乳腺癌中转录因子DLX4与EMT相关蛋白的表达及意义

目的探讨转录因子DLX4与上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白在乳腺癌组织和乳腺细胞系中的表达及其相关性。方法收集100例乳腺癌及对应癌旁组织标本,采用免疫组化SP法和Western blot法检测乳腺癌组织和乳腺细胞系中DLX4与EMT相关蛋白E-cadherin和vimentin的表达,并分析三者与乳腺癌临床病理特征的关系。结果乳腺癌组织中DLX4和vimentin阳性率(68.0%和53.0%)显著高于癌旁组织(22.0%和28.0%)(P<0.05),乳腺癌组织中E-cadherin阳性率(32.0%)显著低于癌旁组织(76.0%)(P<0.05)。Western blot法检测结果显示,在高侵袭性乳腺癌细胞系中DLX4、vimentin均呈高表达,E-cadherin呈低表达;DLX4、E-cadherin及vimentin的表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移相关。Spearman相关分析结果显示,乳腺癌中DLX4与E-cadherin表达呈负相关(r_s=-0.505,P=0.000),DLX4与vimentin表达呈正相关(r_s=0.165,P=0.016)。结论乳腺癌中转录因子DLX4与E-cadherin表达呈负相关,与vimentin表达呈正相关,可能存在调控关系,从而促进乳腺癌的局部侵袭和远处转移。

急性髓系白血病中DLX4基因异构体的差异性表达及其临床相关性分析

目的探索DLX4基因异构体在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中的表达与甲基化态势及其临床意义。方法采用RT-qPCR法检测37例健康骨髓捐献者(对照组)、8例人白血病细胞株及153例AML患者骨髓单个核细胞中DLX4基因异构体(BP1及DLX7)表达及甲基化水平,并分析其临床意义。结果DLX4异构体BP1在AML中表达上调,异构体DLX7在AML中表达下调。异构体BP1启动子区域CpG岛呈完全未甲基化,异构体DLX7启动子区域CpG岛呈高甲基化态势。ROC曲线分析揭示DLX4异构体表达可作为AML辅助诊断的潜在分子标志。相关性分析发现,异构体BP1高表达与患者高白细胞计数、FLT3-ITD突变有相关性,异构体DLX7表达与临床参数无相关性。预后相关性分析揭示异构体BP1高表达非M3患者经过诱导化疗后完全缓解率显著低于BP1低表达非M3患者,而在异构体DLX7中无明显差异。此外,非M3及正常核型患者中,与BP1低表达组相比,异构体BP1高表达组的总生存期明显缩短。结论DLX4的2个异构体BP1和DLX7在AML中表达态势不同。其中,BP1表达上调与启动子甲基化无相关性,DLX7表达下调可能受其启动子高甲基化调控。此外,BP1高表达可能是AML患者预后不良的影响因素。

DLX4在子痫前期胎盘组织的表达及与上皮细胞间质化相关性的研究

目的:探讨DLX4在妊娠期高血压疾病中的作用及其对滋养细胞EMT的影响。方法:采用Western blot法分别检测子痫前期胎盘组织及缺氧培养的滋养细胞系JEG-3中DLX4蛋白表达的变化;通过实时PCR技术,比较缺氧条件下滋养细胞中DLX4、HIF-1α和E-cad表达变化的差异。结果:滋养细胞缺氧培养后DLX4蛋白表达明显下降(P<0.05),与其在子痫前期胎盘组织的表达变化一致;缺氧抑制滋养细胞中DLX4 mR-NA表达,同时伴有HIF-1α和E-cad mRNA表达增加。结论:缺氧引起滋养细胞DLX4表达下调,伴随EMT相关因子表达的改变。子痫前期滋养细胞侵袭力异常可能与缺氧引起DLX4表达下调及滋养细胞EMT异常有关。

同源异型盒基因DLX4在妊娠期高血压疾病中的表达研究

目的:检测妊娠期高血压疾病胎盘组织中同源异型盒基因DLX4的表达,探讨其在妊娠期高血压疾病发生、发展中的意义。方法:严格设置病例组和对照组,采用半定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫组化SABC法检测40例胎盘组织中DLX4mRNA和蛋白的表达情况。结果:DLX4 mRNA在子痫前期胎盘组织中的表达(轻度为0.17±0.05、重度为0.09±0.03)明显低于对照组(0.49±0.07,P<0.001)。DLX4蛋白在子痫前期胎盘中表达与对照组相比也显著降低(P<0.001)。结论:随着妊娠期高血压疾病临床症状的加重,胎盘组织中DLX4的表达呈明显下降趋势,同源异型盒基因DLX4参与了妊娠期高血压疾病胎盘的发育障碍及功能缺陷。

DLX4 RNAi抑制绒癌细胞黏附、侵袭能力的实验研究

背景与目的:绒毛膜癌是一种高度恶性的肿瘤,早期即可发生远处侵袭转移,但其机制目前尚不明确。DLX4是新近发现的同源异型盒转录因子,其异常表达与乳腺癌、结肠癌等多种肿瘤密切相关。本实验拟在既往发现DLX4在绒癌细胞株JEG-3中呈现高表达的基础上,通过RNA干扰(RNAinterference,RNAi)抑制JEG-3中DLX4的表达,探讨DLX4对绒癌细胞黏附、运动及侵袭能力的影响。方法:构建DLX4特异性的siRNA和阴性对照siRNA,脂质体转染绒癌JEG-3细胞,G418抗性筛选高表达阳性克隆;Western blot检测RNAi效果;分别用细胞-基质黏附实验、Transwell小室和Matrigel基质侵袭实验检测细胞黏附、运动和侵袭能力的变化。结果:DLX4 siRNA特异并有效的抑制了JEG-3细胞中DLX4的表达;转染DLX4 siRNA组(JEG-3 siDLX4)的细胞与细胞外基质的黏附率为(30.6±4.2)%,显著低于未转染组(JEG-3 nontransfection)的(57.2±4.0)%和转染了阴性对照siRNA组(JEG-3scDLX4)的(51.6±3.9)%(分别为P<0.01和P<0.05);体外细胞运动和侵袭实验结果显示,JEG-3 siDLX4组的穿膜细胞数分别为(31±3)和(21±4)个/高倍镜,显著低于JEG-3 nontransfection组的(68±5)和(64±4)个/高倍镜以及JEG-3 siDLX4组的(70±4)和(67±5)个/高倍镜(P<0.01),而后两组细胞间黏附、运动和侵袭能力方面差异均无显著性(P>0.05)。结论:RNAi阻断DLX4的表达,能够抑制绒癌细胞的黏附侵袭能力,为进一步研究绒癌侵袭转移的机制提供了思路。

可诱导稳定表达DLX4细胞系的构建及其表达分析

目的:建立一种可诱导稳定表达方法,并构建DLX4细胞系。分析DLX4细胞系的表达调控。方法:将DLX4全长基因克隆入pcDNA5/FRT/TO表达载体,将其转染入宿主细胞Flp-InTMT-RExTM-293细胞系,潮霉素B筛选或者阳性克隆。采用不同剂量的DOX或者不同作用时间对pcDNA5/DLX4细胞系进行诱导表达,用Western blotting检测DLX4表达情况。结果:构建了可被Doxycline(DOX)诱导的稳定表达pcDNA5/DLX4的细胞系。0.001μg/ml的DOX即可诱导pcDNA5/DLX4细胞系的表达,0.1μg/ml DOX即可诱导该细胞系表达达到高峰;DOX对该细胞系作用1h后即可诱导该细胞系表达,对其作用16h后该细胞系表达明显增强。结论:构建了可被DOX诱导稳定表达的DLX4细胞系,不同剂量的DOX和不同作用时间对DLX4细胞系表达有不同的影响。该细胞系的建立为深入探索DLX4的功能提供了一种新的有效方法和实验材料。

DLX4基因酵母双杂交系统的构建及自激活检测

目的构建DLX4酵母双杂交系统并鉴定其自激活作用。方法构建人胎盘酵母双杂交cDNA文库,并行PCR鉴定;构建3条DLX4诱饵质粒,包括pDEST32-DLX4(4-1C)、pDEST32-DLX4(4-1N)和pDEST32-DLX4(4-2);将DLX4诱饵质粒转入酵母M aV203菌株,并检测其在酵母细胞中有无自激活作用。结果 PCR证实成功构建了人胎盘酵母双杂交文库;3条DLX4诱饵质粒中,pDEST32-DLX4(4-2)和pDEST32-DLX4(4-1C)没有自激活作用,可用于文库筛选。结论成功构建了酵母双杂交文库和DLX4诱饵质粒,可用于筛选与DLX4相互作用的蛋白。

同源异型盒转录因子DLX4对绒癌细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨同源异型盒转录因子(DLX4)对绒癌细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:用RNA干扰(RNAi)抑制绒癌细胞JEG-3中DLX4的表达;流式细胞仪分析DLX4 RNA干扰对JEG-3细胞凋亡的影响;western blot检测与凋亡有关的蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-8以及bax的表达。结果:DLX4特异性的siRNA有效并特异的抑制了JEG-3细胞中DLX4的表达;DLX4的表达受抑制后,JEG-3细胞的凋亡增加,cleaved caspase-3、cleaved caspase-8的表达水平升高,而bax的表达水平无明显变化。结论:RNAi抑制DLX4的表达,可以促进JEG-3细胞的凋亡,其机制可能是通过转录调节caspase-3和caspase-8的水平,激活一系列与凋亡有关的蛋白,从而诱导JEG-3细胞的凋亡。

DLX4、Fas在妊娠期高血压疾病子痫前期胎盘中表达的研究进展

妊娠期高血压疾病(HDCP)子痫前期是产科严重的并发症,是孕产妇和围生儿死亡的主要原因。某些胎盘因子表达的异常导致了胎盘着床异常,也使其成为疾病标志性研究的新靶点。近年来发现的DLX4基因具有高度保守的同源异型盒序列,在胚胎的分化、增殖、机体代谢以及肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用。Fas/FasL系统表达平衡为免疫耐受提供了有力保证,一旦表达失衡,高表达Fas的胎盘滋养细胞异常凋亡,两因子的相关性可能引起HDCP的发生。

同源异型盒基因DLX4在乳腺肿瘤中的定量表达研究

目的 探讨同源异型盒DLX4基因在乳腺癌发生、发展进程中的可能作用。方法 采用实时荧光定量PCR技术检测 82例乳腺肿瘤组织及 2 2例癌旁正常腺体中DLX4mRNA的表达情况。结果 82例肿瘤组织中 ,有 5 3例呈DLX4阳性表达 (6 4 6 3% ) ,而在癌旁正常腺体中则表达很弱(4 2 2 ,18 18% ) ,差异具有显著性 (P <0 0 5 )。DLX4基因的过表达与病理组织学分级有关 (P <0 0 5 ) ,而与癌肿大小、淋巴结转移、病理类型、肿瘤家族史、雌激素受体及孕激素受体状态无关。不同病理组织分级的乳腺癌标本中DLX4基因的初始拷贝数分别为 (5 13± 0 90 )× 10 3,(1 4 1± 0 4 8)× 10 4 和(3 0 1± 0 5 3)× 10 4 拷贝 μgRNA ,随着组织学分级的升高 ,DLX4基因mRNA表达量呈上升趋势 (F =8 4 7,P <0 0 5 )。结论 DLX4基因在乳腺肿瘤中呈过度表达 ,可能在某种程度上参与了乳腺癌变的发生和发展。