表达呈负相关(rs=-0.425,P<0.01),Notch1与Dll4的表达亦呈负相关(rs=-0.370,P<0.05)。结论:大多数SCLC的肿瘤组织中均存在VEGF、Dll4的表达,Notch1基本无表达,三者之间存在相关性。

结肠癌中DLL4/Notch-1的表达及意义

目的:探讨DLL4、Notch1在结肠癌中的表达及其临床意义。方法:收集十堰市人民医院病理科2009年1月至2012年10月存档的结肠蜡块标本95例,其中正常黏膜组织8例,结肠癌70例,包括高分化腺癌30例、中分化腺癌25例、低分化腺癌15例;结肠腺瘤17例。运用免疫组织化学SP法检测DLL4、Notch1在组织中的表达,分析其表达水平与临床病理之间的关系。结果:(1)在结肠正常黏膜一腺瘤-癌序列中,DLL4的阳性率呈递增趋势,其在结肠癌组中的表达率高于正常黏膜组(P<0.05);(2)Notch-1的阳性率在结肠正常黏膜-腺瘤-癌序列中亦呈递增趋势。其在结肠癌组中的表达率高于正常黏膜组(P<0.05);(3)DLL4、Notch-1在结肠癌不同分化程度中的表述率不同,分化越低,阳性率越高(P<0.01)。结论:DLLA/Notch1的表达与结肠癌的发生、发展有关,可为结肠癌基因治疗提供靶点。

缺氧条件下人脐静脉内皮细胞Ang-2、Notch1、Dll4、HIF-1α表达以及沙利度胺对其表达的影响

背景:沙利度胺治疗胃肠道血管畸形所致的难治性消化道出血安全、有效,而胃肠道血管畸形所致的消化道出血可能与缺氧引起的血管代偿性增生有关。目的:探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成素2(Ang-2)、Notch1、Dll4和缺氧诱导因子(HIF)-1α在缺氧环境中的表达以及沙利度胺的干预机制。方法:HUVEC分别于常氧和缺氧环境下培养。缺氧培养的HUVEC分为溶剂对照组和不同浓度(25、50、100、200μg/mL)沙利度胺组。以Real-time PCR和蛋白质印迹法分别检测Ang-2、Notch1、Dll4、HIF-1αmRNA和蛋白表达。结果:缺氧条件下Ang-2、Notch1、Dll4、HIF-1αmRNA和蛋白表达均高于常氧状态,差异有统计学意义(P<0.05)。沙利度胺可呈浓度依赖性地抑制HUVEC Ang-2、Notch1、Dll4 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:沙利度胺对Ang-2、Notch1、Dll4表达的抑制作用可能是其抑制血管生成从而治疗胃肠道血管畸形致消化道出血的机制之一。

基于DLL4/Notch1信号通路的麦粒灸对薄型子宫内膜大鼠血管生成的影响

目的观察麦粒灸对薄型子宫内膜大鼠血管生成的影响,探讨其可能的作用机制。方法30只SPF级成年雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、麦粒灸组,每组10只。除对照组外,其余2组大鼠采用95%乙醇宫腔注射法于动情期制备薄型子宫内膜模型。麦粒灸组造模后次日麦粒灸“关元”“子宫”,每穴7壮,1次/d,对照组和模型组大鼠每日麻醉后固定,连续3个动情周期(约15 d)。干预结束后,HE染色观察大鼠子宫内膜形态,免疫组化检测大鼠子宫内膜组织血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素-2(Ang-2)表达,Western blot检测大鼠子宫内膜组织DLL4和Notch1蛋白表达,RT-qPCR检测大鼠子宫内膜组织VEGF、Ang-2、DLL4和Notch1 mRNA表达。结果与对照组比较,模型组大鼠子宫内膜明显变薄,腺体、血管数目明显减少,子宫内膜组织VEGF、Ang-2、DLL4和Notch1蛋白及mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,麦粒灸组大鼠子宫内膜厚度明显增加,腺体、血管数目明显增多,子宫内膜组织VEGF、Ang-2、DLL4和Notch1蛋白及mRNA水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论麦粒灸可改善子宫内膜厚度,促进子宫内膜血管生成,达到修复作用,其机制与促进薄型子宫内膜大鼠子宫内膜组织VEGF、Ang-2表达,上调Notch信号通路相关分子DLL4、Notch1水平有关。

全反式维甲酸对食管癌KYSE70细胞增殖、迁移及Notch1、DLL4、VEGF-C表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)单独及联合维甲酸受体β(RARβ)激动剂CD2314或抑制剂LE135对食管癌KYSE70细胞增殖、迁移的影响以及可能机制。方法:将KYSE70细胞分为ATRA组、ATRA+CD2314组、ATRA+LE135组和对照组,采用CCK-8法检测各组细胞分别处理24、48、72 h的增殖情况,通过划痕实验测定处理24 h后的迁移能力,采用Western blot方法检测处理48 h后各组细胞Notch1、DLL4和VEGF-C蛋白的表达情况。结果:处理24、48和72 h后,ATRA+CD2314组细胞增殖抑制率高于ATRA组,ATRA+LE135组低于ATRA组(P<0.05);处理24 h后,ATRA组细胞的迁移能力低于对照组,ATRA+CD2314组细胞的迁移能力低于ATRA组(P<0.05),而ATRA+LE135组高于ATRA组(P<0.05);处理48 h后,ATRA组细胞Notch1蛋白表达量高于对照组,DLL4和VEGF-C蛋白表达量低于对照组,ATRA+CD2314组细胞Notch1蛋白表达量高于ATRA组,而DLL4和VEGF-C蛋白的表达量低于ATRA组;ATRA+LE135组细胞Notch1蛋白表达量低于ATRA组,DLL4和VEGF-C蛋白表达量高于ATRA组(P<0.05)。结论:ATRA可能通过上调Notch1蛋白,下调DLL4、VEGF-C蛋白的表达抑制KYSE70细胞增殖和迁移,增强RARβ的表达可进一步增强这一作用。

rno-miR-30b-5p对葡萄膜炎大鼠Notch1和Dll4基因表达的调控作用

目的探讨rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法应用双荧光素酶检测rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用。6～8周龄健康Lewis大鼠12只,随机分为对照组和EAU模型组,EAU模型组大鼠建立EAU模型。于免疫后12 d分离大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,Q-PCR检测rno-miR-30b-5p、Notch1和Dll4基因的表达水平,ELISA检测Notch1和Dll4蛋白的表达变化;流式细胞仪检测两组大鼠脾脏和淋巴结中Th17和Treg细胞的表达水平。结果双荧光素酶检测结果表明,Notch1和Dll4为rno-miR-30b-5p调控的靶基因。Q-PCR分析结果显示,相比于正常对照组(1. 00),免疫后12 d,rno-miR-30b-5p基因在EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中的相对表达水平分别为0. 41±0. 12、0. 37±0. 09和0. 25±0. 07,均呈显著下调表达,而Notch1和Dll4基因呈显著上调表达,且差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。ELISA检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4蛋白的表达水平均明显高于对照组(均为P <0. 05)。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠脾脏和淋巴结中Th17细胞因子的表达水平明显升高,而Treg细胞因子的表达水平明显降低。结论 rno-miR-30b-5p可负调控Notch1和Dll4基因的表达。在EAU模型大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织中,rno-miR-30b-5p的下调表达可使Notch1和Dll4基因的表达水平显著升高,并使Th17/Treg比例发生紊乱,从而影响葡萄膜炎的发生发展。

心痛泰干预心肌缺血大鼠心肌中Notch1、Dll4蛋白表达的研究

目的:通过构建急性心肌缺血模型,探讨心痛泰对急性心肌缺血大鼠新生血管密度、缺血心肌中Notch1、Dll4蛋白表达的影响。方法:100只SD大鼠,除假手术组10只外,其余大鼠予以结扎大鼠冠状动脉左前降支造成急性心肌缺血损伤模型,成模大鼠随机分为模型组,心痛泰低、中、高剂量组及麝香保心丸组。分别给以蒸馏水,心痛泰低、中、高剂量及麝香保心丸进行灌胃2周后,采用免疫组化法测新生微血管密度及缺血区心肌组织Notch1、Dll4蛋白的表达情况。结果:模型组大鼠的缺血心肌微血管密度、缺血心肌中的Notch1、Dll4蛋白表达均高于假手术组(P<0.05);心痛泰各剂量组及麝香保心丸组大鼠缺血心肌微血管密度、缺血心肌中的Notch1、Dll4蛋白表达均高于模型组(P<0.05)。结论:心痛泰具有保护缺血心肌的作用,这可能与其能激活Notch信号通路,上调Notch1、Dll4蛋白在缺血区的表达,促进血管新生有关。

丁苯酞通过激活VEGF/VEGFR2-Notch1/Dll4信号促进HUVECs形成血管

目的:探索缺血缺氧(H/I)条件下丁苯酞(NBP)通过激活血管内皮生长因子(VEGF)/VEGF受体2(VEGFR2)-Notch1/Delta样配体4(Dll4)信号促进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成的机制。方法:利用无血清培养基和缺氧罐模拟H/I条件,HUVECs传代培养后设置正常对照(control)组、H/I组、NBP高剂量(H/I+NBP_(high))组和NBP低剂量(H/I+NBP_(low))组,其中control组为常规培养的HUVECs,H/I组为H/I条件下培养的HUVECs,H/I+NBP_(high)组为在H/I环境下使用20μmol/L丁苯酞干预的HUVECs,H/I+NBP_(low)组为在H/I环境下使用5μmol/L丁苯酞干预的HUVECs。CCK-8法检测各组细胞的细胞活力,细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力,体外血管形成实验检测各组细胞成管能力,Western blot法检测VEGFR2、Notch1和Dll4的表达,ELISA法检测培养基中VEGF的表达,qPCR检测VEGF、VEGFR2、Notch1和Dll4的mRNA表达水平。结果:丁苯酞可以提高H/I条件下HUVECs的存活率,促进细胞的迁移和体外血管的形成能力,且H/I+NBP_(high)组比H/I+NBP_(low)组更加显著。丁苯酞可以提高VEGF、VEGFR2、Notch1和Dll4的mRNA及蛋白表达。结论:丁苯酞可以在H/I条件下促进HUVECs形成血管,其机制可能与VEGF/VEGFR2-Notch1/Dll4信号的激活有关。

Jagged1/Notch通路与肿瘤血管生成的研究进展

肿瘤的增殖、浸润和转移与肿瘤血管生成(tumor angiogenesis)密切相关,因此抗肿瘤血管生成己经成为肿瘤综合治疗的重要策略。Notch通路在内皮细胞的发育分化、干细胞分化、血管形成及肿瘤发生发展过程中具有重要作用。最近的一系列研究发现,Jagged1作为表达于肿瘤细胞表面的配体之一,可影响Notch信号通路,增强癌细胞VEGF活性,刺激肿瘤新生血管形成从而促进肿瘤生长、侵袭及转移。这一发现为完善肿瘤新生血管与肿瘤生长关系学说提供了新的研究方向。

人DLL1真核表达质粒的构建及过表达DLL1抑制人口腔鳞癌细胞SCC15的增殖

目的:构建人全长DLL1基因真核表达质粒及过表达DLL1对人口腔鳞癌细胞增殖的影响.方法:PCR扩增人全长DLL1基因,酶切和测序鉴定后克隆至真核表达载体pCMV-Tag4并构建真核重组质粒DLL1/pC MVTag4,瞬时转染HEK293T细胞并通过实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot鉴定DLL1的表达;进一步检测DLL1在SCC15等3株人口腔鳞癌细胞中的表达;DLL1/pCMV-Tag4瞬时转染SCC15细胞,Q-PCR和Western blot检测过表达及MTT检测DLL1过表达对细胞SCC15增殖的影响.结果:真核重组质粒DLL1/pCMV-Tag4在HEK293T细胞中成功表达;DLL1在口腔鳞癌细胞中的表达高于正常口腔细胞;DLL1/pCMV-Tag4在SCC15细胞中获得表达且过表达DLL1抑制SCC15细胞的增殖.结论:人全长DLL1分子在HEK293T及SCC15细胞中获得表达,过表达DLL1抑制口腔鳞癌细胞SCC15的增殖.

DAPT对结肠癌细胞株HT-29增殖及乙醛脱氢酶1、Notch信号通路受体和配体表达的影响

目的观察γ-分泌酶抑制剂(GSIs)DAPT对结肠癌细胞株HT-29增殖及结直肠癌肿瘤干细胞标志物乙醛脱氢酶1(ALDH1)、Notch信号通路受体Notch4、Notch信号通路配体DLL1表达的影响。方法体外培养HT-29细胞,取对数生长期细胞用于实验。分别以0、5、10、20、40、80μmol/L的DAPT作用于HT-29细胞24、48、72 h后,倒置显微镜下观察细胞形态,用MTT比色法检测细胞增殖能力(以OD值表示)。分别以0、20、40μmol/L的DAPT作用于HT-29细胞24 h后,采用RT-PCR法检测细胞中的ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA,分别采用Western blotting法和免疫组化法检测ALDH1、Notch4、DLL1蛋白。分析HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA及蛋白表达的相关性。结果DAPT对HT-29细胞的增殖抑制作用呈一定剂量、时间依赖性,40、80μmol/L浓度组培养48、72 h时细胞增殖能力低于培养24 h时(P均<0.05)。DAPT处理后的细胞形态出现典型凋亡状态改变。20、40μmol/L的DAPT作用后HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA相对表达量低于0μmol/L组(P均<0.05)。0、20、40μmol/L的DAPT作用后HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1蛋白相对表达量依次降低(P均<0.05)。免疫组化染色图像分析结果示,0、20、40μmol/L的DAPT作用后HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1蛋白表达OD值依次降低(P均<0.05)。HT-29细胞中ALDH1、DLL1 mRNA表达与Notch4 mRNA表达均呈正相关关系(r分别为0.997、0.998,P均<0.05)。HT-29细胞中ALDH1、DLL1蛋白表达与Notch4蛋白表达均呈正相关关系(r分别为0.998、0.999,P均<0.05)。结论 DAPT作用后,细胞增殖受到抑制,细胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA和蛋白表达下调;DAPT对HT-29细胞的增殖抑制作用可能与降低肿瘤干细胞特性、下调Notch信号通路受体与配体表达实现的。

miR-152-3p调控Notch1/DLL4通路对家兔深II度烧伤创面血管生成的影响

目的:探究微小核糖核酸(mi R)-152-3p调控果蝇Notch同源物1(Notch1)/Delta样配体4(DLL4)通路对家兔深II度烧伤创面血管生成的影响。方法:将50只新西兰家兔随机分为对照组、模型组、mi R-152-3p拮抗剂(antagomir)组、mi R-152-3p antagomir阴性对照+空载组、mi R-152-3p antagomir+Notch1敲低组,每组10只,除对照组外其余各组家兔构建深II度烧伤模型,分组给药处理后,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组家兔创面组织mi R-152-3p与Notch1、DLL4 m RNA表达;检测各组家兔创面愈合率及微循环血流灌注值(MPD);免疫组织化学染色检测各组家兔创面微血管密度(MVD);酶联免疫吸附反应(ELISA)检测各组家兔血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)及促血管生成素1(Ang1)水平;免疫印迹检测各组家兔创面组织VEGF、Ang1与Notch1/DLL4通路蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测兔脐静脉内皮细胞中mi R-152-3p对Notch1及DLL4的靶向调节。结果:与对照组相比,模型组家兔创面组织mi R-152-3p与Notch1、DLL4 m RNA表达升高(P<0.05),创面MPD及MVD、血清VEGF及Ang1水平、创面组织VEGF与Ang1蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组相比,mi R-152-3p antagomir组家兔创面组织mi R-152-3p m RNA表达降低(P<0.05),创面愈合率、创面MPD及MVD、血清VEGF及Ang1水平、创面组织Notch1、DLL4 m RNA及蛋白表达、创面组织VEGF与Ang1蛋白表达升高(P<0.05);mi R-152-3p antagomir阴性对照+空载组家兔各指标无明显差异(P>0.05);与mi R-152-3p antagomir组相比,mi R-152-3p antagomir+Notch1敲低组家兔创面组织mi R-152-3p m RNA表达无明显差异(P>0.05),创面愈合率、创面MPD及MVD、血清VEGF及Ang1水平、创面组织Notch1、DLL4 m RNA及蛋白表达、创面组织VEGF与Ang1蛋白表达降低(P<0.05)。mi R-152-3p可靶向下调兔脐静脉内皮细胞中Notch1及DLL4的表达。结论:敲低mi R-152-3p可通过上调Notch1/DLL4通路而增强家兔深II度烧伤创面血管生成,进而促进其创面愈合。

Notch通路在脓毒症多脏器损伤中的研究进展

1 Notch信号通路与脓毒症相关损伤经典的Notch信号通路是一条在进化上高度保守的通路,该信号通路是通过细胞与细胞之间配体和受体的相互作用,来控制着细胞的命运、增殖、分化、凋亡、血管生成以及血管重塑^([1])。目前在哺乳动物细胞中,发现四种不同类型的Notch受体(Notch1-4)和五种配体(Jag1、2和Dll1、3、4)。Notch1、Notch2、Notch3表达于多种器官,但Notch1的表达最为广泛,而每一种配体及受体的功能是独特的,比如DLL1可控制细胞分化和细胞间通讯,DLL3可诱导细胞凋亡,DLL4可激活NF-κB信号通路,JAG2促进细胞存活和增殖。

Notch1及其配体DLL4在子痫前期患者胎盘组织中的表达

子痫前期是妊娠期特有的严重并发症,在初产妇中占7％,表现为全身程度不同的因血管内皮受损的一系列临床症状,甚至引起胎儿生长受限.子痫前期患者滋养层细胞的侵袭通常较表浅,子宫螺旋小动脉重塑障碍,导致胎盘灌注减少.研究发现,Notch信号通路可与其他细胞因子一起调节细胞的增殖、分化和凋亡等[3];该通路具有4种Notch受体（Notch1、Notch2、Notch3、Notch4）和5种Notch配体（DLL1、DLL3、DLL4、JAG1、JAG2）,此信号通路主要依靠相邻细胞间的相互作用而激活.DLL4被认为是5种配体中惟一具有内皮特异性的配体.对Notch信号通路的研究发现,滋养层细胞及胚胎干细胞中均有Notch基因的表达,在胎盘血管形成及胚胎发育过程中起关键作用.鉴于胎盘本身的组织结构较为复杂,有关Notch信号通路在子痫前期胎盘中的研究不多,并且学者们提出的观点也不一致.本研究主要探讨该通路中Notch1受体及DLL4配体在子痫前期患者胎盘组织中的表达情况,为子痫前期的早期干预、改善预后提供分子生物学依据,为临床治疗提供新的靶点.

Notch1、Dll4蛋白在骨肉瘤的表达及临床意义

目的探讨Notch1及其配体Dll4在骨肉瘤的表达及其和血管生成的关系。方法采用免疫组化SP法检测62例骨肉瘤Notch1和Dll4蛋白的表达，并根据CD34染色结果计数微血管密度（MVD）。43例骨软骨瘤标本作为对照。结果（1）Notch1和Dll4在骨肉瘤表达的阳性率为85．5％、88．7％，骨软骨瘤表达阳性率为21．2％、23．6％，差异具有显著性（P〈0．05）；且Notch1和Dll4表达存在正相关（P〈0．05，r=0．842）。（2）Notch1和Dll4蛋白的阳性表达与骨肉瘤组织分化程度、Ennecking分期和有无转移密切相关（P〈0．05）。（3）Notch1或Dll4高表达组MVD显著高于低表达组（P〈0．05）。结论Notch1、Dll4在骨肉瘤组织中的表达上调与血管生成密切相关，可能在骨肉瘤发生、发展中起重要作用。