Neurobasal^(TM)-A和DMEM/F12培养液对大鼠胎儿神经干细胞生长的影响

用带有 3 [H]的胸苷对分裂细胞进行标记 ,通过细胞计数仪测定细胞数量的方法 ,对比了大鼠胎儿神经干细胞在添加相同成分的 Neurobasal TM-A和 DMEM/F1 2培养液中的生长情况 .结果表明 Neurobasal TM-A在有 EGF和 b

自制DMEM/F12培养基对奶牛乳腺上皮细胞生物学功能的影响

验证自制DMEM/F12培养基与商品化DMEM/F12培养基相比是否会对奶牛乳腺上皮细胞生物学功能造成负面影响,为进一步研究氨基酸对乳蛋白合成影响及其机理奠定基础。从对奶牛乳腺上皮细胞增殖能力、泌乳相关基因表达和酪蛋白合成这几个方面比较自制DMEM/F12培养基与DMEM/F12培养基的差别。结果显示,自制DMEM/F12培养基对乳腺上皮细胞的增殖活力要显著高于DMEM/F12培养基(P<0.0001);自制DMME/F12培养基与商品化DMEM/F12培养基相比乳腺上皮细胞CSN1S1、CSN3基因表达显著上调(P<0.05),上调量分别达到了3.57倍和3.27倍,CSN1S2、CSN2基因表达量差异不显著(P>0.05);自制DMEM/F12培养基与商品化DMEM/F12培养基相比,对乳腺上皮细胞αS酪蛋白及β-酪蛋白的合成的影响差异并不显著(P>0.05)。由此得出,与商品化DMEM/F12培养基相比,自制DMEM/F12培养基在奶牛乳腺上皮细胞增殖、泌乳相关基因表达和酪蛋白合成方无负面影响。

达氏修正依氏培养基/F12的配制

目的建立达氏修正依氏培养基(DMEM)/F12的配制方法。方法 DMEM/F12配制所需物品均经过严格地消毒灭菌,配液用DMEM/F12粉剂1包+1000mL三蒸水+碳酸氢钠1.2g,在磁力搅拌器搅拌后,利用过滤装置连接真空泵过滤分装培养基;配液后的DMEM/F12液体4℃冰箱保存6个月,加入血清等保存4周。结果配制的DMEM/F12液体无污染,细胞培养效果佳。结论严格执行各种物品清洁消毒和无菌操作而配制的DMEM/F12能有效地用来培养细胞。

RPMI-1640和DMEM/F12培养基对大鼠颈环上皮细胞培养的比较研究

目的:比较大鼠颈环上皮细胞在不同培养基中的生长状况。方法:分离培养大鼠颈环上皮细胞,分别采用RPMI-1640和DMEM/F12两种培养基培养,用倒置显微镜观察细胞的生长状态,MTT比色法检测细胞增殖活性。结果:倒置显微镜下,两组细胞在接种24 h后细胞大量贴壁并伸展,14 d时RPMI-1640组细胞呈现明显的凋亡现象,DMEM/F12组细胞生长状态良好。两种方法培养的颈环上皮细胞增殖活性差异有显著性意义(P﹤0.05)。结论:DMEM/F12培养基较RPMI-1640更适合颈环上皮细胞的贴壁及增殖。

组织工程化人正常食管上皮细胞的培养

目的：在体外分离、培养食管上皮细胞，是研究组织工程食管的最基本环节。实验拟寻找适用于组织工程食管研究的食管上皮细胞培养方法。方法：实验于2007—05／11在兰州大学医学实验中心完成。①实验材料：取食管癌患者手术切除的正常食管长2．0～3．0cm，患者对试验知情同意。②实验方法：获取可用于组织工程的食管上皮细胞，常规传代培养。⑨实验评估：免疫组织化学染色、倒置相差显微镜下观察培养20min，1～4d细胞在含血清培养基DMEM＋F12（1：1）中的生长情况；四甲基偶氮唑盐法测绘1～6d细胞的生长曲线。结果：①免疫组织化学方法检测结果显示，90％以上细胞呈阳性，证明培养的细胞为食管上皮细胞。②正常细胞较大，呈球形悬浮于培养基中；约20min后开始贴壁，1d后大部分细胞贴壁生长并呈不规则圆形或多边形；2d后细胞开始成簇生长；三四天细胞达生长高峰，胞浆丰富，核大而圆。⑧培养第3天细胞生长达高峰，其吸光度值与第1，2，5，6天比较，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：应用含血清培养基DMEM＋F12（1：1）培养食管上皮细胞，方法简便，适合推广应用。

大鼠胎脑神经干细胞的分离和培养

从胚龄14.5～16.5d(E14.5～16.5)的大鼠胎脑组织获得大鼠胎脑神经干细胞(ratfe-talneuralstemcells,rFNSCs),培养于含有碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)的无血清培养液DMEM/F12中,用3[H]胸苷掺入试验检测EGF和bFGF对大鼠胚胎神经干细胞分裂和增殖的影响.BrdU结合反应和nestin免疫组化检测显示培养细胞在早期时代约90%以上具有分裂增殖能力并显示nestin阳性,而且这些细胞在培养过程中可以分化神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,证明分离培养的是神经干细胞,可用于移植、定向分化和基因转移的研究.

人表皮细胞培养方法的改进

表皮细胞体外培养技术的建立和发展,为烧伤治疗和皮肤病学研究等方面开拓了新的途径。目前国内外对表皮细胞培养技术仍处在不断探索和研究阶段。为进一步寻求更佳的表皮细胞培养方法,笔者在前人工作的基础上对表皮细胞的分离和培养过程进行了改进并获得成功。

表达重组蛋白的CHO-GS细胞的无血清培养

采用DOEHLERT和HADAMARD统计方法建立了一个适于重组CHO-GS细胞生长和外源蛋白表达的无谷氨酰胺无血清培养基SFMB.对多种硫酸多聚糖进行了考察,选取低分子量硫酸葡聚糖,添加浓度为25 mg/L,可以避免细胞结团.用SFMB在方瓶中培养重组CHO-GS细胞,细胞生长优于含10%小牛血清的无谷氨酰胺DMEM/F12培养,最大细胞密度提高了40.7%,外源蛋白的表达水平也得到提高.在100 ml转瓶中分批培养,最大细胞密度和蛋白表达分别达到1.5×106 cells/ml和0.48 mg/L.

SD大鼠原代颌下腺细胞体外培养方法的改良

目的研究SD大鼠颌下腺细胞体外培养的方法，使细胞能顺利的在体外培养并能提供有功能的神手细胞。方法获取新生SD大鼠幼仔颔下腺组织，经酶消化后培养，以PBS和DMEM＋F12为冲洗液，比较两者对细胞生长的影响。结果体外培养的颌下腺细胞以DMEM＋F12为冲洗液细胞能持续的生长。结论体外培养的颔下腺细胞以DMEM＋F12为冲洗液能获得增殖活跃传代细胞，并为颌下腺研究提供种子细胞。

奶牛卵丘细胞无血清体外培养液的优化

采集奶牛卵巢表面卵泡中的卵丘一卵母细胞复合物，通过胰蛋白酶消化获得卵丘细胞，分别利用对照组DMEM／F12培养液和4个试验组McCoy，s5a培养液对卵丘细胞进行原代及传代培养。试验1组用McCoy，s5a基础培养液，试验2组在McCoy＇s5a基础培养液中添加29ng·mL-1的睾酮，试验3组同时添加29ng·mL-3叫的睾酮和15μg·mL-3的绿茶多酚，

Bmp8a和Bmp8b基因在体外培养小鼠卵巢颗粒细胞中的表达

为研究体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞Bmp8a和Bmp8b基因的表达情况，用IOIUPMSG皮下注射21-23日龄健康雌性IcR小白鼠，48h后刺破卵泡获取颗粒细胞，置入10％FBS的DMEM／F12中体外培养5d，

多房棘球绦虫重组Bb—EmⅡ／3-Em14—3—3疫苗诱导BALB／c小鼠T淋巴细胞亚群变化的研究

目的探讨多房棘球绦虫（Em）重组Bb-EmⅡ／3-Eml4．3．3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4＋和CD8＋T淋巴细胞亚群的变化。方法用重组Bb-EmⅡ／3-Em14．3．3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种以及口服接种免疫BALB／c小鼠，双歧杆菌（Bb）液和磷酸盐缓冲液（PBS）为对照，12周后，用50个Em原头蚴腹腔注射进行攻击，攻击感染18周剖杀小鼠，检获泡球蚴组织，称取重量，计算减蚴率；分离脾细胞，流式细胞仪检测脾CD4＋和CD8＋T淋巴细胞亚群的百分比。结果疫苗免疫组（皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种、口服接种）小鼠检获泡球蚴重量[（0．77±0．52）、（0．87±0．60）、（2．17±0．50）、（3．06±0．15）g]均明显低于PBS对照组[（3．54±0．32）g．P〈0．05或〈0．01]。疫苗免疫组（皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种、口服接种）小鼠脾CD4＋T细胞亚群[（28．2±2．5）％、（25．0±2．7）％、（24．0±1.3）％、（23．0±1．8）％]显著高于PBS对照组[（16．1±2．2）％，P均〈0．01]；各疫苗免疫组小鼠CD8＋T细胞亚群水平均轻微升高，但组间比较差异无统计学意义（F=1．36，P〉0．05）。皮下注射组小鼠CD4＋T细胞亚群高于肌肉注射组、鼻腔黏膜接种组和口服接种组（P均〈0．05）。结论CD4＋T细胞亚群在Em重组Bb-EmⅡ／3-Em14-3-3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起关键作用，疫苗皮下注射是一种较好的免疫途径。